酶受体分析法测定3AO细胞LH/hCG受体结合特性

建立培养细胞的酶受体分析法(enzyme receptor assay, ERA),应用ERA研究卵巢癌细胞株3AO的LH/hCG受体特性。采用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP) 人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, hCG)的酶标配体交联物, 与培养包被的3AO细胞在适当的条件下建立 ERA,并以人卵巢癌细胞株SKOV 3作为阴性对照, 测定3AO细胞膜上LH/hCG受体的竞争结合、特异性结合、饱和结合特性并计算受体的最大结合容量(Bmax)和解离常数(Kd)。ERA测得 3AO细胞 LH/hCG受体的 Bmax为 3.65mmol/g蛋白, Kd 为0.41nmol/L,未标记配体 hCG抑制 LH/hCG受体对酶标配体(HRP hCG)特异结合的IC50为0.92μmol/L。结论: 竞争结合实验、特异性结合实验、饱和结合实验表明 3AO细胞膜上存在高亲和力的LH/hCG受体。

大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体cDNA在昆虫细胞中的高效表达

研究了大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中的表达，并对其产物性质作了初步鉴定。ＳＤＳＰＡＧＥ银染和免疫印迹结果显示，表达产物呈两条带，分子量为３８５ｋＤａ的主带和分子量为４０ｋＤａ的次带。１２５ＩｈＣＧ结合印迹分析表明，表达产物Ｒ３１６具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析结果显示，重组受体Ｒ３１６和配基ｈＣＧ有较高的亲和力，平衡解离常数Ｋｄ为８１５×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ。表达产物为与膜结合的蛋白。

层粘连蛋白对大鼠卵巢排卵前颗粒细胞hCG诱导的孕酮分泌的影响

目的研究层粘连蛋白(LN)对大鼠卵巢排卵前颗粒细胞人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的孕酮分泌的影响及可能的作用机制。方法分离未成熟大鼠排卵前颗粒细胞,分3组进行培养:LN铺板组、未铺板组及LN铺板同时加入抗整合素α6单抗(GoH3)组。观察比较细胞贴壁情况。血清培养48h后加入hCG,无血清条件下再培养48h后收集培养液作孕酮测定及黄体生成素(LH)/hCG受体分析。结果LN铺板组颗粒细胞6h即可贴壁及展开,而未铺板组16h开始贴壁及展开;无论hCG加入与否LN均可显著刺激颗粒细胞孕酮的产生,且LN能显著增强hCG诱导的颗粒细胞孕酮分泌,5μg/ml的GoH3能明显抑制LN的此刺激作用。实验还观察到LN使颗粒细胞LH/hCG受体亲和力升高,受体数目上调。结论LN通过与细胞表面黏附分子整合素α6β1相互作用,可能作为卵巢内的一种局部调节因素,干扰LH/hCG受体功能而增强颗粒细胞孕酮的产生,在围排卵期颗粒细胞黄素化过程中发挥重要效应。

醋酸棉酚抑制大鼠黄体细胞生孕酮作用机理的研究

本文在体外研究了醋酸棉酚抑制大鼠黄体细胞生孕酮作用的机理。结果表明，对黄体细胞孕酮生成有明显抑制作用的各剂量棉酚组，在４ｈ培养期间，对黄体细胞活力无明显影响，但却显著降低黄体细胞上的黄体生成素／人绒毛膜促性腺激素（ＬＨ／ｈＣＧ）受体数目。结果提示，棉酚可能直接作用于黄体细胞上的ＬＨ／ｈＣＧ受体。

黄体生成激素人绒毛膜促性腺激素受体在子宫内膜腺囊型增生过长组织中的表达

目的 测定子宫内膜腺囊型增生过长组织中是否存在LH/hCG受体。方法 采用免疫组化ABC法。结果 证实子宫内膜腺囊型增生过长组织中存在着LH/hCG受体 ,阳性率为 6 3 33 % ,与正常对照组相似 (6 0 % ,P >0 0 5 )。阳性程度高于正常对照组 (P <0 0 5 )。结论 子宫内膜腺囊型增生过长组织中存在LH/hCG受体 ,为功血新的内分泌治疗提供了理论依据。