LINC00472、LINC00969表达与非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探究LINC00472、LINC00969表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年9月至2020年9月在河南大学第一附属医院接受治疗的120例NSCLC患者为研究对象,收集患者手术切除的癌组织及癌旁组织,根据患者预后情况分为生存组(n=73)和死亡组(n=47)。采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测纳入患者LINC00472、LINC00969水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LINC00472、LINC00969水平对NSCLC患者预后的预测价值;采用Kaplan-Meier法分析NSCLC患者LINC00472、LINC00969水平与预后的关系;采用COX回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织相比,NSCLC患者癌组织中LINC00472水平降低,LINC00969水平升高(P<0.05)。与生存组相比,死亡组患者中LINC00472表达水平降低,LINC00969表达水平升高(P<0.05)。不同TNM分期、淋巴结转移、分化程度的NSCLC患者LINC00472、LINC00969表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LINC00472低表达、LINC00969高表达的NSCLC患者3年生存率低于LINC00472高表达、LINC00969低表达的患者(χ2=6.728、10.996,P=0.009、0.001)。LINC00472、LINC00969、TNM分期、分化程度、淋巴结转移是NSCLC患者预后的影响因素(P<0.05)。LINC00472、LINC00969二者联合检测NSCLC患者预后的曲线下面积(AUC)最高,优于二者单独预测(P<0.05)。结论LINC00472、LINC 00969与NSCLC患者临床病理特征有关,且二者联合检测对患者预后的预测效能较高。

LINC00472通过下调miR-155-5p表达抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472通过靶向微小RNA-765(miR-155-5p)在口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及分子机制。方法:生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证LINC00472与miR-155-5p的关系。采用qRT-PCR检测40例OSCC组织样本及SCC-15细胞系中LINC00472和miR-155-5p表达水平。将SCC-15细胞分为对照组、LINC00472过表达组、miR-155-5p过表达组和LINC00472过表达+miR-155-5p过表达组。用MTT法、划痕实验和Transwell法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。用qRT-PCR和western blotting检测细胞钙黏附蛋白E(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果:miR-155-5p是LINC00472的直接靶基因。OSCC组织和SCC-15细胞中LINC00472低表达(P<0.01),而miR-155-5p高表达(P<0.01),二者表达呈负相关性(r=-0.766,P<0.01)。与对照组比较,LINC00472过表达组SCC-15细胞的增殖、迁移、侵袭减弱,Vimentin和MMP9表达减少、E-cadherin表达增加(P<0.01);miR-155-5p过表达组SCC-15细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强,Vimentin和MMP9表达增加、E-cadherin表达减少(P<0.01)。miR-155-5p过表达可逆转过表达LINC00472对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭等的作用。结论:LINC00472抑制OSCC的发生发展,LINC00472/miR-155-5p调控轴的发现可能为OSCC提供潜在的治疗靶点。

GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中LINC00472的表达及其意义

目的:探讨在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中长链非编码RNA LINC00472的表达特征及其生物学意义。方法:以DMSO作为溶剂对照组,实验组采用8μg/mL的GMA染毒处理72 h,重复染毒3次,传代培养,收获两组细胞的第10、20和30代(分别代表前、中、后期)16HBE细胞,采用Arraystar人类LncRNA芯片(v4.0)分析细胞中LINC00472的表达改变,实时荧光定量PCR(qPCR)检测LINC00472和预测靶基因miR-24-3p的相对表达水平。结果:芯片检测结果显示,与同代龄DMSO对照组相比,GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中LINC00472在转化第10代和第20代分别下调2.30倍和3.57倍,第30代上调2.32倍。qPCR检测结果表明,与同代龄对照组相比,LINC00472在早期的相对表达水平差异无统计学意义,而在中期和后期的相对表达水平的变化情况与芯片结果基本一致,其可能的靶基因miR-24-3p在不同时期相对表达水平的差异均具有统计学意义(P<0.05),但差异倍数均<2。结论:LINC00472在GMA诱导16HBE细胞恶性转化的前期表达水平未发生明显改变,而在细胞恶性转化的中期低表达、后期高表达,推测LINC00472可能在GMA诱导16HBE细胞恶性转化后期发挥作用,但LINC00472和miR-24-3p在此过程中是否存在相互作用以及其作用机制有待进一步研究。

沉默lncRNA LINC00472对脂多糖诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制

目的探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472对脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2(以下称HK-2细胞),随机分为对照组、LPS组、LPS+si-LINC00472组、LPS+si-NC组、LPS+miR-136-3p组、LPS+miR-NC组、LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组和LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组。LPS+si-LINC00472组转染si-LINC00472,LPS+si-NC组转染si-NC,LPS+miR-136-3p组转染miR-136-3p,LPS+miR-NC组转染miR-NC,LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组转染si-LINC00472、anti-miR-136-3p,LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组转染si-LINC00472、anti-miR-NC,转染6 h后给予1μg/mL LPS刺激24 h。LPS组不予转染,仅给予1μg/mL LPS刺激24 h。对照组常规培养,不予转染和LPS刺激。收集各组干预后细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00472、miR-136-3p表达,采用MTT法检测再培养48 h细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测培养上清液IL-6、IL-8,采用Western blotting法检测程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达。通过LncBase Predicted v.2在线预测网站、starBase数据库预测lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的靶向调控关系。结果LPS组lncRNA LINC00472相对表达量明显高于对照组,miR-136-3p相对表达量明显低于对照组,细胞增殖活性亦明显低于对照组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显高于对照组(P均<0.05)。LPS+si-LINC00472组lncRNA LINC00472相对表达量明显低于LPS+si-NC组,miR-136-3p相对表达量明显高于LPS+si-NC组,细胞增殖活性亦明显高于LPS+si-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显低于对照组(P均<0.05)。LPS+miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显高于LPS+miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显低于LPS+miR-NC组(P均<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(P均<0.05)。经LncBase Predicted v.2在线预测网站和starBase数据库预测并经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA LINC00472与miR-136-3p存在靶向结合位点,miR-136-3p与PDCD4存在靶向结合位点。结论沉默lncRNA LINC00472可通过促进miR-136-3p表达、抑制PDCD4表达,减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。

LINC00472保护脂多糖诱导的血管内皮细胞氧化损伤机制

目的探讨LINC00472对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化损伤的影响及其机制。方法 LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)建立血管内皮细胞氧化损伤模型,将si-NC、si-LINC00472、微小RNA(miR)-NC、miR-496 mimics、si-LINC00472与anti-miR-NC(共转染)、si-LINC00472与anti-miR-496分别转染至HUVECs;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00472和miR-496表达;检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00472与miR-496的靶向关系;蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cleaved-Caspase-9)蛋白表达。两组间比较行t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 LPS组HUVECs中LINC00472的表达量高于Con组(2.77±0.25比0.93±0.02),miR-496的表达低于Con组(0.35±0.03比0.91±0.03),差异有统计学意义(t=21.231、64.789,P<0.05)。LPS+si-LINC00472组LDH的活性和MDA表达低于LPS+si-NC组[LDH活性(212.58±17.33) U/L比(662.85±29.17) U/L、MDA(3.93±0.32) nmol/mg比(13.42±1.26) nmol/mg],SOD活性高于LPS+si-NC组[(58.31±5.76) U/mg比(17.87±1.65) U/mg],差异有统计学意义(t=52.399、42.608,P<0.05)。LPS+si-LINC00472组细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+si-NC组[(9.86±0.85)%比(26.49±2.17)%、0.31±0.03比0.67±0.06、0.21±0.02比0.58±0.05],差异有统计学意义(t=41.245、35.291、19.738,P<0.05)。LPS+miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+miR-NC组[(254.91±21.97) U/L比(651.05±26.25) U/L、(5.64±0.47) nmol/mg比(14.17±1.05) nmol/mg、(12.92±1.13)%比(25.18±2.16)%、0.37±0.03比0.68±0.05、0.29±0.02比0.57±0.03],SOD活性高于LPS+miR-NC组(49.01±4.12比18.02±1.53),差异有统计学意义(t=34.718、22.245、21.154、15.088、15.949、23.297,P<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组[(594.06±27.59) U/L比(206.34±21.91) U/L、(9.48±0.77) nmol/mg比(3.88±0.25) nmol/mg、(19.64±1.18)%比(9.34±0.71)%、0.57±0.04比0.29±0.03、0.47±0.04比0.20±0.02],SOD活性低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(27.52±2.53比56.58±5.44),差异有统计学意义(t=33.015、20.752、14.531、22.438、16.800、18.112,P<0.05)。结论 LINC00472可通过促进miR-496表达来抑制氧化应激及细胞凋亡,并减轻LPS诱导的血管内皮细胞氧化损伤。

南蛇藤提取物对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的探讨南蛇藤提取物对多发性骨髓瘤细胞(U-1996)增殖、凋亡的影响和分子机制。方法设置对照组、南蛇藤提取物组、si-NC组、si-LINC00472组、pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00472组、南蛇藤提取物+si-NC组、南蛇藤提取物+si-LINC00472组。实时定量PCR检测LINC00472表达,CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,蛋白质印记检测磷酸化的磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)水平。结果南蛇藤提取物处理后U-1996细胞活力以及p-PI3K和p-Akt蛋白表达降低,凋亡率、LINC0047表达升高(P<0.05)。抑制LINC00472表达后,U-1996细胞活力以及p-PI3K和p-Akt蛋白表达升高,凋亡率降低(P<0.05)。过表达LINC00472后,U-1996细胞活力以及p-PI3K和p-Akt蛋白表达降低,凋亡率升高(P<0.05)。抑制LINC0047能够逆转南蛇藤提取对U-1996细胞增殖、凋亡以及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论南蛇藤提取物通过上调LINC00472抑制PI3K/Akt信号通路来抑制多发性骨髓瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。