抑制LINC00667表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)LINC00667对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法复制类风湿关节炎(RA)模型大鼠,SPF级Wistar大鼠分离踝关节滑膜组织,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RA-FLS中LINC00667和miR-19a-3p的表达。在RA-FLS中分别转染si-NC(si-NC组)、si-LINC00667(si-LINC00667组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-19a-3p模拟物(miR-19a-3p组)、si-LINC00667与anti-miR-NC(si-LINC00667+anti-miR-NC组)、si-LINC00667与anti-miR-19a-3p(si-LINC00667+anti-miR-19a-3p组)。CCK-8法检测各组转染后RA-FLS的增殖抑制率。Transwell法检测RA-FLS迁移、侵袭。Westernblotting检测E钙黏蛋白(Ecadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)表达。双萤光素酶报告验证LINC00667和miR-19a-3p的靶向关系。结果RA模型组滑膜组织中LINC00667表达量约为正常组的270%,miR-19a-3p表达量约为正常组的36%(P<0.05)。转染成功后,si-LINC00667组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于si-NC组(P<0.05),si-LINC00667组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于si-NC组(P<0.05)。LINC00667靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于miR-NC组(P<0.05),miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于miR-NC组(P<0.05)。si-LINC00667+anti-miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量低于si-LINC00667+anti-miR-NC组(P<0.05),si-LINC00667+anti-miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、Ncadherin蛋白相对表达量高于si-LINC00667+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论抑制miR-19a-3p通过靶向LINC00667,抑制RA-FLS的增殖、迁移、侵袭,LINC00667或可用作诊断和治疗RA的靶点。

下调LINC00667靶向调控miR-34a抑制口腔鳞癌CAL-27细胞增殖并诱导细胞凋亡的体外研究

目的:探讨下调LINC00667靶向调控miR-34a对口腔鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的影响。方法:Realtime PCR方法检测正常口腔上皮细胞HOK和口腔鳞癌细胞CAL-27、SCC15、OSC-4中LINC00667表达水平。CAL-27细胞分为Control、sh-NC、sh-LINC00667、sh-LINC00667+Anti-miR-NC、sh-LINC00667+Anti-miR-34a组。MTT实验检测细胞增殖,PI染色法检测细胞周期,Annexin V-FITC方法检测细胞凋亡,荧光素酶报告系统鉴定LINC00667和miR-34a靶向关系。结果:CAL-27、SCC15、OSC-4细胞中LINC00667表达水平均高于HOK(P<0.05),而OSC-4、SCC15细胞中LINC00667表达水平均低于CAL-27细胞(P<0.05)。下调LINC00667后,CAL-27细胞增殖活性下降,G0/G1期细胞比例升高,细胞凋亡率升高(P<0.05),miR-34表达升高。同时下调LINC00667和miR-34a后,CAL-27细胞增殖活性升高,G0/G1期细胞比例降低,细胞凋亡率降低(P<0.05)。LINC00667靶向调控miR-34a。结论:下调LINC00667靶向调控miR-34a可抑制口腔鳞癌CAL-27细胞增殖并诱导细胞凋亡。

LINC00667调控NF-κB信号通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨LINC00667对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+si-con组、HG+si-LINC00667组、HG+si-LINC00667+PBS组、HG+si-LINC00667+TNF-α组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00667的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素1β(IL-1β)和转化生长因子(TGF-β_(1))含量;蛋白质印记(Western blot)检测钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:与NC组比较,HG组HK-2细胞LINC00667、Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_(1)含量升高,NF-κB信号通路激活(P<0.05)。与HG+si-con组比较,HG+si-LINC00667组HK-2细胞Vimentin和α-SMA表达降低,E-cadherin表达升高,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_(1)含量降低,NF-κB信号通路受到抑制(P<0.05)。与HG+si-LINC00667+PBS组比较,HG+si-LINC00667+TNF-α组HK-2细胞NF-κB信号通路激活,Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_(1)含量升高(P<0.05)。结论:沉默LINC00667可抑制高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT,抑制炎症反应,其机制与抑制NF-κB信号通路有关。

LINC00667靶向miR-154-5p调控乳腺癌细胞增殖及凋亡的分子机制研究

目的 探讨LINC00667调控乳腺癌细胞增殖及凋亡的可能作用机制。方法 收集2020年5月至2020年8月邯郸市中心医院收治的51例乳腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用qRT-PCR法检测LINC00667、miR-154-5p的表达量;体外培养人乳腺癌细胞T-47D,si-NC、si-LINC00667、miR-NC、miR-154-5p mimics分别转染至T-47D细胞,si-LINC00667和anti-miR-NC、si-LINC00667和anti-miR-154-5p分别共转染至T-47D细胞;MTT法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-154-5p过表达对野生型载体WT-LINC00667与突变型载体MUT-LINC00667荧光素酶活性的影响;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LINC00667的表达量升高(P<0.05),miR-154-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-LINC00667或转染miR-154-5p mimics后细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),细胞克隆形成数减少(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);miR-154-5p过表达可抑制WT-LINC00667的荧光素酶活性(P<0.05);共转染si-LINC00667和anti-miR-154-5p可减弱转染si-LINC00667对细胞生物学行为的作用。结论 抑制LINC00667表达可通过促进miR-154-5p表达而减弱乳腺癌细胞增殖及克隆形成能力,并可诱导细胞凋亡。