LINC00294通过AKT/mTOR/HIF-1a通路促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)LINC00294在乳腺癌组织和细胞中的表达变化,及其对乳腺癌细胞生物学特性的影响和可能的机制。方法利用GEO数据库资源(GSE45827)中的41例乳腺癌组织和11例癌旁组织转录组测序数据分析差异基因,采用qRT-PCR实验检测20对来自本院2021-2022年确诊的乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,以及正常人乳腺上皮细胞MCF-10A和人乳腺癌细胞MCF-7、SK-BR-3和MDA-MB-231中LINC00294的表达;干扰LINC00294后采用CCK-8检测细胞增殖变化;采用流式细胞术、Western blot检测细胞凋亡和相关蛋白表达变化;采用划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭;裸鼠原位成瘤实验检测干扰LINC00294对体内肿瘤生长的影响;采用Western blot检测干扰LINC00294后AKT/mTOR通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT、AKT及其下游靶分子缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达情况。结果通过GEO数据库筛选出差异表达的基因LINC00294;LINC00294在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MCF-7、SK-BR-3和MDA-MB-231中表达显著增高(P<0.05);干扰LINC00294后MCF-7细胞增殖能力下降、凋亡相关蛋白表达增加、侵袭和迁移能力下降(P<0.05)。干扰HIF-1α可以抑制LINC00294的表达(P<0.05);干扰LINC00294后AKT/mTOR信号通路中p-AKT和p-mTOR蛋白及其下游靶分子HIF-1α的表达减少(P<0.05)。结论乳腺癌中高表达的LINC00294可能通过AKT/mTOR/HIF-1α信号通路影响乳腺癌的增殖、侵袭和迁移等,LINC00294可能与乳腺癌的发展密切相关。

LINC00294调控HPV18^(+)宫颈癌细胞生长的机制

目的探讨LINC00294靶向调控微小RNA-21(miR-21)对人乳头状瘤病毒(HPV)18阳性(+)宫颈癌细胞(HPV18^(+)HeLa)增殖与凋亡的影响。方法收集2018年4月至2021年5月在本院就诊的63例宫颈癌患者的宫颈癌组织标本,其中35例标本为HPV18-,28例标本为HPV18^(+),使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织中LINC00294、miR-21表达水平;体外培养人宫颈癌细胞株HPV18^(+)HeLa,将其分为对照组、LINC00294-pcDNA组、pcDNA组、miR-21inhibitor组、NCinhibitor组、LINC00294-pcDNA+miR-21mimics组、LINC00294-pcDNA+miRNC组,使用RT-qPCR法检测各组HPV18^(+)HeLa细胞LINC00294、miR-21表达情况;应用双荧光素酶报告基因实验验证LINC00294与miR-21的靶向关系;应用CCK-8法检测各组HPV18^(+)HeLa细胞增殖情况;使用流式细胞术检测各组HPV18^(+)HeLa细胞凋亡情况;应用免疫印迹法(Westernblotting)检测各组HPV18^(+)HeLa细胞CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与HPV18-宫颈癌组织比较,HPV18^(+)宫颈癌组织中LINC00294表达水平显著降低,miR-21表达水平显著升高(均P<0.05)。经生物信息学(starBasev2.0)分析显示,LINC00294与miR-213’UTR区有结合位点,且经双荧光素酶报告基因实验验证,LINC00294与miR-21存在靶向关系。过表达LINC00294或抑制miR-21表达,HPV18^(+)HeLa细胞A值、CyclinD1、Bcl-2蛋白及miR-21表达水平显著下降,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);过表达miR-21可部分逆转过表达LINC00294对HPV18^(+)HeLa细胞的增殖抑制作用和凋亡促进作用。结论HPV18^(+)宫颈癌组织中LINC00294表达水平显著降低,过表达LINC00294可抑制miR-21表达,抑制HPV18^(+)宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡。