LINC00958通过上调VEGF-C表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为及小鼠模型的淋巴结转移

目的:探讨LINC00958/血管内皮生长因子C(VEGF-C)信号通路在宫颈癌的淋巴管生成和淋巴转移中的作用。方法:从2020年9月至2022年9月期间在河南省人民医院接受手术的患者中收集了42例宫颈癌组织标本,通过qPCR检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞(Hela、C33A、SiHa、Caski)中LINC00958的表达情况。将LINC00958过表达载体(LINC00958组)或对照载体(CMV组)转染Caski细胞,敲减LINC00958(shLINC00958组)、VEGF-C(shVEGF-C组)的shRNA序列或阴性对照shRNA(shNC组)转染SiHa细胞。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测过表达或敲减LINC00958对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。观察转染后细胞的培养上清液对人淋巴管内皮细胞(HLEC)淋巴管形成能力的影响。建立小鼠腘淋巴结转移模型,观察过表达LINC00958或同时敲减VEGF-C对宫颈癌淋巴结转移的影响。结果:LINC00958在宫颈癌组织中呈高表达(P<0.001),高水平的LINC00958与大肿瘤、晚期肿瘤分级、浸润深度和淋巴转移有关联(P<0.05或P<0.01)。与正常人宫颈上皮细胞ende1617相比,宫颈癌细胞中LINC00958水平均显著升高(P<0.01或P<0.001)。shLINC00958组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力均显著低于shNC组(P<0.05、P<0.01或P<0.001),LINC00958组Caski细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力显著高于CMV组(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。通过RNA下拉、RNA免疫沉淀实验发现宫颈癌细胞中LINC00958能够特异性结合VEGF-C。LINC00958+shVEGF-C组Caski细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促淋巴管形成能力显著低于LINC00958组(P<0.01或P<0.001);在小鼠腘淋巴结转移模型中,LINC00958+shVEGF-C组中小鼠腘窝淋巴结的体积和VEGF-C蛋白、N-cadherin蛋白以及LYVE-1的阳性细胞比例均显著低于LINC00958组(均P<0.001)。结论:LINC00958通过直接与VEGF-C蛋白相互作用增强宫颈癌细胞的增殖、侵袭、淋巴管生成能力,促进小鼠腘淋巴结转移模型的淋巴结转移。

lncRNA LINC00958靶向调控miR-597-5p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00958影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用与机制。方法定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00958和miR-597-5p在乳腺癌组织中的表达。MDA-MB-231细胞转染si-LINC00958或miR-597-5p或共转染si-LINC00958和anti-miR-597-5p。qRT-PCR检测LINC00958和miR-597-5p表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测MDA-MB-231细胞增殖,Transwell检测细胞迁移、侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告实验分析LINC00958与miR-597-5p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,41例乳腺癌组织中LINC00958表达显著上调,miR-597-5p表达显著下调(P<0.05)。抑制LINC00958表达显著降低MDA-MB-231细胞增殖、Ki-67表达水平、迁移、侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2表达水平,显著提高细胞凋亡率、Bax表达水平(P<0.05),与miR-597-5p过表达的结果相同。LINC00958靶向调控miR-597-5p的表达。干扰miR-597-5p表达后,抑制LINC00958表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用被显著逆转(P<0.05)。结论LINC00958通过靶向下调miR-597-5p,增强乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭,并减轻细胞凋亡。

Linc00052基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织及其细胞系内基因长链非编码RNA00052(long intergenic non-coding RNA 00052,Linc00052)的表达水平,以及Linc00052在肺癌中的临床意义、作用机制及与患者预后的相关性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肺细胞系与肺癌细胞系之间Linc00052表达水平的差异,肺癌组织与癌旁组织之间Linc00052表达水平的差异,并分析Linc00052与肺癌临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析Linc00052与肺癌预后之间的相关性。在A549细胞系中过表达Linc00052,采用MTT实验检测过表达Linc00052前后细胞增殖变化,并采用qRT-PCR检测miR-330-3p表达变化。结果:肺癌细胞系较正常肺细胞系中Linc00052明显低表达,同时肺癌组织比癌旁组织中Linc00052明显低表达(P<0.01);Linc00052的表达与肿瘤的分化程度(P=0.02)、淋巴结转移(P=0.002)、远处转移(P=0.005)和临床分期(P=0.001)有关。肺癌的Linc00052表达水平减低与肺癌患者的预后不良有关(P<0.05)。过表达Linc00052后可显著抑制细胞增殖(P<0.05),qRT-PCR结果证实,过表达Linc00052可显著下调miR-330-3p mRNA的表达水平(P<0.05)。结论:Linc00052在肺癌组织中表达下调,并与肺癌的发生发展及预后密切相关,Linc00052有可能通过负调控miR-330-3p在肺癌中发挥抑癌作用。

鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261的表达及其临床意义

目的:探讨鼻咽癌中小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)和LINC00261的表达水平及其临床意义。方法:收集2018年1月至2020年2月本院93例行鼻咽癌根治性切除术患者的鼻咽癌组织和癌旁组织样本以及临床资料;培养鼻咽癌CNE-1细胞和正常鼻咽部上皮NP69细胞,分为空白对照组、shRNA-NC组(转染SNHG15对照)、SNHG15-shRNA组(转染SNHG15)、pcDNA-NC组(转染LINC00261对照)、LINC00261-pcDNA组(转染LINC00261);采用RT-qPCR检测SNHG15和LINC00261表达水平;采用CCK-8和克隆形成实验检测各组细胞的增殖情况;采用Pearson法分析组织中SNHG15和LINC00261表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261表达水平与患者预后的关系;采用多因素Cox回归分析影响鼻咽癌患者预后的相关因素。结果:鼻咽癌组织中SNHG15表达水平高于癌旁组织,LINC00261表达水平则低于癌旁组织;鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达水平呈负相关。CNE-1细胞中SNHG15表达水平高于NP69细胞,LINC00261表达水平则低于NP69细胞;SNHG15-shRNA组和LINC00261-pcDNA组CNE-1细胞克隆形成数量均低于空白对照组、shRNA-NC组及pcDNA-NC组,细胞增殖能力降低。不同SNHG15和LINC00261表达水平的鼻咽癌患者年龄、肿瘤直径及组织学类型差异无统计学意义,而SNHG15高表达组及LINC00261低表达组发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的患者所占比例显著高于SNHG15低表达组及LINC00261高表达组;SNHG15低表达患者3年生存率(84.78%)显著高于SNHG15高表达患者(65.95%),LINC00261低表达患者3年生存率(63.04%)显著低于LINC00261高表达患者(87.23%)。结论:鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达与患者临床病理特征及预后密切相关,淋巴结转移、TNM分期及SNHG15是鼻咽癌患者死亡的危险因素,而LINC00261是鼻咽癌患者死亡的保护因素。

长链非编码RNA LINC00958在头颈部鳞状细胞癌的表达和初步研究

目的探讨LINC00958在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达和作用。方法利用TCGA数据库分析LINC00958在HNSCC中的表达和对生存预后的影响;体外培养HNSCC细胞系CAL27和HN6,对其转染对照组和敲低组(si-LINC00958)质粒,采用实时荧光定量PCR实验检测LINC00958表达;CCK-8实验检测细胞增殖能力变化;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化;WB实验检测转移相关蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测LINC00958和miR-877-3p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证;分析miR-877-3p对HNSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果LINC00958在HNSCC中高表达,并影响患者总体生存率(P<0.05)。和对照组(si-NC)相比,si-LINC00958组细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin表达降低,N-cadherin和Vimentin表达升高(P<0.05);TargetScan数据库显示miR-877-3p是LINC00958的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证两者存在靶向关系。和对照组(NC)相比,miR-877-3p mimics组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。结论LINC00958通过靶向调控miR-877-3p促进HNSCC的增殖、迁移和侵袭。

LINC00958与肿瘤预后的Meta分析及生物信息学分析

目的:验证长链非编码RNA(lncRNA)LINC00958在不同类型肿瘤中的表达以及预后价值。方法:在PubMed、Web of Science、Elsevier、Springer、知网的数据库中进行相关文献检索,检索时间从建库至2020年4月3日。运用Stata 12.0 MP软件,在肿瘤患者的总体生存期(OS)上计算风险比(HR)和相应的95%置信区间(CI)来评估肿瘤患者的预后,分析优势比(OR)和相应的95%CI来评估癌症患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肿瘤转移的促进或抑制效应。利用GEPIA在线分析数据库分析LINC00958在各类肿瘤组织中的表达情况以及进行生存分析。结果:总计有8项研究,包括1060例癌症患者纳入本次Meta分析。与LINC00958低表达组相比,LINC00958高表达组患者的OS较短(HR为1.533,95%CI为1.212~1.940,P<0.001)。LINC00958的高表达与肿瘤发生转移有关(OR为2.859,95%CI为1.966~4.156,P<0.001)。结论:LINC00958的高表达与多种肿瘤的不良预后相关,但需要更多的研究做进一步的分析。

长链非编码RNA LINC00958在恶性肿瘤发生发展中的作用及作用机制研究进展

长链非编码RNA(lncRNAs)LINC00958,又称膀胱癌相关转录本2(BLACAT2),位于人类染色体13p15.2上,在膀胱癌、甲状腺乳头状癌、食管鳞癌、乳腺癌及子宫内膜癌等多种恶性肿瘤细胞中高表达,被鉴定为致癌性lncRNA。在恶性肿瘤细胞中,LINC00958的高表达提示恶性肿瘤的临床病理分期较高,存在远处转移,促进恶性肿瘤细胞的增殖、迁移、抑制其凋亡,调节其代谢,促进了恶性肿瘤的发生发展。在机制上,LINC00958不仅可作为内源性竞争性RNA(ceRNA)通过miRNA-mRNA轴调控肿瘤细胞的恶性行为,还可通过多种关键信号通路,如c-Myc、SIRT1/p53、Wnt/β-catenin等信号通路,调控恶性肿瘤的发生发展。

LncRNA LINC00958通过靶向miR-490-3p促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究LncRNA LINC00958对甲状腺乳头状癌细胞的影响及其作用机制。方法:TPC-1和K-1细胞分别分成Control、shRNA-NC、shRNA-LINC00958-1、shRNA-NC+inhibitor-NC、shRNA-LINC00958-1+inhibitor-NC和shRNA-LINC00958-1+miR-490-3p inhibitor组。TPC-1和K-1细胞移植的荷瘤鼠分别分为shRNA-NC、shRNA-LINC00958-1、shRNA-NC+inhibitor-NC、shRNA-LINC00958-1+inhibitor-NC和shRNA-LINC00958-1+miR-490-3p inhibitor组。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00958和miR-490-3p的表达水平;CCK-8检测细胞活力;Western blot检测蛋白表达水平;细胞划痕实验检测细胞迁移水平,Transwell小室检测细胞侵袭水平,克隆形成实验检测细胞增殖水平;双荧光素酶报告实验检测LINC00958和miR-490-3p的靶向关系。测定肿瘤质量及体积。结果:相比于正常组织,LINC00958在甲状腺癌组织中高表达;相比于Nthy-ori 3-1细胞,LINC00958在TPC-1和K-1细胞中高表达,miR-490-3p低表达。LINC00958沉默后,甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低。干扰miR-490-3p表达逆转LINC00958沉默对甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移和侵袭效果,破坏LINC00958沉默对肿瘤生长的抑制效果。结论:抑制LINC00958表达可抑制TPC-1和K-1细胞增殖、迁移和侵袭能力,其机制与靶向miR-490-3p表达有关。

急性髓系白血病患者外周血白细胞长链基因间非编码RNA324(LINC00324)与免疫表型的相关性分析

目的分析急性髓系白血病(AML)患者外周血白细胞长链基因间非编码RNA324(LINC00324)与免疫表型的关系。方法用实时荧光定量PCR和生物信息学数据库分析AML患者外周血白细胞及KG-1、THP-1、U937细胞株中UNC00324的表达水平,并采用Peraon相关分析40例AML患者LINC00324的表达水平与红细胞及血小板计数及LINC00324与免疫表型CD14、CD68、CD64、CDllb、CD4、CD45、CD33、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、CD163、CD2、CD58、CD117、CD43、CD34、CD99、CD8、CD38、CD10、CD13、CD56、CD7、TdT、CD235a、CD138、CD61、髓过氧化物酶(MPO)、CD19的关系。同时选取cBioPortal数据库的数据集(TCGA,NEJM 2013)分析173名AML患者的临床病例数据,分析患者肿瘤样本中LINC00324的表达水平与外周血幼稚细胞百分比及白细胞计数的相关性。结果AML患者外周血白细胞LINC00324表达下调,其表达水平与免疫表型CD33、红细胞及血小板数显著正相关。生物信息学数据库分析显示LINC00324在髓系白血病细胞株中低表达,AML患者中LINC00324表达与CD33、CD117、CDllb、CD14、CD64等多种免疫表型相关,与外周血幼稚细胞百分比及白细胞计数呈负相关。结论UNC00324可能参与调控免疫细胞的分化发育及功能,为AML靶向药物开发或治疗提供新策略。

基于TCGA数据集分析LINC00900在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的研究甲状腺乳头状癌(PTC)中长链非编码RNA00900(LINC00900)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法利用美国癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集PTC数据资料,下载基因表达谱资料和PTC临床病例信息资料。比较PTC癌组织和癌旁甲状腺组织中LINC00900的表达。分析LINC00900表达与患者临床病理特征的关系。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析LINC00900表达与PTC患者生存时间的关系。通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)预测与LINC00900相关的蛋白编码基因(PCGs),利用注释、可视化和集成发现数据库(DAVID)在线注释工具对筛选出的PCGs进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果LINC00900在PTC癌组织的表达水平显著高于癌旁正常甲状腺组织(P<0.001)。不同年龄、病理T分期、组织学类型PTC患者的LINC00900表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);≥55岁PTC患者LINC00900表达水平明显低于<55岁组(P<0.01);T3~T4期PTC患者的LINC00900表达水平明显低于T1~T2期(P<0.01);高细胞亚型PTC患者LINC00900表达水平低于经典型、滤泡型和其他型(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,LINC00900高表达组PTC患者的生存率明显高于低表达组(Log-rankχ^(2)=6.691,P<0.05)。功能富集分析结果显示,LINC00900可能通过核小体装配、mRNA的剪接、组蛋白H3甲基化的修饰、染色体绑定、组蛋白乙酰转移酶调节因子活性调节、鞘氨醇-1-磷酸磷酸酶活性调节、黏蛋白型O-聚糖生物合成等通路影响PTC的进展及预后。结论在PTC中,LINC00900高表达是一种预后保护因素,可作为辅助判断PTC预后的有效生物标志物之一。

LINC00958调控子宫内膜癌细胞增殖的作用机制研究

目的:探讨LINC00958在子宫内膜癌中的表达及调控细胞增殖的作用及机制。方法:采用生物信息学分析GEPIA数据库、Kaplan-Meier plotter数据库中LINC00958在子宫内膜癌组织中的表达及与预后的相关性;采用ENCORI预测能与LINC00958结合的miRNA并采用荧光素酶报告分析进行验证;RT-qPCR检测LINC00958和miR-129-2-3p的表达,CCK8检测细胞增殖。结果:LINC00958在子宫内膜癌组织中的表达高于正常子宫内膜组织,与临床分期无关,但其高表达患者总生存率和无病生存率高于低表达患者;抑制LINC00958的表达可抑制子宫内膜癌细胞增殖;ENCORI预测到miR-129-2-3p可与LINC0958结合,但两者在子宫内膜癌组织中的表达不相关,双荧光素酶报告分析证实两者可直接结合;miR-129-2-3p在子宫内膜癌组织中的表达下降,增加其表达可抑制MEG3和HEC-1B细胞增殖,而同时抑制LINC00958的表达可进一步抑制子宫内膜癌细胞的增殖。结论:LINC00958在子宫内膜癌中高表达,在miR-129-2-3p过表达的子宫内膜癌细胞中抑制LINC00958的表达可抑制细胞增殖。

LINC00665通过靶向miR-708-5p/DKK3抑制食管癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨LINC00665在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中的表达,并探讨其异常表达对ESCC细胞增殖、侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法采用qRT-PCR法检测LINC00665及miR-708-5p的表达情况;采用MTS、Transwell侵袭实验检测LINC00665异常表达对ESCC细胞增殖及侵袭能力的影响。采用双荧光素酶报告基因检测LINC00665与miR-708-5p的相互作用及miR-708-5p对靶基因的调控作用。结果ESCC组织中LINC00665表达量(3.834±2.016)明显低于癌旁正常组织(7.973±2.752)(P<0.01)。LINC00665表达与ESCC淋巴结转移、浸润深度及TNM分期密切相关(P均<0.05)。LINC00665过表达明显抑制TE13细胞的增殖及侵袭能力(P均<0.05)。LINC00665过表达降低TE13细胞中miR-708-5p的表达及报告基因的荧光素酶活性(P均<0.05);miR-708-5p mimics可降低DKK3基因表达及含DKK33’UTR区结合位点片段的报告基因质粒的荧光素酶活性(P均<0.05);同时,miR-708-5p过表达可抵消TE13细胞中由LINC00665过表达诱导的DKK3基因表达上调和荧光素酶活性的上调(P均<0.05)。结论LINC00665可通过竞争结合miR-708-5p靶向调控DKK3基因表达,进而抑制ESCC细胞的增殖及侵袭能力。LINC00665有望成为ESCC患者分子靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。

沉默lncRNA LINC00472对脂多糖诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制

目的探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472对脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2(以下称HK-2细胞),随机分为对照组、LPS组、LPS+si-LINC00472组、LPS+si-NC组、LPS+miR-136-3p组、LPS+miR-NC组、LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组和LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组。LPS+si-LINC00472组转染si-LINC00472,LPS+si-NC组转染si-NC,LPS+miR-136-3p组转染miR-136-3p,LPS+miR-NC组转染miR-NC,LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组转染si-LINC00472、anti-miR-136-3p,LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组转染si-LINC00472、anti-miR-NC,转染6 h后给予1μg/mL LPS刺激24 h。LPS组不予转染,仅给予1μg/mL LPS刺激24 h。对照组常规培养,不予转染和LPS刺激。收集各组干预后细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00472、miR-136-3p表达,采用MTT法检测再培养48 h细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测培养上清液IL-6、IL-8,采用Western blotting法检测程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达。通过LncBase Predicted v.2在线预测网站、starBase数据库预测lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的靶向调控关系。结果LPS组lncRNA LINC00472相对表达量明显高于对照组,miR-136-3p相对表达量明显低于对照组,细胞增殖活性亦明显低于对照组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显高于对照组(P均<0.05)。LPS+si-LINC00472组lncRNA LINC00472相对表达量明显低于LPS+si-NC组,miR-136-3p相对表达量明显高于LPS+si-NC组,细胞增殖活性亦明显高于LPS+si-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显低于对照组(P均<0.05)。LPS+miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显高于LPS+miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显低于LPS+miR-NC组(P均<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(P均<0.05)。经LncBase Predicted v.2在线预测网站和starBase数据库预测并经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA LINC00472与miR-136-3p存在靶向结合位点,miR-136-3p与PDCD4存在靶向结合位点。结论沉默lncRNA LINC00472可通过促进miR-136-3p表达、抑制PDCD4表达,减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。

利用TCGA数据集分析LncRNA LINC00319在肺腺癌中的表达及临床意义

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00319在肺腺癌及其癌旁组织中的表达及临床意义。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载516例肺腺癌组织(肿瘤组)与59例癌旁组织(癌旁对照组)RNAseq数据及对应的肺腺癌患者临床数据,对数据中LINC00319基因表达进行分析处理。分析比较其表达与肺腺癌临床病理特征的相关性及对预后的影响。通过COX风险比例模型评估肺腺癌患者预后的独立危险因素。采用基因集富集分析(GSEA)方法预测LINC00319功能富集的分子通路。结果LINC00319在肿瘤组中的表达水平显著高于癌旁对照组(P<0.05),其表达水平与性别、年龄、N分期无关(P>0.05),与吸烟、T分期、M分期以及Stage分期显著相关(P<0.05),生存分析显示肺腺癌患者中高LINC00319表达水平预示预后差(P<0.05)。多因素COX风险比例模型结果显示,高表达水平、Ⅲ+Ⅳ及T3+T4是肺腺癌患者预后差的独立危险因素(P<0.05)。在GSEA分析中,发现LINC00319功能主要富集在细胞黏附、细胞因子相互作用、血管内皮生长因子信号通路、细胞凋亡等通路中。结论LINC00319可能通过多种途径促进肺腺癌的发生、发展,进而影响肺腺癌患者的预后生存,因此,LINC00319可作为肺腺癌患者的预后标志物或潜在治疗靶点。

基因捕获技术在肝癌侵袭和迁移相关基因筛选中的应用

目的:用基因捕获技术在肝癌细胞SMMC7721细胞中寻找与肝癌侵袭和迁移相关的基因。方法:首先,将p U21质粒转染到肝癌细胞SMMC7721细胞,用G418筛选出单克隆稳定细胞系;其次,采用Transwell小室实验和划痕实验,检测这些单克隆细胞侵袭和迁移能力的变化;最后,用5’-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测这些细胞系中被p U21质粒捕获的基因。结果:成功获得了约300株稳定转染p U21质粒的单克隆细胞系,得到了约30株侵袭和迁移能力增强的细胞株和约40株侵袭和迁移能力减弱的细胞株。通过5’-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测,证明了在A554细胞系中,被p U21质粒捕获的基因是long inter-genic non-protein coding RNA 52(LINC00052)。结论:应用基因捕获技术筛选肝癌侵袭和迁移相关基因是可行的。

LINC02163靶向miR-582-3p对膀胱癌进展的影响

目的探讨长基因间非编码RNA(LINC)02163靶向微小RNA(miR)-582-3p对膀胱癌进展的影响。方法实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析23例膀胱癌组织和对应癌旁组织中LINC02163和miR-582-3p的表达水平。将LINC0216小干扰RNA(si-LINC02163)、miR-582-3p模拟物、si-LINC02163+miR-582-3p抑制物(anti-miR-582-3p)分别转染膀胱癌T24细胞,通过噻唑蓝(MTT)、克隆形成、伤口愈合和Transwell实验检测LINC02163和miR-582-3p表达对T24生物学行为的影响。Western印迹测定上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达量。RT-qPCR和双荧光素酶报告实验用于确定LINC02163和miR-582-3p靶向关系。结果与癌旁组织比较,膀胱癌组织中LINC02163表达量显著升高miR-582-3p表达量显著降低(P<0.05)。沉默LINC02163显著降低T24细胞活力、划痕愈合率和N-cadherin表达量显著减少集落形成数和侵袭数,显著增加凋亡率和E-cadherin表达量(P<0.05)。过表达miR-582-3p显著降低T24细胞活力、划痕愈合率和N-cadherin表达量,显著减少集落形成数和侵袭数,显著增加凋亡率和E-cadherin表达量(P<0.05)。LINC02163与miR-582-3p直接结合,沉默LINC02163显著增加miR-582-3p表达量(P<0.05)。抑制miR-582-3p表达显著削弱沉默LINC02163对T24细胞生物学行为和E-cadherin、N-cadherin表达的影响。结论膀胱癌中LINC02163表达上调,沉默LINC02163通过靶向抑制miR-582-3p表达可抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,抑制膀胱癌进展。

长链非编码RNA linc00460在胃癌中的表达及对预后的影响

目的:探讨长链非编码RNA linc00460在胃癌中的表达及其与胃癌患者临床病理特征和预后的关系。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)胃癌数据集系统评估linc00460的差异表达,并采用实时定量PCR(qRT-PCR)在88例接受胃癌手术的患者中验证TCGA结果。采用q RT-PCR检测胃癌细胞株和正常人胃上皮细胞中linc00460的表达情况。采用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)法预测linc00460的调控基因。将AGS细胞分别转染linc00460过表达质粒(pcDNAlinc00460)和阴性对照序列(pcDNA3.1),分别采用Western blot检测相关蛋白表达和CCK-8法检测两组细胞的增殖情况。结果:我们发现并证实linc00460在胃癌组织和细胞中显著高表达(P <0.05);高linc00460表达与患者M分期相关;linc00460表达与胃癌患者总生存期之间存在显著负相关(P <0.05);且Cox比例风险模型的单变量和多变量分析证实其为胃癌相关独立生存预测因子(P <0.05)。linc00460相对高表达样本富集到P53类介质对DNA损伤反应信号转导的调控(P=0.002)、P53类介质对信号转导的正向调节作用(P <0.001)、细胞分裂的正向调节(P <0.001)、核分裂的正向调节(P=0.002)等基因集。AGS细胞过表达质粒pcDNA-linc00460转染组中linc00460表达水平显著高于pcDNA3.1组,差异有统计学意义(P <0.05)。Western blot检测结果表明linc00460可下调P53蛋白表达,上调Bcl-2和Cyclin B1表达。CCK-8结果表明pcDNA-linc00460组AGS细胞增殖指数均高于pcDNA3.1组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:linc00460在胃癌组织中高表达,且其高表达的患者预后较差,linc00460可能通过上调P53信号通路促进胃癌细胞生长,linc00460可能参与了胃癌的恶性进展。

Linc00891通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p在骨肉瘤中发挥抑癌作用

目的探讨Linc00891在骨肉瘤(OS)中发挥的作用并初步分析其机制。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)检测Linc00891在不同OS细胞系U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353及人成骨细胞系hFOB 1.19中的表达,选择Saos-2和MG-63 OS细胞系转染过表达Linc00891载体。CCK-8法、平板克隆法和Transwell小室检测过表达Linc00891对人OS细胞系Saos-2和MG-63增殖、克隆形成能力和迁移能力的影响。Western blot法检测上皮间质转化相关蛋白钙黏着蛋白E(E-cad)、钙黏着蛋白N(N-cad)的表达。RNA pulldown实验检测Linc00891和miR-27a-3p在OS细胞中的结合关系。TCF/LEF报告试剂盒检测过表达Linc00891和上调miR-27a-3p对不同OS细胞系中Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果不同OS细胞系U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353中Linc00891的表达水平显著低于正常成骨细胞系hFOB 1.19(P<0.05)。过表达Linc00891可抑制人OS细胞系Saos-2和MG-63的增殖、克隆形成能力、迁移能力及上皮间质转化(P<0.05)。Linc00891和miR-27a-3p在OS细胞中存在结合关系。过表达Linc00891能够逆转miR-27a-3p对Wnt/β-catenin信号通路的激活(P<0.05)。结论Linc00891通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p,在OS中发挥抑癌作用。

抑制LINC00958表达调控miR-422a促进结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的机制

目的探讨lncRNA LINC00958对结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的影响以及其作用机制。方法将pcDNA、pcDNA-LINC00958、si-NC、si-LINC00958、miR-NC和miR-422a质粒分别转染到SW480细胞中,并分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00958组、si-NC组、si-LINC00958组、miR-NC组和miR-422a组;将anti-miR-NC和anti-miR-422a质粒分别与si-LINC00958共转染到SW480细胞中,并分别记为si-LINC00958+anti-miR-NC组和si-LINC00958+anti-miR-422a组;分别将miR-NC和miR-422a分别转染到WT-LINC00958和MUT-LINC00958组细胞中,检测荧光活性;转染均用脂质体法。采用qRT-PCR检测miR-422a和LINC00958的表达;Western blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆形成实验检测对结直肠癌细胞放射敏感性的影响;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结直肠癌细胞中LINC00958高表达,miR-422a低表达;抑制LINC00958表达和过表达miR-422a,可促进结直肠癌细胞凋亡,并增加细胞放射敏感性。LINC00958可靶向调节miR-422a表达;抑制miR-422a,逆转了抑制LINC00958表达对结直肠癌细胞的放射增敏和细胞凋亡促进的作用。结论抑制LINC00958表达,增加结直肠癌细胞的放射敏感性,并促细胞凋亡,其机制可能与调控miR-422a有关,将为结直肠癌治疗提供新靶点和新思路。

LNC RNALinc00152对宫颈癌细胞生物学行为及Fra-1/p53基因的影响

目的探究LNCRNALinc00152对宫颈癌细胞生物学行为及Fra-1/p53基因的影响。方法RT-PCR方法检测人宫颈癌Hela细胞和人正常宫颈上皮End1/E6E7细胞中Linc00152表达;将Hela细胞分为正常组(control组)、转染组(si-00152)和转染对照组(si-NC),RT-PCR方法检测Linc00152的表达;MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Westernblot检测细胞中Fra-1和p53蛋白表达。结果Hela细胞中Linc00152的表达水平明显高于End1/E6E7细胞(P<0.05)。转染si-Linc00152后,Hela细胞Linc00152表达明显降低,增殖、迁移与侵袭能力明显降低(P<0.05),p53表达明显升高,Fra-1表达明显降低(P<0.05)。结论沉默LncRNALinc00152表达能抑制Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。