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miR-let-7b-5p靶向调控LIMD2对胃癌细胞间质-上皮转化的影响
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作者 伍苏娟 汪金燕 牛涛 《中国现代普通外科进展》 CAS 2023年第4期263-266,272,共5页
目的:探究微小RNA(miR)-let-7b-5p靶向调控含LIM域2蛋白(LIMD2)对胃癌(GC)细胞间质-上皮转化(MET)的影响。方法:采用qRT-PCR检测GES-1、SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中miR-let-7b-5p相对表达水平;构建绿色荧光蛋白(GFP)和miR-let-7b... 目的:探究微小RNA(miR)-let-7b-5p靶向调控含LIM域2蛋白(LIMD2)对胃癌(GC)细胞间质-上皮转化(MET)的影响。方法:采用qRT-PCR检测GES-1、SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中miR-let-7b-5p相对表达水平;构建绿色荧光蛋白(GFP)和miR-let-7b-5p稳定过表达细胞株,qRT-PCR法检测miR-let-7b-5p过表达效率;生物信息学和双荧光素酶实验预测并验证miR-let-7b-5p与LIMD2靶向关系;构建pcDNA5-LIMD2过表达载体,将细胞分为NC组、miR-let-7b-5p组、miR-let-7b-5p-pcDNA5组和miR-let-7b-5p-LIMD2组,Western Blot检测各组细胞中LIMD2、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达;Transwell法检测miR-let-7b-5p对MGC-803细胞侵袭能力的影响。结果:与GES-1相比,SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中miR-let-7b-5p相对表达水平明显下降(P<0.05)。与NC组相比,miR-let-7b-5p组miR-let-7b-5p相对表达量升高(P<0.05),转染LIMD2-WT的细胞相对荧光素酶活性明显降低(P<0.05),LIMD2、Vimentin、N-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),细胞侵袭个数减少(P<0.05)。与miR-let-7b-5p组相比,miR-let-7b-5p-LIMD2组LIMD2、Vimentin、N-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),细胞侵袭个数增多(P<0.05)。结论:过表达miR-let-7b-5p可靶向下调LIMD2促进胃癌细胞的MET,从而有效改善肿瘤细胞的侵袭。 展开更多
关键词 微小RNA-let-7b-5p lim2蛋白 胃癌 间质-上皮转化
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FHL2与LDHA相互作用促进胶质瘤细胞的增殖
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作者 吴国庆 张婷 +3 位作者 宋小锋 朱婷 李娜 李明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期976-983,共8页
目的:探讨四个半LIM结构域2(FHL2)蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法:利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC2... 目的:探讨四个半LIM结构域2(FHL2)蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法:利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC23、A172、LN229、G267和星形胶质细胞NHA中的FHL2蛋白表达水平。利用慢病毒载体构建稳定敲低FHL2的U87细胞和过表达FHL2的SNB19细胞,即U87-shGFP、U87-shFHL2-1#、U87-shFHL2-4#和SNB19-3flag、SNB19-3flag-FHL2组。通过CCK-8法、克隆形成实验检测敲低和过表达FHL2对细胞增殖的影响,免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC/MS)法筛选FHL2在胶质瘤细胞中的相互作用蛋白,并用Co-IP和免疫荧光法验证它们的结合作用和共定位情况。使用酶标仪检测敲低和过表达FHL2细胞内乳酸产量和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,WB法分析FHL2、LDHA及p-LDHA在正常脑组织和胶质瘤组织中的蛋白表达差异及其相互关系。在过表达FHL2的SNB19细胞中使用LDHA的小分子抑制剂AT-101,通过CCK-8实验和酶标仪比色法验证FHL2在胶质瘤乳酸代谢中的作用,验证AT-101在胶质瘤中潜在的治疗效果。结果:Co-IP和LC/MS检测发现,FHL2与LDHA在胶质瘤细胞中存在相互作用。FHL2过表达可提高LDHA活性和乳酸生成(均P<0.001),进而促进胶质瘤细胞增殖(P<0.001)。相反,敲低FHL2会降低LDHA活性和乳酸产量(P<0.001或P<0.05)并抑制细胞增殖(P<0.001)。AT101能抑制LDHA活性,并显著抑制FHL2促进胶质瘤细胞的增殖,同时恢复磷酸化LDHA(Y10)水平(P<0.01或P<0.001)。结论:FHL2与LDHA蛋白相互作用,FHL2通过激活p-LDHA(Y10)的表达促进LDHA活性和乳酸产生,进而促进胶质瘤细胞的增殖,靶向这种相互作用可能成为治疗胶质瘤的潜在策略。 展开更多
关键词 四个半lim结构域2 乳酸脱氢酶A 胶质瘤 U87细胞 SNB19细胞 增殖
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子宫内膜癌组织中LIMD2的表达及临床意义 被引量:2
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作者 夏朝晖 吴蓉宜 陈悦悦 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期616-620,共5页
目的探讨子宫内膜癌组织中含LIM域2蛋白(LIMD2)的表达及临床意义。方法收集2014年1月至2017年12月经手术切除的子宫内膜癌组织89例、正常内膜组织57例及不典型增生组织61例,采用实时定量PCR(QPCR)法检测上述组织中LIMD2的表达情况,采用... 目的探讨子宫内膜癌组织中含LIM域2蛋白(LIMD2)的表达及临床意义。方法收集2014年1月至2017年12月经手术切除的子宫内膜癌组织89例、正常内膜组织57例及不典型增生组织61例,采用实时定量PCR(QPCR)法检测上述组织中LIMD2的表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估组织LIMD2水平诊断子宫内膜癌的效能;分析LIMD2表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系(年龄、淋巴结转移、FIGO分期、病理类型、组织学分级和肌层浸润深度);采用Kaplan-Meier Plotter在线数据库分析LIMD2表达与子宫内膜癌预后的关系。结果子宫内膜癌组织的LIMD2 mRNA水平为3.095±1.236,高于不典型增生组织的1.297±0.420和正常内膜组织的1.176±0.444(P<0.05),而不典型增生组织与正常内膜组织LIMD2表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线显示,组织LIMD2水平诊断子宫内膜癌的曲线下面积为0.901(95%CI:0.851~0.951),以1.918为截断值对应的约登指数最大(0.7865),灵敏度和特异度分别为78.65%和100.0%。LIMD2表达与年龄和病理类型及均无关(P>0.05),与淋巴结转移、FIGO分期、肌层浸润深度和组织学分级均有关(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter在线数据库分析结果发现,LIMD2表达与无复发生存期有关(HR=0.53,95%CI:0.29~0.98,P<0.05),而与总生存期无关(P>0.05)。结论子宫内膜癌组织中LIMD2高表达,且与淋巴结转移、FIGO分期、组织学分级、肌层浸润深度和复发有关,可能参与该肿瘤的发生、发展,可能成为子宫内膜癌诊断和病情预测的新型分子标记物。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 lim2蛋白(limD2) 临床意义 诊断价值
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FHL2通过SK-1/S1P通路改善高糖诱导内皮细胞功能障碍的机制研究
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作者 陈卫卫 廖煌 +1 位作者 史振鸿 陈跃武 《心脑血管病防治》 2023年第9期15-19,共5页
目的探讨四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)对高糖引起内皮细胞功能障碍的影响及其作用机制。方法采用MTT检测含不同浓度葡萄糖培养基培养下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的细胞活力。将HUVECs分为对照组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄... 目的探讨四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)对高糖引起内皮细胞功能障碍的影响及其作用机制。方法采用MTT检测含不同浓度葡萄糖培养基培养下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的细胞活力。将HUVECs分为对照组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、siNC组(30 mmol/L葡萄糖+siNC)和siFHL2组(30 mmol/L葡萄糖+siFHL2)。利用Western blot检测对照组和高糖组的HUVECs中FHL2蛋白表达水平。采用实时定量PCR法检测转染siFHL2后FHL2的表达水平。运用Annexin V-FITC/PI双染检测各组细胞凋亡情况。利用Western blot检测凋亡相关蛋白FHL2、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved caspase 3表达水平。采用成管实验检测各组HUVECs的成管能力。利用Western blot检测各组SK-1/1-磷酸鞘氨醇(SK-1/S1P)通路中的蛋白表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)检测S1P表达水平变化。结果与对照组相比,高糖组HUVECs内FHL2表达上调(t=4.407,P<0.05)。与对照组相比,高糖组HUVECs凋亡水平升高,Bax和cleaved caspase 3的表达也较对照组显著上调,而下调FHL2表达后,细胞凋亡减少,凋亡相关蛋白Bax和cleaved caspase 3的表达下调(P<0.05)。此外,FHL2表达下调改善了HUVECs的成管能力。分子机制分析显示,与对照组比较,高糖组p-SK-1表达显著下调(P<0.05),而下调FHL2后p-SK-1水平显著上调(P<0.05),S1P水平也显著上调(P<0.05)。结论FHL2可改善高糖引起的内皮细胞功能障碍,其作用机制可能与SK-1/S1P信号通路有关。 展开更多
关键词 四个半lim结构域蛋白2 内皮细胞 高糖 功能障碍 SK-1/1-磷酸鞘氨醇通路
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LIMD2基因表达对食管癌细胞增殖、凋亡及ERK/MAPK信号通路的影响 被引量:3
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作者 李险波 张志强 +3 位作者 韩小勇 甄志鹏 李焕芬 赵钦 《局解手术学杂志》 2022年第8期669-675,共7页
目的探讨LIM结构域2(LIMD2)对食管癌细胞增殖、凋亡的影响,及其对细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调控作用。方法取10例食管癌患者癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LIMD2 mRNA表达,采用免疫荧光染色检测LI... 目的探讨LIM结构域2(LIMD2)对食管癌细胞增殖、凋亡的影响,及其对细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调控作用。方法取10例食管癌患者癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LIMD2 mRNA表达,采用免疫荧光染色检测LIMD2蛋白表达,采用Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达。取人食管癌细胞(KYSE30、EC9706)和人正常食管上皮细胞(HEEC),采用qRT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 mRNA及蛋白表达,筛选出LIMD2 mRNA及蛋白表达最高的EC9706细胞进行后续试验。取EC9706细胞,分为对照组(常规培养)、Si-LIMD2组(转染LIMD2干扰序列的腺病毒载体)、Si-NC组(转染不含LIMD2干扰序列的空腺病毒载体)、PD98059组(ERK/MAPK通路阻断剂)、ISO组(ERK/MAPK通路激活剂)、Si-LIMD2+ISO组(在Si-LIMD2组基础上加入ISO溶液);采用qRT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 mRNA及蛋白表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;采用Western blot法检测细胞ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK、细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK2、caspase-3、整合素β1、黏着斑激酶(FAK)、整合素连接激酶(ILK)表达。结果LIMD2 mRNA及蛋白在食管癌组织及KYSE30细胞、EC9706细胞中的表达均较高,且在EC9706细胞中的表达高于KYSE30细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白在食管癌组织中表达较高(P<0.05)。与对照组相比,Si-LIMD2组和PD98059组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较低,增殖活性较低,G0/G1期比例较高,S期及G2/M期比例较低,凋亡率较高,cyclin D1、CDK2蛋白表达较低,caspase-3蛋白表达较高,差异均有统计学意义(P<0.05),ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高,增殖活性较高,G0/G1期比例较低,S期及G2/M期比例较高,凋亡率较低,cyclin D1、CDK2蛋白表达较高,caspase-3蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Si-LIMD2组相比,Si-LIMD2+ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高,增殖活性较高,G0/G1期比例较低,S期及G2/M期比例较高,凋亡率较低,cyclin D1、CDK2蛋白表达较高,caspase-3蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论沉默LIMD2基因表达可能通过抑制ERK/MAPK磷酸化途径激活而抑制食管癌细胞增殖、促进其凋亡。 展开更多
关键词 lim结构域2 食管癌细胞 细胞外信号调节激酶 丝裂原活化蛋白激酶 增殖 凋亡
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FHL2和PBX3在卵巢癌组织中表达与临床病理特征的相关性研究
6
作者 黄小杏 梁秀冰 +4 位作者 莫劲思 黄世勇 郝丽莉 李江 曾庆苏 《空军军医大学学报》 CAS 2023年第5期453-457,共5页
目的探讨四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)与前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)在卵巢癌(OC)组织中的表达与临床病理特征及预后的相关性。方法选取广东省阳江市人民医院2017年6月至2019年6月收治的63例OC患者作为研究对象,收集患者的OC组织和... 目的探讨四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)与前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)在卵巢癌(OC)组织中的表达与临床病理特征及预后的相关性。方法选取广东省阳江市人民医院2017年6月至2019年6月收治的63例OC患者作为研究对象,收集患者的OC组织和癌旁正常组织(距肿瘤边缘4 cm处)进行研究,采用免疫组化法检测组织中的FHL2与PBX3蛋白的表达水平,并分析其与OC患者临床病理特征的关系,采用Cox回归模型分析影响OC患者预后的相关因素。结果患者癌组织中FHL2和PBX3蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05);FHL2与PBX3蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、腹水和病理分期具有显著相关性(P<0.05);所有OC患者中位生存期为30.75(24.82,36.70)个月,其中FHL2阳性和阴性表达OC患者的中位生存期分别为17.67(6.33,29.01)和35.36(32.30,38.41)个月,PBX3阳性和阴性表达OC患者的中位生存期分别为17.01(14.11,19.91)和33.75(31.45,36.05)个月,差异具有统计学意义(Log rank P<0.05)。经单因素分析,肿瘤低分化、淋巴结转移、病理分期Ⅲ+Ⅳ期、FHL2及PBX3阳性表达患者的生存时间均显著缩短,差异具有统计学意义(P<0.05);Cox回归模型分析表明,淋巴转移情况(HR=0.17,95%CI:0.05~0.53)、腹水(HR=0.02,95%CI:0.00~0.17)、病理分期(HR=11.45,95%CI:2.95~44.49)、FHL2(HR=0.19,95%CI:0.05~0.71)及PBX3表达水平(HR=0.22,95%CI:0.08~0.57)均为OC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论FHL2与PBX3蛋白在OC组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织,且表达水平与OC患者的临床特征显著相关。该研究对于OC的发生、发展及预后均有着重要的临床意义。 展开更多
关键词 四个半lim结构域蛋白2 前B细胞白血病同源盒基因3 卵巢癌
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葫芦素E对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响及其作用机制 被引量:9
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作者 李丽 随何欢 黄家君 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期1342-1348,共7页
目的研究葫芦素E(Cu E)对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响,并探讨Cu E作用的分子机制。方法用0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L的Cu E分别处理培养的Caco-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕实验及Transwell小室细胞跨膜实验检... 目的研究葫芦素E(Cu E)对人结肠癌细胞Caco-2增殖与迁移的影响,并探讨Cu E作用的分子机制。方法用0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L的Cu E分别处理培养的Caco-2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,采用划痕实验及Transwell小室细胞跨膜实验检测细胞迁移能力,荧光法检测细胞F-actin与G-actin相对含量,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架F-actin,Western blot分别检测cofilin、p-cofilin、LIMK2及p-LIMK2蛋白表达。结果 CCK-8法、划痕实验与Transwell跨膜实验显示:0.1、1、10μmol/L的Cu E对Caco-2细胞的增殖与迁移均具有明显的抑制作用(P<0.05),并呈现出剂量与时间依赖性;荧光法表明0.1μmol/L的Cu E能增加Caco-2细胞G-actin含量(P<0.05),引起F-actin/G-actin的动态平衡失调,并在0.1μmol/L的Cu E处理1、2、6、12、24 h后,对细胞骨架F-actin有明显的破坏作用,Western blot检测显示,不同浓度Cu E处理Caco-2细胞后,cofilin、p-cofilin及p-LIMK2的蛋白表达明显降低(P<0.05),而LIMK2表达与对照组比较无明显差异。结论 Cu E可能通过抑制LIMK/cofilin信号通路而损害细胞骨架actin,从而导致结肠癌Caco-2细胞的增殖与迁移受到抑制。 展开更多
关键词 葫芦素E CACO-2细胞 增殖 迁移 F-肌动蛋白 G-肌动蛋白 lim激酶2 COFILIN
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糖络宁调控细胞骨架干预糖尿病周围神经病变脱髓鞘的作用机制
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作者 闫仕祺 刘东齐 +1 位作者 刘浩龙 杨鑫伟 《环球中医药》 CAS 2024年第10期1919-1929,共11页
目的 基于PDZ和LIM结构域蛋白7(PDZ and LIM domain protein 7,Pdlim7)和突触极蛋白(synaptopodin-2,Synpo2)调控的丝状肌动蛋白(filamentous actin, F-actin)探讨糖络宁改善糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)... 目的 基于PDZ和LIM结构域蛋白7(PDZ and LIM domain protein 7,Pdlim7)和突触极蛋白(synaptopodin-2,Synpo2)调控的丝状肌动蛋白(filamentous actin, F-actin)探讨糖络宁改善糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)脱髓鞘的干预作用及机制。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素建立高血糖大鼠模型。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组(α-硫辛酸,20 mg/kg)和糖络宁组(10.9 g/kg),每组12只。干预12周后,观察透射电镜观察大鼠坐骨神经超微结构并统计髓鞘相对面积和G-ratio;检测鼠尾热痛阈值与坐骨神经神经传导速度,观察各组大鼠神经功能;4D-label free蛋白质组学联合生物信息学分析筛选DPN大鼠坐骨神经的差异性蛋白。采用蛋白免疫印迹法与免疫荧光法检测坐骨神经细胞骨架相关胶质纤维酸性蛋白、微管蛋白、F-actin和Pdlim7、Synpo2的表达。结果 与空白组比较,模型组坐骨神经髓鞘相对面积和G-ratio数值降低(P<0.05),热痛阈值增加(P<0.01),运动和感觉神经传导速度均降低(P<0.01);与模型组比较,糖络宁组髓鞘相对面积和G-ratio数值显著升高(P<0.01),热痛阈值降低(P<0.01),运动和感觉神经传导速度均增加(P<0.01)。蛋白质组学显示,糖络宁干预12周后,DPN大鼠坐骨神经差异蛋白多与细胞骨架、肌动蛋白结合及PDZ结构域和LIM结构域蛋白相关。与空白组比较,模型组坐骨神经中F-actin、Pdlim7和Synpo2表达降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01);与模型组比较,糖络宁组F-actin、Pdlim7和Synpo2表达明显升高(P<0.01)。共定位结果表明,与空白组比较,模型组髓鞘上F-actin表达显著降低(P<0.01),与F-actin共定位的Pdlim7表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,糖络宁组髓鞘上F-actin表达显著升高(P<0.01),与F-actin共定位的Pdlim7表达明显升高(P<0.01)。结论 糖络宁改善DPN坐骨神经脱髓鞘与调控细胞骨架相关,机制与增加Pdlim7和Synpo2的表达,进而增加细胞骨架蛋白F-actin生成而促进髓鞘生成有关。 展开更多
关键词 糖尿病周围神经病变 丝状肌动蛋白 PDZ和lim结构域蛋白7 突触极蛋白 糖络宁
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LDB2在肺癌组织中的表达及与S1PR1的相关性分析 被引量:1
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作者 褚福营 王子杰 +3 位作者 刘红利 王塑 曹兴建 陈相 《临床检验杂志》 CAS 2019年第12期911-914,922,共5页
目的探讨LIM域结合蛋白2(LDB2)在肺癌组织中的表达及其与1-磷酸神经鞘氨醇受体1(S1PR1)的相关性。方法选取2010年4月至2011年5月南通市肿瘤医院就诊的52例肺癌患者的癌组织作为实验组,相应的癌旁组织作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qR... 目的探讨LIM域结合蛋白2(LDB2)在肺癌组织中的表达及其与1-磷酸神经鞘氨醇受体1(S1PR1)的相关性。方法选取2010年4月至2011年5月南通市肿瘤医院就诊的52例肺癌患者的癌组织作为实验组,相应的癌旁组织作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组LDB2及S1PR1基因的表达水平;通过Oncomine数据库对LDB2的表达结果进行验证,并分析其与临床病理参数之间的关系;绘制ROC曲线,评价其对肺癌的诊断价值;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与肺癌预后的关系;同时检测其与S1PR1的相关性。结果LDB2基因在肺癌组织中的表达量为0.158(0.062,0.383),癌旁组织中表达量为0.403(0.261,0.711),两组间差异具有统计学意义(U=700.0,P<0.01)。Oncomine数据库共检索出9项符合筛选条件的研究,其LDB2基因均呈低表达(P<0.01)。肺癌组织中LDB2基因的表达与性别、年龄、吸烟情况、病理类型、肿瘤大小、TNM分期及是否淋巴结转移均无关(P>0.05)。ROC曲线分析结果表明,当ROC曲线下面积(AUC ROC)为0.741(95%CI:0.643~0.839),cut-off值取0.247时,LDB2筛查肺癌的敏感性为80.8%,特异性为61.5%。Kaplan-Meier生存分析发现,低表达LDB2患者的5年总生存期显著低于高表达患者(P<0.01)。S1PR1基因在肺癌组织中表达量为0.710(0.337,1.523),在癌旁组织中的表达量为1.582(0.913,3.533),两组间差异具有统计学意义(U=780.0,P<0.01),且肺癌组织中LDB2与S1PR1的表达水平呈正相关(r=0.827,P<0.01)。结论LDB2及S1PR1在肺癌中均低表达且呈强相关性,两者在肺癌的发生、发展中具有重要的作用。 展开更多
关键词 lim域结合蛋白2 1-磷酸神经鞘氨醇受体1 肺癌 相关性
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FHL2沉默对骨肉瘤U2OS细胞增殖与凋亡的影响 被引量:2
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作者 卢文婷 刘爽 +4 位作者 李赛赛 刘佳 徐颖茜 王建祥 王敏 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期1-6,共6页
目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量P... 目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量PCR(QPCR)和Western blotting检测两组FHL2 mRNA和蛋白水平。采用MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blotting检测FHL2干扰后U2OS细胞相关信号通路的蛋白表达变化。利用双荧光素酶报告基因系统检测FHL2对p53下游基因转录调控的影响。结果与SCR组比较,sh FHL2组感染96 h后FHL2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。sh FHL2组感染24、48、72、96 h的细胞增殖比分别为1.73±0.08、2.49±0.38、3.26±0.45和4.28±0.29,其中96 h的细胞增殖比低于SCR组(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的细胞凋亡率为(17.55±1.05)%,高于SCR组的(7.73±1.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的G_0/G_1期细胞为(68.18±0.78)%,高于SCR组的(59.73±2.28)%,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰FHL2表达能够显著上调p53、p21和Bax的表达水平并能增强p53对Bax启动子的促转录活性。结论沉默FHL2表达可明显抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞阻滞于G_0/G_1期;FHL2介导了p53对Bax启动子的转录调节作用。FHL2可能会成为新的肿瘤治疗靶点,其机制与p53/Bax和p53/p21通路相关。 展开更多
关键词 骨肉瘤 FHL2 U2OS细胞株 增殖 凋亡
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m^(6)A修饰调控的LDB2抑制肺腺癌细胞增殖 被引量:2
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作者 翟东凤 王鸽 +3 位作者 李蕾 贾小婷 郑国沛 尹江 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期329-335,共7页
目的研究LIM域结合蛋白2(LDB2)在肺腺癌中的表达模式及作用。方法从mRNA和蛋白表达数据库中分析在肺腺癌中表达下调基因的交集。通过qRT-PCR、Western blot和免疫组化的方法验证LDB2在肺腺癌中的表达模式。在GEO和TCGA数据库中分析LDB2... 目的研究LIM域结合蛋白2(LDB2)在肺腺癌中的表达模式及作用。方法从mRNA和蛋白表达数据库中分析在肺腺癌中表达下调基因的交集。通过qRT-PCR、Western blot和免疫组化的方法验证LDB2在肺腺癌中的表达模式。在GEO和TCGA数据库中分析LDB2与肺腺癌患者预后的相关性。在H1299细胞中过表达LDB2,通过细胞计数实验、软琼脂克隆实验及流式细胞术证明LDB2在肺腺癌中的作用。生信预测结合后期MeRIP-qPCR实验证实LDB2转录本上存在m6A结合位点。通过qRT-PCR和Western blot实验检测YTHDC2对LDB2的转录调控。RIP实验验证YTHDC2能否与LDB2转录本结合。结果通过分析TCGA、GEO及CPTAC 3个数据集中在肺腺癌中低表达的差异基因,最终聚焦于LDB2基因。免疫组化结果证实该基因在80例肺腺癌组织中的表达量也显著低于17例正常癌旁组织的表达量。与正常肺上皮细胞16HBE相比,LDB2在肺腺癌细胞中的表达量亦明显降低。生信分析提示高表达的LDB2与肺腺癌患者良好的预后正相关。在H1299细胞中过表达LDB2后,发现LDB2可诱导H1299细胞发生S期阻滞,从而抑制该细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力。生信预测结合后期MeRIPqPCR实验证实LDB2转录本上存在m6A位点。GEPIA数据库提示YTHDC2在肺腺癌组织中低表达,且与LDB2在肺腺癌中表达正相关(r=0.22,P<0.0001)。在H1299细胞中过表达YTHDC2,可明显增加LDB2的表达。最后,在过表达YTHDC2的H1299细胞中开展RIP实验,定量结果显示LDB2在YTHDC2组的含量是其在IgG组含量的19.35倍,YTHDC2可结合在LDB2转录本上调控其表达。双荧光素酶报告基因实验证实YTHDC2可上调野生型而不是缺失型报告基因载体活性。结论m6A编码器YTHDC2在肺腺癌中上调LDB2的表达。过表达LDB2可明显诱导肺腺癌细胞发生S期阻滞,抑制肺腺癌细胞增殖能力。 展开更多
关键词 lim域结合蛋白2 N6-甲基腺嘌呤 增殖 肺腺癌
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G蛋白信号调节因子2在调控口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭中的作用及分子机制 被引量:4
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作者 林承重 刘喆麒 +2 位作者 周文凯 季彤 曹巍 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期320-327,共8页
目的探讨G蛋白信号调节因子2(RGS2)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭的影响及调控机制。方法基于TCGA数据库,评估RGS2在头颈鳞状细胞癌及配对癌旁组织中表达情况,并分析其临床病理相关性;口腔鳞状细胞癌细胞系(SCC-9、Cal-27、Fadu)分别... 目的探讨G蛋白信号调节因子2(RGS2)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭的影响及调控机制。方法基于TCGA数据库,评估RGS2在头颈鳞状细胞癌及配对癌旁组织中表达情况,并分析其临床病理相关性;口腔鳞状细胞癌细胞系(SCC-9、Cal-27、Fadu)分别稳定过表达RGS2和空载对照基因,通过Transwell侵袭实验、平板克隆实验、细胞计数试剂盒(CCK)-8生长曲线实验,比较过RGS2表达组、对照组细胞的侵袭、增殖能力;通过酵母双杂交技术、免疫共沉淀技术检测RGS2与四个半LIM结构域蛋白1(FHL1)、DNA损伤结合蛋白(DDB1)的相关性。结果RGS2在头颈鳞状细胞癌组织中表达显著低于癌旁组织(P=0.023),且高表达患者肿瘤淋巴血管侵犯显著减少(P<0.001);过表达RGS2能显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭能力;抑癌基因FHL1可竞争性与RGS2结合,降低泛素化相关蛋白DDB1与RGS2的结合,抑制RGS2的泛素化过程,从而维持RGS2稳定。结论RGS2可抑制口腔鳞状细胞癌细胞的侵袭、增殖能力,RGS2蛋白在细胞中稳定的受FHL1和DDB1竞争性调控。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 G蛋白信号调节因子2 增殖 侵袭 抑癌基因FHL1 泛素化
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Expression and subcellular localization of cysteine- and glycine-rich protein-2 in rat undifferentiated olfactory stem cells
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作者 Xue Gao Zengyu Cao Jun Chen Shunli Liu Dingjun Zha Feng Wang Yang Chen Li Qiao Lianjun Lu Jianhua Qiu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2008年第5期558-560,共3页
BACKGROUND: As a member of the LIM protein family Ⅱ, cysteine- and glycine-rich protein-2 (CRP2) has been demonstrated to play a role in the regulation of growth and differentiation of eukaryotic cells. Our previo... BACKGROUND: As a member of the LIM protein family Ⅱ, cysteine- and glycine-rich protein-2 (CRP2) has been demonstrated to play a role in the regulation of growth and differentiation of eukaryotic cells. Our previous study has demonstrated that CRP2 can be detected in the embryonic rat inner ear but not in the adult rat inner ear. However, at present, the expression of LIM protein family H members in stem or precursor cells has not been described. OBJECTIVE: To determine the expression and sub-cellular localization of CRP2 in olfactory stem cells. DESIGN, TIME AND SETTING: An experiment with repeated measures was performed in the Laboratory of Otorhinolaryngology, Head and Neck Surgery, Xijing Hospital, the Fourth Military Medical University from February 2008 to April 2008. MATERIALS: Olfactory stem cells, and rabbit-anti-CRP2 polyclonal antibody were prepared and kept in our laboratory. METHODS: Reverse transcription polymerase chain reaction and Western blot analysis were used to detect expression of CRP2 in olfactory stem cells. Immunocytochemistry was also used to localize CRP2 in olfactory stem cells. MAIN OUTCOME MEASURES: The expression and sub-cellular localization of CRP2 in rat olfactory stem cells. RESULTS: CRP2 expression was found in olfactory stem cells, and CRP2 was distributed in both the nucleus and the cytoplasm. CONCLUSION: Confirmation of the expression and distribution of CRP2 in olfactory stem cells. 展开更多
关键词 cysteine- and glycine-rich protein-2 lim domain subcellular localization olfactory stem cells
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