DGGE、T-RFLP、LH-PCR对两种活性污泥的微生物种群多样性分析的比较

采用基于PCR扩增的分子生态技术DGGE、T-RFLP和LH-PCR,对2种典型污水处理系统中的活性污泥(生活污泥、焦化污泥)进行微生物种群多样性分析;并以此比较3种技术的优劣,提出不同应用条件下研究方法的选择依据。根据实验结果:DGGE得到的条带较多,但误差来源也最多;T-RFLP技术较为灵敏,但需要选择适当的内切酶,严格控制酶切条件,并且文库比对误差较大;而LH-PCR操作简单,结果稳定性较高。虽然目前尚无法判断3种方法的准确性,但LH-PCR在活性污泥的微生物种群多样性分析中已显示出潜在优势。

应用LH-PCR研究党参、麻黄和独一味内生细菌多样性

通过直接提取药用植物样品的总DNA,采用长度多态片段PCR(length heterogeneity PCR,LH-PCR)技术研究四川省甘孜藏族自治州的党参、麻黄和独一味3种药用植物内生细菌多样性.结果表明:同种植物根、茎、叶的LH-PCR图谱相似度很高,条带丰富度差别不大;但不同植物样品之间的差异较大.党参的植物样品条带丰富度最大,麻黄次之,独一味最低.3种药用植物中474 bp长度的细菌是绝对的优势菌群.植物内生细菌多样性与土壤速效磷呈负相关,而与土壤pH值呈正相关.海拔和土壤总氮是影响植物样品内生细菌多样性分布的两个重要环境因子.LH-PCR所得的种群信息能较直观地反映不同植物样品间细菌多样性的差异.因此LH-PCR适用于分析药用植物内生菌多样性.

出雏至性成熟绍鸭卵巢FSH-R与LH-R mRNA表达的变化

用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测绍鸭出雏至 90日龄卵巢卵泡刺激素受体 (FSH R)和黄体生成素受体 (LH R)mRNA含量的变化。结果表明 ,卵巢FSH RmRNA水平在 30和 6 0日龄较高 ,且 30日龄时极显著高于 1和 90日龄 (P <0 0 1) ,与该阶段较高的卵巢相对生长速度相对应 ;而卵巢LH RmRNA水平随日龄逐渐升高 ,30、 6 0和 90日龄极显著高于 1日龄 (P <0 0 1) ,90日龄显著高于 30和 6 0日龄 (P <0 0 5 )。提示 :卵巢在早期发育阶段 ,尤其是快速增重期 ,对FSH的反应性较高 ;而接近性成熟时 ,可能由于卵泡发育的关系而对LH的反应性升高。

大鼠颌下腺黄体生成素及其受体的定位、核心片段的克隆及序列分析

目的探讨大鼠颌下腺组织中是否表达黄体生成素(LH)及其受体(LHR),为进一步研究LH对颌下腺的功能调节提供理论依据。方法采用免疫组织化学SABC和原位杂交方法进行定位研究;应用RT-PCR方法克隆获得LH及LHR基因的cDNA核心序列,并进行序列分析。结果大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞呈LH和LHR免疫反应阳性。阳性物质分布于胞浆,胞核呈阴性反应。上述细胞同样含有LH和LHR mRNA杂交信号,信号物质亦分布于胞浆内,胞核呈阴性反应。从大鼠颌下腺组织中扩增的LH及LHR基因的特异性条带经序列分析发现,扩增产物的LH基因序列与文献报道的大鼠腺垂体的完全一致;扩增产物的LHR基因序列与大鼠睾丸组织的完全一致。结论大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞既能产生LH,又能表达LHR,提示LH对颌下腺浆液性腺泡上皮细胞的作用可能是通过自分泌或旁分泌来实现的。

半滑舌鳎促黄体激素基因克隆和表达分析及其血清浓度测定

利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中促黄体激素(LH)基因cDNA全长序列。该基因全长670 bp,开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸。与其他脊椎动物的LH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明:半滑舌鳎LH与鲽形目和鲈形目同源性高58%～68%。另外,半滑舌鳎LH含有12个保守的半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点(19～21 NQT)。实时荧光定量组织表达分析表明,LH mRNA在脑、垂体、卵巢等组织中表达,垂体中表达量最丰富,其他组织尤以脑、性腺表达量较高,推测半滑舌鳎LH可能具有广泛的垂体外生理功能;实时荧光定量PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎LH表达水平进行测定,结果表明,LH mRNA在Ⅱ～Ⅵ各繁殖周期的脑、垂体、卵巢3种组织都有表达,但表达水平有差异,在Ⅳ、V期表达量最丰富,说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。利用125I标记的放射免疫测定(RIA)技术检测繁殖周期半滑舌鳎血清LH浓度,结果表明LH在V期含量最丰富,也说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。

血清黄体生成素与卵泡刺激素比值及雄激素受体基因多态性与多囊卵巢关系的探讨

目的探讨血清黄体生成素(LH)与卵泡刺激素(FSH)比值在多囊卵巢(PCOM)患者中的参考价值;探讨雄激素受体(AR)基因rs6152G/A多态性与PCOM的关系。方法收集2016年6—12月在贵州医科大学附属医院生殖中心就诊的PCOM患者共57例,无PCOM的不孕患者34例,记录患者B超下双侧卵泡数目及基础性激素值,并提取全血DNA,用聚合酶链反应法(PCR)扩增AR基因含rs6152基因位点的片段并测序。结果(1)PCOM组较对照组患者年龄偏小、窦卵泡数(AFC)明显增多,睾酮值增加,差异有统计学意义(P<0.01);将LH/FSH比值进行分组比较,当LH/FSH≥1时,睾酮值和AFC数较LH/FSH<1组明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)随着LH/FSH比值的增高,携带易患高雄激素血症(HA)AR基因rs6152A基因型的患者人数增加,但相关趋势无统计学意义。结论 (1)LH/FSH≥1是PCOM患者提前干预的重要指标,可能会减少多囊卵巢综合征(PCOS)的发生。(2)携带AR基因rs6152A基因型的患者易出现PCOM。