LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌转移的恶性进展

目的探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌恶性进展及其潜在的分子机制。方法选取2021年6月11日至2023年6月11日在河南大学淮河医院确诊为结直肠癌的患者96例为研究对象,分别取患者的癌组织和癌旁正常组织。体外培养结直肠癌细胞系(SW620、HCT116、HT29、DLD-1、LOVO、Caco-2)和结直肠正常细胞(NCM460),qRT-PCR检测结直肠癌组织和细胞系中LINC00626、KHSRP的表达情况。筛选出慢病毒感染细胞系,SW620和HCT116细胞系分别转染敲降慢病毒及其对照,HT29和DLD-1细胞系分别转染过表达慢病毒及其对照。选取稳定转染的细胞系进行细胞功能实验,检测增殖、迁移、侵袭能力。小鼠活体动物实验检测LINC00626对结直肠癌肿瘤生长和迁移的影响。Western blot法检测稳染细胞中KHSRP蛋白的表达水平。拯救实验研究LINC00626与KHSRP的调控关系。结果qRT-PCR显示,在结直肠癌组织和细胞系中LINC00626低表达,而KHSRP高表达。细胞功能实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组在SW620和HCT116细胞促进细胞增殖、细胞迁移、侵袭,过表达组则反之。细胞拯救实验显示,LINC00626+KHSRP可显著逆转敲降LINC00626对细胞增殖、细胞迁移、侵袭的促进作用。裸鼠实验中,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组裸鼠肿瘤体积和重量、细胞增殖率和结直肠癌肺转移病灶数目明显增加;过表达结果相反。信号通路实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组JAK1、STAT3mRNA的表达量显著上调,过表达组结果相反。结论LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴,抑制结直肠癌转移的恶性进程。

高表达LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴促进食管胃结合部腺癌转移的恶性进展

目的探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控食管胃结合部腺癌的恶性进展及分子机制。方法收集并比较食管胃结合部腺癌组织和癌旁组织LINC00626、KHSRP的表达水平。qRT-PCR法检测食管腺癌细胞系(OE-19、TE-7、BIC-1、FLO-1、SK-GT-4、BE-3)与正常食管上皮细胞系(Het-1A)中LINC00626、KHSRP的表达差异。利用慢病毒试剂,构建稳定敲降LINC00626的OE-19、TE-7细胞和稳定过表达LINC00626的FLO-1、SK-GT-4。取对数生长期OE-19细胞分为sh-NC组(转染LV3-NC慢病毒)、sh-LINC00626组(转染敲降LINC0062慢病毒),TE-7细胞同上分组;取对数生长期FLO-1细胞分为Vector组(转染LV6-NC慢病毒)、INC00626组(转染过表达LINC0062慢病毒),SK-GT-4细胞同上分组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell迁移/侵袭实验检测敲降和过表达LINC00626后对食管腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。裸鼠皮下成瘤实验、肺转移实验检测敲降和过表达LINC006266在活体动物体内的作用。Western blot实验检测敲降和过表达LINC00626后KHSRP和JAK/STAT通路蛋白的表达情况。结果LINC00626和KHSRP在食管胃结合部腺癌组织和食管腺癌细胞中表达量显著升高(P<0.05)。敲降LINC00626后,体内和体外食管腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭水平显著下降(P<0.01),过表达LINC00626后则效果反之(P<0.01)。在敲降LINC0626后,JAK/STAT信号通路中JAK1、STAT3磷酸化水平明显降低(P<0.05),过表达LINC00626后情况则反之(P<0.05)。结论LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控食管胃结合部腺癌转移的恶性进程。

LINC00626通过JAK1/STAT3信号通路对肺鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的影响

目的探究LINC00626在肺鳞状细胞癌恶性进程中的作用及其分子机制。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测144对癌组织和癌旁组织、正常肺上皮细胞株和肺癌细胞株中LINC00626的表达量与肺鳞状细胞癌病理指标间的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LINC00626对肺鳞癌的诊断价值。将敲降的LINC00626及其敲降对照慢病毒转入H1437细胞中,命名为sh-NC组和sh-LINC00626组。将过表达LINC00626慢病毒及其过表达对照慢病毒转入A549细胞中,命名为Vetor组和LINC00626组。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验、菌落形成实验、细胞划痕实验和Transwell小室实验检测LINC00626体外细胞学功能。采用裸鼠皮下荷瘤和尾静脉注射肺转移模型检测LINC00626在活体动物体内对细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。采用qPCR和蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测LINC00626表达水平与JAK/STAT信号通路的相关性。结果PCR和RT-qPCR结果显示,与癌旁组织相比,LINC00626在肺鳞癌组织中显著上调(P<0.001),且与患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。与16HBE细胞相比,LINC00626在H1437和H1975细胞中相对表达较高(P<0.01),在A549和H1299细胞中相对表达较低(P<0.001)。与sh-NC组相比,sh-LINC00626组中p-JAK1/JAK1、STAT3的mRNA水平显著降低(P<0.01);与Vector组相比,LINC00626组中p-JAK1/JAK1、STAT3的mRNA水平显著增加(P<0.01,P<0.05)。体外细胞功能实验和体内动物实验结果显示,与对照组相比,LINC00626过表达或敲低组对肺鳞癌的增殖、侵袭和转移有明显的促进或抑制作用(P<0.001)。WB实验结果显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组中p-JAK1/JAK1、STAT3的蛋白水平显著降低(P<0.001);与Vector组相比,LINC00626组中p-JAK1/JAK1、STAT3的蛋白水平显著增加(P<0.001)。结论LINC00626通过JAK1/STAT3信号通路促进肺鳞癌的增殖、侵袭和转移。为肺鳞癌的临床诊断提供了新的生物标志物和潜在的治疗靶点。

血清LINC00626在老年直肠癌患者新辅助放化疗疗效预测中的作用研究

目的探讨血清长基因间非蛋白编码RNA 626(LINC00626)在老年直肠癌患者新辅助放化疗疗效和预后预测中的作用。方法选取6例老年(≥75岁)局部进展期直肠癌患者,分析对新辅助放化疗反应良好与反应不良患者的血清lncRNA表达谱,筛选差异表达lncRNA,选出第1位的基因LINC00626。进一步选取86例老年直肠癌患者,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者的血清LINC00626水平,并分为LINC00626高表达组(LINC00626相对表达量≥5.1)18例与LINC00626低表达组(LINC00626相对表达量<5.1)68例。比较两组患者的3年总生存率,并分析LINC00626表达水平与老年直肠癌患者性别、临床分期、癌胚抗原(CEA)水平、肿瘤下缘与肛缘的距离、疗效的关系,分析LINC00626靶基因所在的信号通路。结果 LINC00626高表达组患者的3年总生存率为72.2%,明显高于LINC00626低表达组患者的30.9%,差异有统计学意义(P<0.01)。LINC00626表达水平与老年直肠癌患者性别、临床分期、CEA水平、肿瘤下缘与肛缘的距离无关。LINC00626高表达组患者的CR率高于LINC00626低表达组患者(P<0.05)。LINC00626靶基因主要富集于转录靶点△Np63亚型和Notch等信号通路。结论血清LINC00626可以作为老年局部进展期直肠癌患者新辅助放化疗疗效预测的潜在、无创的肿瘤标志物,与老年肿瘤局部进展期直肠癌患者的远期预后有关。

LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号通路调控食管鳞状细胞癌转移的机制

目的探究基因间长链非编码RNA626(LINC00626)通过Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)/KH型剪切蛋白(KHSRP)信号通路对食管鳞状细胞癌(ESCC)转移的恶性进程的影响及潜在的分子机制。方法选取河南大学淮河医院2020-01-01-2022-12-31微创腔镜手术切除的144例ESCC患者中ESCC组织及癌旁正常组织(距离肿瘤>5 cm)标本作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测ESCC组织、癌旁正常组织、人食管黏膜上皮细胞Het-1A和4株食管癌细胞(EC-9706、OE-33、KYSE-450和SK-GT-4)中LINC00626和KHSRP的表达。慢病毒转染分为LINC00626敲低慢病毒(sh-LINC00626)组及其空转病毒(sh-NC)组、sh-LINC00626+KHSRP组、LINC00626过表达慢病毒(LINC00626)组及其空转病毒(vector)组,qRT-PCR法检测其转染效率。采用细胞计数盒8(CCK8)增殖实验、Transwell小室实验检测LINC00626对ESCC细胞生长的影响,qRT-PCR法检测LINC00626对JAK/STAT家族mRNA水平表达的影响,蛋白质印迹法检测KHSRP对JAK/STAT家族蛋白表达的影响。LINC00626、KHSRP在ESCC组织和癌旁正常组织中的表达差异,LINC00626对细胞迁移能力影响的Transwell实验、分子机制实验中的qRT-PCR实验和蛋白质印迹法结果分析采用两独立样本t检验;LINC00626、KHSRP在人食管黏膜上皮细胞和食管癌细胞系中的表达差异,转染sh-NC、sh-LINC00626+vector、sh-LINC00626+KHSRP后LINC00626表达量的差异,回复实验中的Transwell实验结果分析采用单因素方差分析;CCK8实验结果分析采用双因素方差分析。结果qRT-PCR结果显示:ESCC组织中LINC00626表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义,t=12.68,P<0.001;4株食管癌细胞中LINC00626的表达量高于人食管黏膜上皮细胞Het-1A,F=38.19,P=0.017;ESCC组织中KHSRP表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义,t=19.23,P<0.001;4株食管癌细胞中KHSRP的表达量高于人食管黏膜上皮细胞Het-1A,差异有统计学意义,t=103.20,P<0.001。CCK8增殖实验结果显示:LINC00626组细胞生长率高于vector组,且24、48、72 h差异有统计学意义,F_(不同组别×时间)=1909.00,P<0.05;sh-LINC00626组细胞生长率低于sh-NC组,且24、48、72 h差异均有统计学意义,F_(不同组别×时间)=94.50,P<0.001;回复实验中,sh-LINC00626+KHSRP组细胞生长率高于sh-LINC00626+vector组,且24、48、72 h细胞生长率差异有统计学意义,EC-9706细胞中F_(不同组别×时间)=2653.00,SK-GT-4细胞中F_(不同组别×时间)=543.60,均P<0.05。Transwell小室实验显示:LINC00626组穿过小室的细胞数量高于vector组,差异有统计学意义,t=460.30,P<0.001;sh-LINC00626组穿过小室的细胞数量少于sh-NC组,差异有统计学意义,t=44.00,P<0.001;回复实验中,sh-LINC00626+KHSRP组穿过小室的细胞数量高于sh-LINC00626+vector组,差异有统计学意义,EC-9706细胞中F=252.80,SK-GT-4细胞中F=690.00,均P<0.001。分子机制相关实验结果显示,LINC00626、KHSRP过表达和敲降均可影响JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3的表达,差异有统计学意义,均P<0.05。结论LINC00626、KHSRP在ESCC组织和细胞中均表达上调,且LINC00626可以通过JAK1/STAT3调控KHSRP影响ESCC转移的恶性进程。