结肠癌细胞系LHX6基因启动子甲基化检测与分析

为探讨结肠癌细胞SW480和HT-29中LHX6基因启动子区CpG岛的甲基化状态,分析去甲基化与结肠癌细胞增殖的关系,用甲基化特异性PCR对SW480和HT-29细胞的LHX6基因启动子区域CpG岛进行检测,对比经5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理后两株细胞该区域甲基化水平之间的差异,用(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝)(MTT)法检测5-Aza-CdR对其增殖的影响,观察5-Aza-CdR对细胞形态的影响.结果表明,SW480与HT-29细胞的LHX6基因启动子区域CpG岛均存在甲基化,分别为41.9%和28.6%;经5-Aza-CdR处理后,SW480甲基化率由41.4%降低到39.7%,HT-29甲基化率由27.4%降低至18.5%(p<0.05);两株细胞的增殖明显被抑制.结肠癌细胞系SW480和HT-29的LHX6基因均存在不同程度的甲基化,研究结果为LHX6可能作为结肠癌肿瘤检测的新分子靶标奠定基础.

LHX6基因在肺癌中的甲基化及表达

目的分析LHX6基因在肺癌组织和肺癌细胞系中的甲基化情况及其表达,并初步探索LHX6基因生物学功能。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对88例配对肺癌患者肺癌组织和癌旁正常组织以及肺癌细胞系中LHX6基因甲基化情况进行检测;应用RT-PCR,qPCR和免疫组化方法对正常肺组织、肺癌组织、癌旁组织和肺癌细胞系中的LHX6基因mRNA和蛋白表达情况进行检测;对LHX6基因过表达处理检测该基因对肿瘤细胞的生长、增殖影响探索其生物学功能。结果 LHX6基因在肺癌组织与肺癌细胞系中发生明显高甲基化(P<0.01),且该基因在肺癌组织和肺癌细胞系中呈现了表达下降情况(P<0.01)。过表达LHX6基因后可以明显抑制肿瘤细胞的生长和增殖。结论 LHX6基因在肺癌中是一个受甲基化调控的基因,该甲基化程度影响该基因表达,该基因具有抑制肺癌的作用,是一个典型的抑癌基因。

LHX6基因抑制肺腺癌的转移机制

目的探究LHX6基因在抑制肺腺癌转移过程中的具体机制及临床意义。方法利用公共数据库分析LHX6基因表达水平对不同病理类型肺癌预后及转移的相关性及可能的信号通路,采用体内差异表达肿瘤细胞模型和体外裸鼠皮下成瘤模型,评价LHX6基因抑制肺腺癌转移的作用;利用Western Bolt、Top/Fop、Flash、荧光素酶报告实验对LHX6基因抑制肺腺癌转移的具体机制进行研究。结果 LHX6基因在体外实验和体内实验均能抑制肺腺癌细胞的增殖和转移,该基因抑制肺腺癌转移的具体机制为转录沉默Wnt/β-连环蛋白通路抑制了Wnt/β-连环蛋白,LHX6基因表达情况与肺腺癌患者临床结局和远处转移明显相关。结论 LHX6基因对肺腺癌细胞增殖和迁移有明显的抑制作用,其主要通过转录沉默Wnt/β-连环蛋白通路而抑制肺腺癌细胞的增殖和转移,且该基因表达水平与肺腺癌患者临床预后和远处转移明显相关。

LHX6基因在肝癌转移中的作用机制及临床预后意义

目的通过对肝癌切片免疫组化研究观察侵袭指标的表达状况,体外培养人肝癌细胞株Hep G2,利用细胞建立肝癌动物模型,通过上调和下调LHX6基因表达,观察LHX6对肝癌细胞黏附、迁移能力以及肿瘤形成的影响。方法对肝癌标本切片进行免疫组织化学染色,观察各项指标的表达情况以及相关性。设计LHX6特异性引物,分别用质粒转染及si RNA转染上调和下调体外培养的人肝癌细胞株Hep G2中LHX6基因表达水平,通过RT-PCR法检测LHX6基因相对表达量,MTT法检测肝癌细胞体外增殖能力,细胞划痕实验检测肝癌细胞体外迁移侵袭能力。制备LHX6稳定高/低表达的肝癌细胞株,建立原位和皮下肝癌动物模型,观察瘤块大小、皮下浸润、远处转移和腹腔播散情况,记录皮下肿瘤生长曲线。结果 LHX6基因的表达与E-cadherin的表达呈正相关,与Vimentin、Snail的表达呈负相关。质粒转染可以上调LHX6表达,抑制肝癌细胞体外黏附、迁徙、侵袭、克隆形成;而si RNA转染可以下调LHX6表达,促进肝癌细胞体外黏附、迁徙、侵袭、克隆形成。低表达LHX6可以促进肿瘤的发生转移,而高表达LHX6可以抑制肿瘤的发生转移。结论 LHX6基因、E-Cadherin的高表达与Vimentin、Snail的低表达是促进肝癌预后的保护因素。高表达LHX6可以抑制肝癌细胞的增殖和转移,而低表达LHX6可以促进肝癌细胞的增殖和转移,两者呈负相关关系。这对于肝癌靶向治疗和临床预后具有重要的指导意义。