干扰素α-1b联合人免疫球蛋白对EB病毒感染患儿临床疗效及对Ficolin-3、SH2D1A表达的影响

目的探讨人干扰素α-1b联合人免疫球蛋白治疗对EB病毒(EBV)感染患儿的临床疗效,并分析治疗对患儿免疫相关分子纤维胶凝蛋白3(Ficolin-3)、SH2结构域蛋白1A(SH2D1A)表达水平的影响。方法选取2018年2月至2020年2月在该院就诊的130例EBV感染患儿,根据治疗方式不同分为对照组和观察组,各65例。对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗基础上给予人干扰素α-1b联合人免疫球蛋白治疗。观察两组发热、咳嗽、颈淋巴结肿大、咽痛、扁桃体肿大和肝脾肿大各项临床症状的消失时间。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测治疗前后两组EBV-DNA、EBV-CA-IgM及EBV-NA-IgG,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组治疗前后血清Ficolin-3、SH2D1A水平,以及外周血白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,采用流式细胞术分析T淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)。结果观察组发热、咳嗽、颈淋巴结肿大、咽痛、扁桃体肿大和肝脾肿大各项临床症状的消失或消退时间均短于对照组,EBV-DNA、EBV-CA-IgM转阴率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组Ficolin-3、SH2D1A、IL-6、IL-8、TNF-α、CD8^(+)明显降低,CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前Ficolin-3、SH2D1A表达与IL-6、IL-8、TNF-α及CD8^(+)呈正相关(r=0.478、0.454、0.503,0.462、0.443、0.511,均P<0.001),与CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(r=-0.567、-0.402、-0.423,-0.477、-0.416、-0.409,均P<0.001)。观察组治疗总有效率[96.92%(63/65)]明显高于对照组[80.00%(52/65)],差异有统计学意义(χ^(2)=9.119,P=0.003),并发症总发生率[9.23%(6/65)]明显低于对照组[30.77%(20/65)],差异有统计学意义(χ^(2)=9.423,P=0.002)。结论干扰素α-1b联合人免疫球蛋白能降低EBV感染患儿Ficolin-3、SH2D1A水平,改善患儿免疫功能,提高治疗有效性。

甲状腺癌组织中TIPE2、LASP1蛋白表达与其临床病理特征及预后的相关性分析

目的探讨甲状腺癌组织内人肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)、LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)表达与其临床病理特征及预后的相关性。方法回顾性分析81例甲状腺癌患者的临床资料。所有患者采用手术治疗,术中切除病理标本后,再切除距离肿瘤2 cm以上的正常组织作为癌旁标本,术后及时送检。采用免疫组化法检测TIPE2、LASP1表达,比较肿瘤标本及癌旁标本内TIPE2、LASP1表达差异;比较TIPE2、LASP1表达与其临床病理特征相关性及其预后的相关性。结果肿瘤标本内TIPE2阳性表达率低于癌旁标本,LASP1阳性表达率高于癌旁标本,差异有统计学意义(P<0.05);TIPE2表达阳性组Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结无转移、肿瘤直径<2 cm占比高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);LASP1表达阳性组Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、肿瘤直径≥2 cm占比高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);随访3年,81例患者共31例出现复发转移,预后不良发生率为38.27%(31/81);TIPE2表达阳性组预后不良5例(17.24%),阴性组预后不良26例(50.00%);TIPE2阳性组预后不良率低于阴性组,差异有统计学意义(χ^(2)=8.457,P=0.004);LASP1表达阳性组预后不良率(45.00%)高于阴性组(19.05%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.435,P=0.035)。结论甲状腺癌组织内TIPE2阳性表达率较低,LASP1阳性表达较高,TIPE2、LASP1表达与肿瘤分期、淋巴结转移及肿瘤直径关系密切,且TIPE2低表达、LASP1高表达患者预后较差。

lncRNA SH3BP5-AS1单核苷酸多态性与中国汉族人缺血性中风血瘀证显著相关

目的研究旨在探讨中国汉族人群中lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836与缺血性中风(ischemic stroke,IS)遗传易感性及中医证候的关系。方法研究包括774例IS患者和793例对照组。采用Massarray SNP基因分型方法进行基因分型。采用《中风病中医辨证诊断标准》量表对IS患者进行中医证候鉴定。所有统计分析采用SPSS 17.0统计软件进行。结果在隐性模型下,lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836与缺血性中风血瘀证显著相关[OR(95%CI)=0.52(0.29-0.93),P=0.028],在校正了包括性别和年龄在内的协变量后,结果依然有统计学意义;而rs11713836与缺血性中风易感性及风、痰、火热、气虚证等中医证候易感性无相关性。此外,rs11713836与血清APO-B[隐性模型:OR(95%CI)=0.09(0.02-0.17),P=0.032]、VLDL[加性模型:OR(95%CI)=0.09(0.04-0.14),P<0.001;显性模型:OR(95%CI)=0.09(0.02-0.16),P=0.011;隐性模型:OR(95%CI)=0.19(0.09-0.30),P<0.001]、TG[加性模型:OR(95%CI)=0.15(0.05-0.24),P=0.003;显性模型:OR(95%CI)=0.14(0.01-0.27),P=0.041;隐性模型:OR(95%CI)=0.31(0.11-0.50),P=0.003]、FIB[显性模型:OR(95%CI)=0.20(0.04-0.35),P=0.012]显著相关,调整性别年龄后以上关联依然有统计学意义。结论lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836可能影响缺血性中风血瘀证的发生,有望作为缺血性中风血瘀证的生物标志物与潜在治疗靶点,并且可能影响缺血性中风患者的血脂代谢和凝血功能。

LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中的表达及与预后的相关性

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(LncRNA MIAT)、LIM和SH3蛋白1(LASP1)蛋白在甲状腺癌组织内的表达水平及与预后的关系。方法选取63例甲状腺癌患者,收集其癌组织、癌旁正常组织,测定LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达水平,并进行对比分析;同时分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系;另随访3年,分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者预后的关系。结果癌组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织,有统计学差异(P<0.05)。LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者的淋巴结转移、临床分期有关,有统计学差异(P<0.05);LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者的3年生存率低于LncRNA MIAT低表达、LASP1蛋白阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05)。结论LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中表现为高水平,其表达水平与患者临床分期、淋巴结转移有关,且表达水平越高,患者预后越差。

miR-143-3p靶向LASP1抑制胃癌细胞侵袭和迁移的研究

背景肿瘤远处转移作为影响胃癌患者预后的一大危险因素,常导致治疗失败。因此,亟需探索针对肿瘤转移的新治疗靶点以改善胃癌患者的预后。目的探讨通过生物信息学筛选的miRNA能否通过靶向LASP1抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。方法通过生物信息学方法预测靶向于LASP1的miRNAs,基于TCGA数据库分析miRNAs在胃癌中的表达水平及LASP1与miRNAs的相关性。利用双荧光素酶报告实验验证miR-143-3p与LASP1之间的靶向互作关系。以胃癌MGC-803细胞系为实验对象,分别转染miR-143-3p模拟物、抑制剂及其阴性对照,据此将实验分为miR-143-3p模拟物对照组(miR-143-3p mimic NC)、miR-143-3p模拟物组(miR-143-3p mimic)、miR-143-3p抑制剂对照组(miR-143-3p inhibitor NC)和miR-143-3p抑制剂组(miR-143-3p inhibitor)。应用Transwell侵袭实验和划痕愈合实验测定各组MGC-803细胞侵袭和迁移能力的变化。qRT-PCR检测转染后MGC-803细胞中LASP1的mRNA表达水平,Western blot检测MGC-803细胞中LASP1的蛋白表达水平。结果生物信息学分析提示miR-143-3p可能靶向于LASP1,二者相关性r=-0.284(P<0.01)。双荧光素酶报告实验进一步证实LASP1是miR-143-3p的一个直接靶基因(P<0.01)。Transwell侵袭实验和划痕愈合实验证实miR-143-3p对胃癌MGC-803细胞的侵袭和迁移能力有明显抑制作用。qRT-PCR实验结果显示miR-143-3p mimic组的LASP1的表达水平低于miR-143-3p mimic NC组(P<0.01),而miR-143-3p inhibitor组的LASP1的表达水平高于miR-143-3p inhibitor NC组(P<0.05)。此外,Western blot与qRT-PCR的实验结果一致。结论miR-143-3p可通过靶向下调LASP1,抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。

胃癌组织中miR-143-3p、LASP1表达与临床病理特征和预后的关系

目的探讨胃癌组织中微小RNA-143-3p(miR-143-3p)、LIM和Src同源结构域3蛋白1(LASP1)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选取113例胃癌患者,采用qPCR法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-143-3p、LASP1 mRNA表达。采用Spearman相关性分析胃癌组织中miR-143-3p与LASP1 mRNA表达的关系,比较不同临床病理特征患者miR-143-3p、LASP1 mRNA表达。对患者进行随访,采用Kaplan-Meier法绘制胃癌组织中不同miR-143-3p、LASP1 mRNA表达患者生存曲线。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中miR-143-3p表达下调,LASP1 mRNA表达上调(P均<0.05)。Spearman相关性分析显示,胃癌组织中miR-143-3p与LASP1 mRNA表达呈负相关(r=-0.810,P<0.01),二者与TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。随访3年,113例胃癌总生存率为69.03%(78/113)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者,LASP1 mRNA高表达者3年总生存率低于LASP1 mRNA低表达者(P均<0.05)。结论胃癌组织中miR-143-3p低表达,LASP1 mRNA高表达,与TNM分期、淋巴结转移和预后有关,二者可能成为胃癌预后的评估指标。

Ras-GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白1在肿瘤中的研究进展

Ras-GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白1(Ras-GAP SH3 domain-binding protein,G3BP1)是RNA结合蛋白,通过调控mRNA稳定性和翻译来应对外界刺激,被认为是应激颗粒的成核因子之一。G3BP1在应激颗粒中的作用是目前研究的热点,但除此之外G3BP1在应激颗粒外与RNA的相互作用,调节基因表达的功能也不容忽视。G3BP1与肿瘤发生发展密切相关,包括肿瘤进展、侵袭和转移等。大量研究结果表明,G3BP1可能成为肿瘤治疗的新靶点。本文综述了G3BP1近年来在肿瘤生物学领域取得的重要进展,包括其在肿瘤进展、应激颗粒形成等方面的作用。

MiR-223-3p通过靶向SORBS1增加结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性

目的:5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的一线治疗药物,CRC细胞对5-FU的耐药是导致化学治疗(以下简称“化疗”)失败的主要原因,然而耐药机制仍不明确。本研究旨在探究参与CRC细胞对5-FU耐药的抑癌基因,并寻找对该基因存在调控作用的微RNA(microRNA,miRNA)。方法:在高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载CRC数据集GSE28702和GSE69657,分别分析2个数据集中对FOLFOX化疗方案应答组和无应答组患者的差异表达基因并确定目标基因;采用在线生物信息学数据库TargetScan、miRwalk和miRDB预测靶向目标基因含山梨醇和SH3结构域蛋白1(sorbin and SH3 domain containing 1,SORBS1)的miRNA。采用瞬时转染技术在CRC细胞系HCT116、SW620中分别转染siSORBS1、HA-SORBS1、miR-223-3p mimic、anti-miR-223-3p及其相应的阴性对照(siNC、HA、miR-NC、anti-miR-NC),在HCT116细胞中共转染miR-NC和HA、miR-223-3p mimic和HA、miR-223-3p mimic和HA-SORBS1、anti-miR-NC和siNC、anti-miR-223-3p和siNC、anti-miR-223-3p和siSORBS1。采用实时反转录PCR(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)和/或蛋白质印迹法检测细胞中SORBS1和miR-223-3p的表达水平。转染后用不同浓度的5-FU处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,双荧光素酶报告分析验证miR-223-3p与SORBS1的靶向关系。结果:GSE69657数据集和GSE28702数据集应答组分别有409和528个高表达基因,共有22个高表达交集基因。在22个高表达交集基因中,与CRC化疗敏感性有关的抑癌基因有3个,选择SORBS1作为目标基因进一步探索。3个在线生物信息学数据库预测的靶向SORBS1的miRNA为miR-223-3p。用5-FU(25μmol/L)处理HCT116、SW620细胞12~36 h后,2种细胞中miR-223-3p的表达水平均显著下调(均P<0.05)。转染siSORBS1或miR-223-3p mimic后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均下调,细胞活力均增加(均P<0.05);转染HA-SORBS1或antimiR-223-3p后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均上调,细胞活力均下降(均P<0.05)。双荧光素酶报告分析结果显示:共转染SORBS13'-非翻译区(untranslated region,UTR)野生型质粒和miR-223-3p mimic的细胞荧光素酶活性显著低于共转染SORBS13'-UTR野生型质粒和miR-NC的细胞(P<0.05)。与共转染miR-223-3p mimic和HA的细胞比较,共转染miR-223-3p mimic和HA-SORBS1的细胞活力明显降低(P<0.01);与共转染anti-miR-223-3p和siNC组比较,共转染anti-miR-223-3p和siSORBS1组细胞活力明显增加(P<0.05)。结论:MiR-223-3p通过靶向SORBS1基因增加CRC细胞对5-FU的耐药性,miR-223-3p有望成为临床治疗CRC的新靶点。

LIM和SH3蛋白1蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达及其对肾透明细胞癌786－O细胞侵袭和迁移能力的影响

目的分析LIM和SH3蛋白1（LASP1）在肾癌组织中的表达及其与肾癌患者临床病理特征的关系，探讨沉默LASP1表达对肾透明细胞癌786－O细胞侵袭和迁移能力的影响。方法应用免疫组织化学染色检测41例肾透明细胞癌患者肿瘤组织及其配对的癌旁组织中LASP1蛋白的表达水平，并分析LASP1蛋白表达与患者临床病理特征的关系。采用Western blot法检测10例伴或不伴淋巴结转移肾透明细胞癌组织中LASP1蛋白的表达差异。以小干扰RNA（siRNA）技术转染786－O细胞，采用Western blot法检测LASP1 siRNA对LASP1蛋白的干扰效果以及对上皮间质转化（EMT）通路中相关蛋白的表达影响。采用细胞计数盒8（CCK－8）法和Transwell实验检测下调LASP1蛋白表达对786－O细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果LASP1蛋白在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率为90.2%（37/41），明显高于其在癌旁组织中的阳性表达率（29.3%，12/41; P＝0.002）。LASP1在肾癌组织中的表达与肾癌的淋巴结转移和TNM分期呈正相关（均P〈0.05）。Western blot法检测结果显示，LASP1蛋白在癌旁正常组织、无淋巴结转移肾癌组织和有淋巴结转移肾癌组织中的相对表达量分别为0.696±0.053、1.459±0.628和2.692±0.186，差异有统计学意义（P＝0.001）。沉默786－O细胞中LASP1蛋白的表达后，786－O细胞的增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。LASP1 siRNA转染786－O细胞48 h后，siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组786－O细胞中上皮表型标志物E－cadherin蛋白的相对表达量分别为0.848±0.020、0.671±0.018和0.691±0.037，siRNA转染组E－cadherin蛋白的表达明显增高（P〈0.05）；siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组786－O细胞中间质表型标志物N－cadherin蛋白的相对表达量分别为0.449±0.047、0.613±0.018和0.633±0.045，siRNA转染组N－cadherin蛋白的表达明显降低（P〈0.05）；siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组786－O细胞中间质表型标志物Vimentin蛋白的相对表达量分别为0.477±0.029、0.598±0.069和0.633±0.045，siRNA转染组Vimentin蛋白的表达明显降低（P〈0.05）。结论LASP1蛋白在肾透明细胞癌中高表达，其高表达可能与肾癌的发生发展有关，并可能通过EMT调节肾癌细胞的侵袭和迁移能力，促进肿瘤的淋巴结转移。

LIM和SH3蛋白1mRNA和蛋白在人胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨LIM和SH3蛋白1（Laspl）mRNA及蛋白水平在人胃癌组织中的表达及其临床意义。方法分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）、Westernblot和免疫组织化学（IHC）方法，检测Laspl在82例胃癌患者的癌组织及配对癌旁正常组织标本中mRNA和蛋白表达水平，探讨其与胃癌患者不同临床病理指标之间的关系。结果人胃癌组织较癌旁正常胃黏膜组织Laspl mRNA（3．098±0．215比2．147±0．104，P〈0．05）和蛋白（3．223±0．210比2．134±0．160，P〈0．05）表达水平均显著升高。Laspl mRNA水平在淋巴结转移阳性（1．64±1．52比3．92±1．47，P〈0．05）及晚期（Ⅲ＋Ⅳ期）胃癌（1．95±1．32比3．48±1．39，P〈0．05）患者中表达明显增高；同样，免疫组织化学结果显示Laspl蛋白在淋巴结转移阳性（Z=-2．078，P〈0．05）及晚期（Z=-2．382，P〈0．05）胃癌患者中表达明显增高，Laspl mRNA及蛋白表达水平与胃癌病理分级、肿瘤大小无明显相关（P〉0．05）。结论Laspl在人胃癌组织中表达增高，其表达水平的升高可能与胃癌的进展和淋巴结转移呈正相关。

血清circSHKBP1、SOX3 mRNA表达与晚期胃癌患者临床病理特征及化疗疗效的关系

目的研究环状RNA SH3结构域激酶结合蛋白1(circSHKBP1)、SRY-box转录因子3(SOX3)mRNA表达与晚期胃癌患者化疗疗效和预后的关系。方法选取2019年1月—2021年2月空军军医大学唐都医院肿瘤科收治的晚期胃癌患者104例为研究组,根据化疗疗效分为化疗敏感亚组64例和化疗抵抗亚组40例;选取同期健康体检者50例为健康对照组。采用实时荧光定量PCR检测各组血清circSHKBP1、SOX3 mRNA水平;分析血清circSHKBP1、SOX3 mRNA表达与晚期胃癌患者临床病理特征的关系;多因素Logistic回归分析影响化疗疗效的因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circSHKBP1、SOX3 mRNA对晚期胃癌患者化疗疗效的评估价值。结果研究组血清circSHKBP1、SOX3 mRNA表达高于健康对照组(t/P=65.118/<0.001、51.471/<0.001)。肿瘤分期Ⅳ期、低分化晚期胃癌患者血清circSHKBP1、SOX3 mRNA表达高于肿瘤分期ⅢB期、高中分化的患者(circSHKBP1:t/P=37.283/<0.001、31.545/<0.001;SOX3:t/P=19.169/<0.001、26.334/<0.001)。化疗抵抗亚组肿瘤分期Ⅳ期百分比,血清circSHKBP1、SOX3 mRNA表达高于化疗敏感亚组(t/P=10.037/0.002,48.609/<0.001,26.775/<0.001)。肿瘤分期Ⅳ期及血清circSHKBP1、SOX3 mRNA高表达是影响晚期胃癌化疗抵抗的危险因素[OR(95%CI)=1.594(1.252~2.028),1.306(1.144~1.492),1.603(1.190~2.160)]。circSHKBP1、SOX3 mRNA及二者联合预测晚期胃癌患者化疗疗效的AUC分别为0.844、0.851、0.922,二者联合优于各自单独预测效能(Z/P=4.745/<0.001、4.310/<0.001)。结论晚期胃癌患者血清circSHKBP1、SOX3 mRNA表达升高,且均与肿瘤分化程度,肿瘤分期及化疗疗效有关,两者联合对晚期胃癌患者化疗疗效有较好的评估价值。

Hsa-miR-218靶向调控LASP1对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:探讨人微小RNA-218(Homo sapiens microRNA-218,hsa-miR-218)对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法:构建hsa-miR-218的重组慢病毒表达载体pmiR-218,并将pmiR-218感染至HeLa细胞,台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化,WST-8法检测细胞活力,构建萤光素酶报告基因载体验证miR-218与LIM和SH3蛋白1(LASP1)的相互结合作用,real-time PCR检测LASP1的mRNA相对表达水平,Western blot检测LASP1蛋白的表达水平。结果:经DNA测序证实与设计完全一致,测序结果显示成功构建了重组慢病毒表达载体pmiR-218。pmiR-218转染HeLa细胞72 h后HeLa细胞存活数量为176±9,对HeLa细胞活力的抑制率具有时间效应关系,较空白对照组比较,差异显著(P<0.05);萤光素酶活性结果显示,克隆LASP1-3’UTR的质粒与miR-218 mimics共转染293T细胞,引起萤光素酶活性的减低;real-time PCR结果显示转染pmiR-218后,miR-218表达水平增加;过表达miR-128能下调LASP1 mRNA及蛋白的相对表达水平,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:pmiR-218有效抑制HeLa细胞的生长,并具有时间-效应关系,其机制可能是miR-218通过靶向结合LASP1的3’UTR,从而下调其在HeLa细胞的表达有关。

结直肠癌组织LASP1、MMP-9表达变化及其与患者临床病理参数的关系

目的观察结直肠癌组织LIM和SH3蛋白1(LASP1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化,并探讨其在结直肠癌侵袭和转移中的作用。方法选择结直肠癌患者70例,采用免疫组化En Vision两步法检测结直肠癌及其配对的癌旁正常组织LASP1、MMP-9表达,分析二者表达的关系及其与患者临床病理参数的关系。结果结直肠癌组织LASP1、MMP-9阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P均<0.05)。结直肠癌组织LASP1阳性表达与MMP-9阳性表达呈正相关关系(r=0.664,P<0.01)。结直肠癌组织LASP1、MMP-9阳性表达均与肿瘤临床分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05)。结论结直肠癌组织LASP1、MMP-9表达升高;二者表达变化可协同促进结直肠癌侵袭和转移。

同源建模构建ABLSH3突变体及其与RIN1蛋白结合能力的分析

Bcr-Abl SH3与RIN1富含脯氨酸的序列结合,激活Bcr-Abl酪氨酸激酶活性,引起慢粒患者对伊马替尼耐药,为改变两者结合方式解决耐药问题,笔者对Bcr-Abl SH3结构域活性位点进行分析。Pep Site2.0软件分析RIN1与Bcr-Abl SH3结合部位及特点,选择突变位点,VMD1.8.7和NAMD2.6软件动态模拟获取稳定的SH3突变体结构,Pep Site2.0分析突变体和RIN1结合能力大小。两者结合部位位于SH3 90-118氨基酸位点,3种突变方式中双位点突变效果明显优于单位点及缩短的片段,单位点突变中并非所有被选择的位点突变后结合能力都提高,说明RIN1与SH3结合不仅依赖结合部位的特异氨基酸,其周围的氨基酸对维持两者的结合有着至关重要的作用。

非小细胞肺癌组织中SORBS1的临床意义及基因富集分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中含Sorbin和SH3结构域的蛋白1(SORBS1)的临床意义及其相关的通路和生物学过程。方法收集本院2016年1月至2019年12月手术切除的126对NSCLC组织和癌旁组织,采用实时定量PCR(qPCR)检测上述组织的SORBS1水平,分层分析组织SORBS1水平与NSCLC临床病理特征关系,结合随访数据进行生存分析并在Kaplan-Meier Plotter数据库中验证其预后意义。采用LinkedOmics数据库对SORBS1的基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)、Panther、Reactome和Wiki通路进行基因集富集分析(GESA)。结果NSCLC组织的SORBS1水平为0.668±0.036,低于癌旁组织的1.712±0.053(P<0.05)。分层分析发现组织SORBS1水平与TNM分期、肿瘤大小和分化程度有关(P<0.05),而与性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移和病理类型无关(P>0.05)。单因素分析显示TNM分期、肿瘤大小、分化程度和组织SORBS1水平与NSCLC患者的OS有关,其中高水平者的中位OS为57.0个月,优于低水平者的35.0个月,差异有统计学意义(HR=3.033,95%CI:1.632~5.637,P<0.001),进一步多因素分析发现组织SORBS1水平是OS的危险因素(HR=2.745,95%CI:1.547~5.162,P=0.024)。GO分析结果表明:SORBS1的生物学过程主要富集在的细胞-细胞粘附(GO:0098742)的调控,分子功能的变化主要集中在细胞外基质结构成分(GO:0005201),细胞成分的变化主要集中在细胞外基质(GO:0031012)。KEGG、Panther、Reactome和Wiki通路分析结果显示:SORBS1富集于细胞粘附分子(hsa04514)、趋化因子和细胞因子信号通路介导的炎症反应(P00031)、细胞外基质组织(R-HSA-1474244)和软骨内骨化(WP474)相关通路。结论SORBS1在NSCLC组织中低表达且与不良预后和恶性进展指标有关,且该基因与细胞外基质相关基因表达及相关信号通路调控关系密切,有望成为NCSLC防治的潜在靶点。

TGF-β1/Smad通路下调重度子痫前期LASP1的表达抑制滋养细胞的侵袭

目的探讨LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)在重度子痫前期(sPE)患者胎盘组织中的表达及其对经转化生长因子-β1(TGF-β1)处理的滋养细胞生物学功能的影响。方法收集2022年4月至10月于新疆医科大学第六附属医院住院行剖宫产分娩的46例孕妇的胎盘组织作为研究对象,将其中23例sPE患者的胎盘组织作为sPE组,23例健康孕妇的胎盘组织作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blotting和免疫组织化学染色法检测两组胎盘组织中LASP1 mRNA与蛋白的表达。将人滋养层细胞系HTR-8分别转染过表达LASP1的pcDNA3.1质粒(pcDNA-LASP1)或阴性对照质粒(pcDNA-NC),采用TGF-β1处理上述细胞,并将其分为Ctrl组、TGF-β1组、TGF-β1+pcDNA-NC组和TGF-β1+pcDNA-LASP1组。分别采用Transwell实验和Western blotting法检测各组HTR-8细胞迁移、侵袭能力和细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。采用Western blotting法检测各组HTR8细胞中TGF-β1/Smad通路pSmad2/3和Smad7蛋白的表达水平。结果与对照组相比,LASP1 mRNA与蛋白在sPE组胎盘组织中的表达水平均显著降低(P<0.05)。与Ctrl组相比,TGF-β1组、TGF-β1+pcDNA-NC组和TGF-β1+pcDNA-LASP1组HTR-8细胞侵袭、迁移能力和E-cadherin蛋白表达均显著降低,而N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与TGF-β1+pcDNA-NC组相比,TGF-β1+pcDNA-LASP1组HTR-8细胞侵袭和迁移能力和E-cadherin蛋白表达水平均显著升高,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与Ctrl组相比,TGF-β1组、TGF-β1+pcDNA-NC组和TGF-β1+pcDNA-LASP1组HTR-8细胞pSmad2/3表达水平显著升高,而Smad7表达水平显著降低(P<0.05)。与TGF-β1+pcDNA-NC组相比,TGF-β1+pcDNA-LASP1组pSmad2/3表达水平降低,Smad7表达水平升高(P<0.05)。结论过表达LASP1可通过抑制TGF-β1/Smad通路来改善sPE患者滋养细胞迁移、侵袭和EMT功能损伤。

缺血性脑卒中患者外周血中SORBS1表达水平与炎症标志物的相关性分析

目的探讨缺血性脑卒中患者外周血中含Sorbin和SH3结构域的蛋白1(SORBS1)表达水平与炎症标志物的相关性。方法选取2020年5月至2021年2月在广州医科大学附属第六医院脑血管病科住院的缺血性脑卒中患者64例作为观察组,另选取同期本院64例健康体检者作为对照组。罗氏全自动生化分析仪检测血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、血清淀粉样蛋白(SAA)和同型半胱氨酸(Hcy)水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清SORBS1水平。亚硫酸氢盐处理后测序(BSP)法检测SORBS1启动子的甲基化水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测SORBS1表达水平。采用Spearman法分析SORBS1表达水平与各种炎症标志物水平的相关性。结果观察组外周血CRP、IL-6、SAA和Hcy水平均高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,观察组SORBS1 mRNA相对表达水平降低(P<0.05)。观察组SORBS1蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。外周血中SORBS1 mRNA相对表达水平与CRP、IL-6、SAA水平均呈负相关(r=-0.763、-0.814、-0.735,P<0.05)。结论缺血性脑卒中患者外周血中炎症标志物水平升高,SORBS1 mRNA表达下降,SORBS1 mRNA水平与炎症标志物水平呈负相关。SORBS1基因可能是抑制缺血性脑卒中患者炎症反应的一种潜在生物指标。

LASP1在胶质母细胞瘤组织中的表达及其对肿瘤耐药和患者预后的影响

目的探究LASP1蛋白(LIM and SH3 protein 1)在胶质母细胞瘤组织中的表达及其与患者临床病理特征、耐药和预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测LASP1在140例胶质母细胞瘤组织和15例正常脑组织中的表达,分析其表达及与患者临床和预后的关系。结果与正常脑组织相比,LASP1在胶质母细胞瘤组织中表达明显升高(P <0.01),并且与肿瘤Ki67的表达、肿瘤大小、囊性改变相关(均P <0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,LASP1高表达患者中位生存时间、无复发中位生存时间较低表达患者均明显缩短(均P <0.01);替莫唑胺化疗在高表达患者中无明显生存获益(P> 0.05)。单因素及Cox多因素分析提示,LASP1的表达及替莫唑胺化疗是胶质母细胞瘤独立危险因素(均P <0.05)。结论 LASP1在胶质母细胞瘤中高表达,与患者预后及替莫唑胺敏感性相关,其可能是胶质母细胞瘤潜在的治疗靶点和预后评估的分子标志物。

敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力

目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。

脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平变化及其诊断价值

目的:观察脑胶质瘤病人血清含LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)、锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)水平变化,并探讨血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。方法:选取2017年6月—2020年3月沧州市人民医院神经外科收治的67例脑胶质瘤病人作为研究组,采集病人入院后及术后7 d静脉血,收集病人的临床资料,另选取同期在我院体检的60名健康体检者作为对照组,采集静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清LASP1水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血清ZBTB20水平;采用Pearson相关性分析法分析LASP1与ZBTB20表达的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。结果:研究组病人血清LASP1、ZBTB20水平明显高于对照组(P<0.001),术后7 d病人血清LASP1、ZBTB20水平明显低于术前(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,脑胶质瘤病人血清LASP1与ZBTB20水平呈正相关(r=0.263,P=0.031)。血清LASP1、ZBTB20及二者联合诊断脑胶质瘤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.770,0.859,0.904,敏感度分别为76.12%、77.61%、74.63%,特异度分别为68.33%、83.33%、95.00%,二者联合诊断的效能优于各自单独诊断(Z=3.643,P<0.001;Z=2.129,P=0.003)。结论:脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平显著上调,二者联合检测对脑胶质瘤具有较高的诊断价值。