白羽番鸭LIF基因克隆及其组织表达差异分析

【目的】探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)基因在白羽番鸭中的生物学功能,阐明其在下丘脑、垂体、卵巢、输卵管膨大部、子宫组织中的表达模式。【方法】以白羽番鸭卵巢组织为研究对象,采用cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆白羽番鸭LIF基因序列,并进行相似性比对和系统进化树构建;通过生物信息学方法分析LIF蛋白理化性质及结构。利用实时荧光定量PCR技术检测LIF基因在白羽番鸭下丘脑、垂体、卵巢、输卵管膨大部、子宫5个组织中的相对表达量。【结果】克隆得到白羽番鸭LIF基因序列长1820 bp,其中CDS区长636 bp,编码211个氨基酸。核苷酸序列相似性比对结果表明,白羽番鸭LIF基因序列与凤头潜鸭、绿头鸭、棕硬尾鸭、黑天鹅、金丝雀、鹌鹑、鸡、山雀的相似性分别为99.36%、99.21%、99.21%、98.11%、92.03%、90.68%、90.58%和87.60%。系统进化树分析表明,白羽番鸭与凤头潜鸭的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。白羽番鸭LIF蛋白是碱性亲水的稳定蛋白,有16个磷酸化位点、7个N-糖基化位点及1个信号肽,主要定位于细胞外和溶酶体;LIF蛋白质二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,蛋白质三级结构预测结果与二级结构一致。白羽番鸭LIF蛋白可能与IL6ST、CNTFR、IL6、OSMR、LIFR、IL6R、STAT3、CNTF、IFNGR1、IFNGR2蛋白具有相互作用。组织表达图谱显示,LIF基因在白羽番鸭5种组织中均有表达,其中就巢期白羽番鸭LIF基因表达量在输卵管膨大部、卵巢组织显著高于产蛋期(P<0.05);两个时期LIF基因在输卵管膨大部的表达量均最高,且显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了白羽番鸭LIF基因,其在输卵管膨大部的表达量显著高于其他组织,且就巢期表达量高于产蛋期。结果为探究白羽番鸭卵巢发育的调控机制提供理论依据。

LIF基因与长白母猪繁殖性状的关联分析

猪繁殖性状遗传力低,表型选择基本无效。因此,近年来研究遗传标记与猪繁殖性状的相互关系成为人们探索的热点。研究表明,血病抑制因子(LIF)具有促进附植前胚胎发育的功能,是胚胎正常附植必须的生长因子。检测了长白猪LIF基因外显子3中C>T突变的基因型,分析了该基因与长白猪繁殖性状的相关关系。结果表明,AA和AB基因型母猪的产仔数接近,均显著或极显著高于BB基因型。

小鼠早期胚胎发育期间LIF基因表达的研究(简报)

白血病抑制因子(Leukemia inhibitory fac-tor,LIF)是近年来研究较为广泛的细胞生长调节因子之一。最初发现LIF能够在体外诱导小鼠髓样白血病细胞株M1细胞向正常细胞分化,进一步分离纯化蛋白以及克隆基因后发现LIF在体外还具有多种功能,作用于不同的靶细胞时引起的生理效应也各不相同。

小鼠动情周期子宫内膜LIF基因表达研究

目的：探索白血病抑制因子（ＬＩＦ）基因在小鼠动情周期子宫内膜的表达情况。方法：采用ＲＴ－ＰＲＣ技术对小鼠动情周期各个时期ＬＩＦ基因表达进行检测。结果：动情周期、动情前期和动情期均未检测到ＬＩＦ基因表达，而动情后期子宫内膜检测到ＬＩＦ基因强表达。结论：推测ＬＩＦ基因表达受母体自身激素水平改变的调控，且主要涉及孕激素，而与雌激素关系不大。

LIF基因转染的ES细胞生长与分化特性的研究

我们将人D型LIF cDNA以正反两种方向分别克隆到载体pKCR 3,并引入neo^r基因,构建成pSVLD(+)和pSVLD(-)质粒,按磷酸钙沉淀法分别转染ES-5胚胎干细胞,经G418和不同浓度LIF条件培液共同筛选、Nor-thern和Southern分析以及ES-5细胞集落分化抑制能力测定,建立了过度表达分泌LIF的ESL(+)细胞株和表达外源反义LIF RNA的ESL(-)细胞株。我们发现,ESL(+)A2细胞能够在无外源LIF常规培液下至少传13代以上,仍能正常生长和传代,并保持与ES-5细胞同样的体外生长的特征性形态,以及具有干细胞特点和发育多潜能性,表明过度表达LIF确实能使ES细胞完全脱离对外源LIF条件培液的依赖性;而表达反义LIP RNA的ESL(-)细胞对培液中LIF浓度的依赖性明显升高,也更易分化,说明ES细胞内源LIF基因的表达水平虽低,但对于抑制ES细胞的分化仍可能是必需的。形态学观察发现,体外悬滴培养中经10^(-6)mol/L RA诱导后,过度表达LIF并未产生抑制ESL(+)A2细胞分化的现象,和亲本ES-5细胞比较,也未发现其明显改变了10^(-6)mol/L RA对ESL(+)A2细胞诱导分化的方向;而相同条件下,表达外源反义LIF RNA,则使ESL(-)B5细胞更易于向形态明确的细胞包括成纤维样和梭样细胞分化。上述细胞株的建立,提供了一个研究在不添加LIF的常规培液中生长的ES细胞或表达外源反义LIF RNA的ES细胞的生长分化的模型。

人LIF基因与增强型绿色荧光蛋白融合表达载体的构建及转染

目的:构建携带人LIF基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合表达载体,并转染人胚肺成纤维细胞,为研究LIF在维持人胚胎生殖细胞自我更新中的作用机制奠定基础.方法:以重组质粒pcDNA3.1/lif为模板,PCR扩增LIF基因,将扩增片断双酶切后连接到质粒pEGFP-Nl中,形成重组表达载体pEGFP-Nl/lif,并用脂质体法转染人胚肺成纤维细胞,荧光显微镜下观察,RT-PCR及Western杂交检测融合蛋白的表达.结果:成功构建融合表达载体pEGFP-N1/lif,在人胚肺成纤维细胞实现表达,检测到融合蛋白EGFP-LIF.结论重组pEGFP-N1/lif载体构建成功,可用于标记LIF蛋白,为进一步研究LIF在维持人胚胎生殖细胞自我更新中的作用机制奠定基础.

NAC饲喂对努比亚山羊LIF和HOXA10基因在性腺轴组织表达的影响

N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)是一种抗氧化剂,对动物的繁殖性能具有重要作用。本研究以努比亚山羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测LIF和HOXA10基因在正常饲喂组(空白对照组)和0.07%NAC饲喂组(实验组)性腺组织卵巢、输卵管、下丘脑、子宫和垂体中的表达变化。结果表明:LIF和HOXA10基因在5个组织中均有表达;LIF基因在对照组下丘脑中表达量最高、输卵管中表达量最少,在实验组卵巢中表达量最高、下丘脑中表达量最少;实验组中卵巢LIF基因的表达量显著高于对照组,而下丘脑中LIF基因的表达量显著低于对照组;HOXA10基因在对照组下丘脑中表达量最高、输卵管和垂体中表达最少,在实验组卵巢中表达最高、垂体中表达最少;实验组中卵巢HOXA10基因的表达量显著高于对照组,垂体中HOXA10基因的表达量显著低于对照组。研究结果揭示0.07%NAC可促进努比亚母山羊妊娠前期LIF和HOXA10基因在卵巢、输卵管和子宫中的表达,下调LIF和HOXA10基因在下丘脑和垂体中的表达。本研究结论为进一步研究NAC对山羊繁殖性能的影响提供基础资料。

侧枝萌发诱导基因(LIF)的原核表达与农杆菌介导转化麻风树幼叶

麻风树(Jatropha curcas L.)的有限分枝是限制麻风树油产量的最主要因素之一,为了奠定基因调控麻风树分枝的基础,研究并优化了侧枝萌发诱导基因LIF(lateral shoot-inducing factor)的原核表达条件,并成功获得了重组蛋白。通过研究农杆菌浓度、抗生素浓度建立了稳固高效的麻风树农杆菌((LBA4404)高效转化体系;将LIF基因转入麻风树基因组中,通过GUS染色、PCR、Southern blot检测,确定了LIF基因已经成功转化入麻风树基因组中,获得了高达(23.91±5.78)%的转化率。

复发性流产和不明原因不孕患者子宫内膜白血病抑制因子表达研究

目的探讨白血病抑制因子(leukaemiainhibitoryfactor,LIF)在复发性流产和不明原因不孕患者黄体中期子宫内膜的表达情况。方法采用实时荧光定量PCR技术,对31例不明原因不孕和30例复发性流产患者黄体中期子宫内膜LIF表达量的测定,对照组34例为继发性不孕患者(输卵管阻塞的)黄体中期子宫内膜。结果不明原因不孕组妇女子宫内膜中LIF表达量(M)为(169.00ng/l),与对照组(M)为(240.00ng/l)相比,差异有显著性(P<0.01);习惯性流产组LIF表达量(M)为(90.25ng/l),与对照组相比,差异有显著性(P<0.01),复发性流产组与不明原因不孕组相比差异无显著性(P>0.05)。结论LIF基因可能在启动胚泡着床和维持妊娠方面有重要作用,黄体中期子宫内膜LIF基因表达量的减少可能是导致不明原因不孕和复发性流产的原因。