LINC00707靶向miR-876-5p影响缺氧缺血脑损伤后海马神经元凋亡及氧化应激的机制

目的探讨LINC00707对缺氧缺血脑损伤后海马神经元凋亡及氧化应激的影响及其可能作用机制。方法采用谷氨酸与D-Hanks液处理大鼠海马神经元细胞HT-22建立缺氧缺血脑损伤模型,si-NC、si-LINC00707、miR-NC、miR-876-5p mimics、anti-miR-NC+si-LIN C00707、anti-miR-876-5p+si-LINC00707分别转染至HT-22细胞后进行缺氧缺血处理;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00707、miR-876-5p的表达量;利用试剂盒检测丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00707与miR-876-5p的靶向关系;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶(Cleaved-caspase)-3蛋白表达量。结果缺氧缺血脑损伤后HT-22细胞中LINC00707的表达量显著升高(P<0.05),miR-876-5p的表达量显著降低(P<0.05);缺氧缺血脑损伤后HT-22细胞中转染si-LINC00707或转染miR-876-5p mimics后,MDA的水平、细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD、CAT的活性显著升高(P<0.05);LINC00707可靶向调控miR-876-5p的表达;共转染anti-miR-876-5p+si-LINC00707可降低转染si-LINC00707对缺氧缺血脑损伤后HT-22细胞凋亡及氧化应激的作用。结论干扰LINC00707表达可通过靶向调控miR-876-5p表达而抑制缺氧缺血脑损伤后海马神经元凋亡及氧化应激。

LINC00707靶向miR-30c-5p对ox-LDL诱导的人血管平滑肌细胞增殖、迁移及炎症因子的影响

目的探讨LINC00707对氧化型低密度脂蛋白(oixidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人血管平滑肌细胞功能障碍的影响及其作用机制。方法采用ox-LDL诱导人血管平滑肌细胞HVSMCs建立动脉粥样硬化细胞模型,si-NC、si-LINC00707、miR-NC、miR-30c-5p mimic分别转染至HVSMCs后,加入100 mg·L-1 ox-LDL处理细胞,si-LINC00707和anti-miR-NC、si-LINC00707和miR-30c-5p Inhibitor分别共转染至HVSMCs后,加入100 mg·L-1 ox-LDL处理细胞;qRT-PCR法检测LINC00707、miR-30c-5p的表达量;CCK-8法、Transwell实验分别检测细胞增殖及迁移;ELISA法检测IL-6、TNF-α、IL-10的水平;双荧光素酶报告实验检测LINC00707与miR-30c-5p的靶向关系;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果ox-LDL诱导的HVSMCs中LINC00707的表达量升高(P<0.05),miR-30c-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-LINC00707或miR-30c-5p mimic后,细胞存活率、N-cadherin蛋白水平和IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),迁移细胞数减少(P<0.05),E-cadherin蛋白水平和IL-10的水平升高(P<0.05);LINC00707可靶向结合miR-30c-5p;共转染si-LINC00707和miR-30c-5p Inhibitor后,细胞存活率、N-cadherin蛋白水平和IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),迁移细胞数增多(P<0.05),E-cadherin蛋白水平和IL-10的水平降低(P<0.05)。结论下调LINC00707导致miR-30c-5p表达升高从而抑制ox-LDL诱导的HVSMCs增殖、迁移及炎症反应。

LINC00707靶向miR-374a-3p对LPS诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响

目的:研究长基因间非编码RNA 00707(LINC00707)靶向miR-374a-3p对脂多糖(LPS)诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响。方法:采用10μg/ml LPS处理肺上皮细胞BEAS-2B建立细胞损伤模型,并分为对照组(Con)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-LINC00707组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-374a-3p组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p组。RT-qPCR检测LINC00707和miR-374a-3p表达;ELISA试剂盒检测细胞培养液中IL-6和IL-1β水平;流式细胞仪检测BEAS-2B细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00707和miR-374a-3p的靶向关系。结果:与Con组比较,LPS组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量、LINC00707表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00707组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。miR-374a-3p是LINC00707的靶基因,LINC00707负调控miR-374a-3p表达。与LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组比较,LPS+si-LINC00707+antimiR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著升高(P<0.05)。结论:干扰LINC00707通过靶向上调miR-374a-3p抑制LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和炎症因子释放。

干扰LINC00707对食管癌细胞生物行为的影响

目的探讨干扰LINC00707对食管癌细胞生物行为的影响及分子机制。方法选取51例食管癌患者癌组织及癌旁正常组织,用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00707和miR-382-5p的表达水平;将食管癌细胞EC9706随机分为对照(con)组、si-LINC00707组、si-NC组、miR-382-5p组、miR-NC组、anti-miR-382-5p组、anti-miR-NC组、si-LINC00707+anti-miR-382-5p组;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移距离;Western印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测LINC00707和miR-382-5p的靶向关系。结果与癌旁正常组织相比,食管癌组织中LINC00707表达水平升高,miR-382-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);且LINC00707和miR-382-5p表达水平呈负相关(P<0.05)。干扰LINC00707或过表达miR-382-5p后,EC9706细胞活性降低,克隆形成数减少,细胞凋亡率升高,细胞迁移距离缩短,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-382-5p表达与过表达miR-382-5p对EC9706细胞的作用相反。且抑制miR-382-5p表达逆转了干扰LINC00707对EC9706细胞的作用。LINC00707靶向调控miR-382-5p。结论干扰LINC00707可能通过上调miR-382-5p抑制食管癌细胞的恶性生物学行为。

LINC00707通过靶向miR-206促进肾癌细胞增殖和转移

目的探讨长链非编码RNA LINC00707对肾癌细胞增殖和转移的影响及其相关机制。方法采用qRT-PCR检测肾癌组织和癌旁组织、肾癌细胞系和人正常肾细胞中LINC00707和microRNA-206(miR-206)的表达;分别采用生物信息学和双荧光素酶报告基因法预测和验证LINC00707与miR-206的靶向关系;利用LINC00707-siRNA和miR-206抑制剂构建LINC00707和miR-206低表达模型,采用CCK-8和Transwell实验检测肾癌细胞的增殖和转移。结果LINC00707在肾癌组织和细胞中表达上调;敲低LINC00707可抑制肾癌细胞的增殖和转移;LINC00707可与miR-206特异性结合;下调miR-206可部分逆转敲低LINC00707对肾癌细胞增殖和转移的抑制作用。结论LINC00707可通过靶向负调控miR-206促进肾癌细胞的增殖和转移,在肾癌的发生发展中起着重要作用。

LINC00707对脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症损伤的影响和机制

目的 研究LINC00707在脓毒症患者血清中的表达及其对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠心肌细胞炎症损伤的影响和机制。方法 实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)测定脓毒症患者血清中LINC00707表达情况。心肌细胞H9C2用10μg·mL^(-1)LPS复制脓毒症模型,转染si-NC、si-LINC00707、微小RNA(microRNA,miR)-NC、miR-338-3p mimic、si-LINC00707与anti-miR-NC、si-LINC00707与anti-miR-338-3p,并进行LPS损伤。采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度,流式细胞仪检测H9C2细胞的凋亡,Western Blot检测活化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved-caspase-3)蛋白的表达,双荧光素酶活性实验分析LINC00707对miR-338-3p的靶向调控。结果 脓毒症患者血清中和LPS诱导的H9C2细胞中,LINC00707表达水平(2.14±0.25或1.93±0.15)上调(P<0.05)。LPS诱导的H9C2细胞中TNF-α、IL-6浓度、cleaved-caspase-3蛋白表达水平和细胞凋亡率(24.13%±1.51%)升高(P<0.05)。而转染si-LINC00707或miR-338-3p mimc后,LPS诱导的H9C2细胞中TNF-α、IL-6浓度、cleaved-caspase-3蛋白表达水平和细胞凋亡率均降低(P<0.05)。LINC00707靶向miR-338-3p,且调控miR-338-3p的表达。Anti-miR-338-3p可以逆转si-LINC00707抑制LPS处理的H9C2细胞凋亡和炎症因子表达的效果。结论 LINC00707在脓毒症患者血清中高表达,敲减LINC00707可以抑制LPS处理的大鼠心肌细胞的凋亡和炎症因子表达。

长基因间非蛋白编码RNA 00707对骨关节炎软骨细胞损伤及炎症因子分泌的影响

背景:长基因间非蛋白编码RNA(long intergenic non-protein coding RNA,LINC RNA)00707和miR-423-5p均参与了骨关节炎的发生发展过程,Starbase预测LINC00707和miR-423-5p存在互补序列,但二者是否存在相互作用仍需要进一步研究。目的:考察LINC0070是否通过靶向miR-423-5p影响骨关节炎的软骨细胞损伤及炎症因子分泌。方法:将关节软骨细胞分8组培养:①空白对照组不进行任何处理;②IL-1β组用含10 ng/mL白细胞介素1β的培养基处理48 h;③IL-1β+si-NC组将si-NC转染至细胞中,然后用白细胞介素1β处理48 h;④IL-1β+si-LINC00707组将si-LINC00707染至细胞中,然后用白细胞介素1β处理48 h;⑤IL-1β+miR-NC组将miR-NC转染至细胞中,然后用白细胞介素1β处理48 h;⑥IL-1β+miR-423-5p组将miR-423-5p模拟物转染至细胞中,然后用白细胞介素1β处理48 h;⑦IL-1β+si-LINC00707+anti-miR-NC组将si-LINC00707与anti-miR-NC共转染至细胞中,然后用白细胞介素1β处理48 h;⑧IL-1β+si-LINC00707+anti-miR-423-5p组将si-LINC00707与anti-miR-423-5p共转染至细胞中,然后用白细胞介素1β处理48 h。干预结束后进行相关检测。结果与结论:①与空白对照组相比,IL-1β组软骨细胞中LINC00707基因表达量增加、miR-423-5p基因表达量减少,细胞凋亡率及裂解caspase3、裂解caspase9蛋白表达量增加,培养液内肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平升高,白细胞介素10水平降低(P均<0.05);与IL-1β组相比,IL-1β+si-LINC00707组软骨细胞中LINC00707基因表达量减少、miR-423-5p基因表达量增加,细胞凋亡率及裂解caspase3、裂解caspase9蛋白表达量减少,培养液内肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平降低,白细胞介素10水平升高(P均<0.05)。②与IL-1β+miR-NC组相比,IL-1β+miR-423-5p组软骨细胞中miR-423-5p基因表达量增加,细胞凋亡率及裂解caspase3、裂解caspase9蛋白表达量减少,培养液内肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平降低,白细胞介素10水平升高(P均<0.05)。③与IL-1β+si-LINC00707+anti-miR-NC组相比,IL-1β+si-LINC00707+anti-miR-423-5p组软骨细胞中miR-423-5p基因表达量减少,细胞凋亡率及裂解caspase3、裂解caspase9蛋白表达量增加,培养液内肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平升高,白细胞介素10水平降低(P均<0.05)。④结果表明,抑制LINC00707可靶向miR-423-5p减轻白细胞介素1β诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症反应。

冬凌草甲素通过LINC00707/miR-145-5p通路对MPP+诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用

目的探讨冬凌草甲素(oridonin)对MPP+诱导SK-N-SH细胞损伤的作用及机制。方法实验分为对照组、MPP+组、冬凌草甲素低、中、高浓度组、pcDNA组、pcDNA-LINC00707组、si-NC组、si-LINC00707组、MPP++si-NC组、MPP++si-LINC00707组、MPP++冬凌草甲素+pcDNA组、MPP++冬凌草甲素+pcDNA-LINC00707组。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞上清液中LDH释放量;丙二醛(MDA)试剂盒、谷胱甘肽(GSH)试剂盒分别检测细胞MDA、GSH含量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00707和miR-145-5p表达水平;双荧光素酶报告实验检测LINC00707和miR-145-5p的靶向关系。结果冬凌草甲素低、中、高浓度处理后,MPP+诱导的SK-N-SH细胞中细胞凋亡率显著降低,Bcl-2表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低,LDH水平升高,MDA含量显著降低,GSH含量显著升高,LINC00707表达水平显著降低,miR-145-5p表达水平显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。LINC00707靶向调控miR-145-5p,抑制LINC00707表达抑制MPP+诱导SK-N-SH细胞凋亡和氧化应激;过表达LINC00707逆转了冬凌草甲素对MPP+诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用。结论冬凌草甲素可抑制MPP+诱导SK-N-SH细胞凋亡和氧化应激,其机制可能与LINC00707和miR-145-5p有关。

LINC00707通过激活MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨LINC00707对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法构建慢病毒pGC-E1-GFP-LINC00707质粒转染HepG2细胞,观察LINC00707对HepG2细胞增殖、凋亡的影响。通过Western blot技术分析LINC00707促进HepG2细胞增殖、抑制HepG2细胞凋亡的分子机制。结果通过检测细胞增殖、凋亡和相关蛋白发现,与空白对照组比较,空载组HepG2细胞增殖率、凋亡率及MEK/ERK信号通路相关蛋白和基因表达均无显著改变(均P>0.05);与空载组比较,LINC00707组肝癌细胞HepG2在24h及48h后细胞增殖率显著下降、细胞凋亡率显著升高(P<0.05);检测细胞内MEK/ERK信号通路相关蛋白和基因表达发现,与空载组比较,LINC00707组p-MEK1/MEK2、p-ERK1/ERK2基因和蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LINC00707可促进HepG2细胞增殖,抑制HepG2细胞凋亡,这种作用可能与LINC00707激活MEK/ERK信号通路有关。

乳腺癌组织中长链非编码RNA-00707的表达及与分子病理分型的相关性

目的探讨长链非编码RNA-00707(long-chain non-coding RNA-00707,Linc00707)在乳腺癌组织中定性与定量表达,及其与乳腺癌分子病理分型的相关性。方法建立人源脂肪间充质干细胞与人乳腺癌MCF7细胞间接共培养体系,采用LncRNAs芯片技术获得Linc00707,应用RNAscope技术检测136例乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中Linc00707的表达;观察mRNA在癌细胞中的表达定位及按照mRNA表达量等级的判读结果,分析Linc00707表达与乳腺癌分子病理分型的相关性。结果136例乳腺癌组织中121例Linc00707阳性,呈细胞核及细胞质内点簇状棕色颗粒分布,乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中Linc00707的阳性率分别为89%(121/136)、3.8%(3/78),Linc00707阳性定量评分1分占9.1%(11/121),2分占30.6%(37/121),3分占40.4%(49/121),4分占19.8%(24/121)。Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型、基底样型乳腺癌中Linc00707的阳性率分别为52.6%(10/19)、98.1%(51/52)、94.9%(37/39)、88.5%(23/26)。Linc00707在乳腺癌组织中的阳性率高于癌旁正常乳腺组织,定量评分高评分(2、3、4分)组的阳性率高于低评分(1分)组,Luminal B型、HER-2过表达型、基底样型乳腺癌中的Linc00707阳性率高于Luminal A型乳腺癌。结论Linc00707可以促进乳腺癌的发生、发展,对乳腺癌的恶性程度评估有一定的临床意义及成为乳腺癌标志物具有潜在应用价值。