转染Lgr5基因对结肠癌细胞株体外生物学特性影响的研究

目的构建pIRES2-EGFP-Lgr5重组表达载体，获得SW480／Lgr5瞬时基因转染细胞株，并探讨转染Lgr5基因对结肠癌细胞株生物学特性的影响。方法运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术从结肠癌组织中获得Lgr5全长基因，经双酶切（XhoI和BamHI）连接入真核表达载体pIRES2-EGFP中，利用脂质体法转染SW480细胞，经流式细胞术、Westernblot、免疫细胞化学法检测Lgr5分子的表达；CCK-8法和悬滴实验分析Lgr5对结肠癌细胞增殖率和成球能力的影响，划痕实验分析Lgr5对结肠癌细胞迁移能力的影响。结果成功构建真核表达载体pIRES2。EGFP／hLgr5，并获得SW480／Lgr5瞬时基因转染细胞株；转染Lgr5基因的结肠癌细胞体外增殖速度加快，形成的细胞球大而紧密但迁移能力下降。结论Lgr5基因转染促进结肠癌细胞株体外的生长，为进一步研究人Lgr5分子的生物学特性及其在结肠癌中的作用机制奠定了基础。

子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5对下游增殖、侵袭相关基因表达的影响

目的:探讨子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5对下游增殖、侵袭相关基因表达的影响。方法:选择在本院接受手术治疗的子宫内膜癌患者40例,检测子宫内膜癌组织、癌旁正常组织中TRPV1、LGR5基因的表达量,根据其中位数分为高TRPV1组、低TRPV1组,高LGR5组、低LGR5组,各20例。对比不同TRPV1、LGR5表达量的子宫内膜癌组织中,增殖、侵袭基因表达量的差异。结果:子宫内膜癌组织中TRPV1、LGR5基因的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。高TRPV1组、高LGR5组病灶组织中增殖基因HMGB1、SRPX2、Wip-1mRNA的表达量分别高于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05),ITLN-1 mRNA的表达量分别低于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05);高TRPV1组、高LGR5组病灶组织中侵袭基因MTA1、hnRNP H、Snail mRNA的表达量分别高于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05),Dickkopf、DKK1 mRNA的表达量分别低于低TRPV1组、低LGR5组(P<0.05)。结论:子宫内膜癌病灶内TRPV1、LGR5基因表达量异常增高,与下游增殖、侵袭基因表达量直接相关,共同影响病程进展。

LGR5 shRNA真核表达载体的构建及在MKN28细胞的干扰效果检测

构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建成功的特异性表达载体(pGPU6/GFP/Neo-LGR5)转染人胃腺癌细胞系后,应用荧光显微镜分析转染效率.利用荧光实时定量PCR对细胞内源性LGR5的表达进行检测.测序结果表明:靶向LGR5的重组pGPU6/GFP/Neo-LGR5载体构建成功.荧光实时定量PCR结果显示:与对照组相比,LGR5shRNA真核表达载体可以使胃腺癌细胞中LGR5的mRNA水平明显降低78.96%(P<0.01).本工作可以为进一步研究LGR5在胃癌发生发展中的作用提供帮助.