干扰LINC00308促进miR-634对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究干扰长链非编码RNA(lncRNA)LINC00308是否通过促进微小RNA(miRNA)-634影响前列腺癌细胞的增殖与凋亡。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌组织中LINC00308的表达。利用LINC00308小干扰RNA(si-LINC00308)转染前列腺癌细胞PC-3M和DU145,构建干扰LINC00308的细胞,采用qRT-PCR检测LINC00308和miR-634的表达水平,流式细胞术评估细胞的周期与凋亡,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞核相关抗原Ki67(Ki67)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)蛋白的表达。starBase在线工具预测结合双荧光素酶报告实验分析LINC00308对miR-634的靶向调控。在PC-3M和DU145细胞中转染miR-634 mimic,利用上述方法检测miR-634在细胞增殖凋亡中的作用。结果前列腺癌组织中的LINC00308表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。干扰LINC00308显著提高PC-3M和DU145细胞的miR-634的表达水平、G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率和Caspase3蛋白水平,明显降低S期细胞比例、Ki67蛋白水平(P<0.05)。LINC00308靶向调控miR-634的表达。转染miR-634 mimic显著增加PC-3M和DU145细胞的G0-G1期细胞比例、凋亡率和Caspase3蛋白水平,明显减少S期细胞比例和Ki67蛋白水平(P<0.05)。结论干扰LINC00308可以促进miR-634的表达,阻滞前列腺癌细胞周期,并诱导细胞凋亡。

lncRNA LINC00308作为ceRNA通过调控miR-361-5p/TRIP13轴促进前列腺癌PC3细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00308对前列腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的影响及其相关作用机制。方法:利用基因芯片在前列腺癌组织与癌旁对照组织中筛选差异表达的lncRNA及mRNA,并确定LINC00308及甲状腺激素受体因子13(thyroid hormone receptor interactor13,TRIP13)为研究对象。MTT实验、平板克隆及Transwell和划痕实验检测LINC00308对前列腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,应用裸鼠移植瘤在体内验证上述影响,应用Western blotting及免疫组化实验在瘤组织和癌细胞中探究LINC00308对TRIP13表达的影响。生物信息学分析技术与RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)及qPCR和双荧光素酶基因报告实验预测并探究miR-361-5p与LINC00308及TRIP13之间的相互作用机制,并利用平板克隆、Transwell侵袭实验对癌细胞恶性生物行为进行验证。结果:芯片结果及qPCR共同证实LINC00308(P<0.01)与TRIP13(P<0.05)在前列腺癌组织及4种细胞系中均异常高表达;细胞功能实验结果表明过表达LINC00308可以促进前列腺癌细胞PC3的增殖、侵袭及迁移能力(均P<0.05),而下调前列腺癌细胞中LINC00308表达起相反作用。裸鼠移植瘤实验证实,LINC00308能够在体内促进前列腺癌PC3细胞的成瘤(P<0.05或P<0.01),且能够在体内体外促进TRIP13表达(P<0.05)。生物信息学分析与RIP及qPCR和双荧光素酶基因报告实验结果证实miR-361-5p能够分别与LINC00308与TRIP13的3'-UTR靶向结合,且LINC00308能够通过吸附miR-361-5p而作为内源性竞争RNA(competing endoge-nous RNA,ceRNA)调控TRIP13的表达,MTT、平板克隆及Transwell实验检测癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力变化证实了三者之间的调控作用。结论:在前列腺癌组织和细胞中异常高表达的LINC00308通过发挥ceRNA的功能抑制miR-361-5p表达而增强TRIP13表达,从而促进前列腺癌的增殖、侵袭及迁移能力。