LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号通路调控食管鳞状细胞癌转移的机制

目的探究基因间长链非编码RNA626(LINC00626)通过Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)/KH型剪切蛋白(KHSRP)信号通路对食管鳞状细胞癌(ESCC)转移的恶性进程的影响及潜在的分子机制。方法选取河南大学淮河医院2020-01-01-2022-12-31微创腔镜手术切除的144例ESCC患者中ESCC组织及癌旁正常组织(距离肿瘤>5 cm)标本作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测ESCC组织、癌旁正常组织、人食管黏膜上皮细胞Het-1A和4株食管癌细胞(EC-9706、OE-33、KYSE-450和SK-GT-4)中LINC00626和KHSRP的表达。慢病毒转染分为LINC00626敲低慢病毒(sh-LINC00626)组及其空转病毒(sh-NC)组、sh-LINC00626+KHSRP组、LINC00626过表达慢病毒(LINC00626)组及其空转病毒(vector)组,qRT-PCR法检测其转染效率。采用细胞计数盒8(CCK8)增殖实验、Transwell小室实验检测LINC00626对ESCC细胞生长的影响,qRT-PCR法检测LINC00626对JAK/STAT家族mRNA水平表达的影响,蛋白质印迹法检测KHSRP对JAK/STAT家族蛋白表达的影响。LINC00626、KHSRP在ESCC组织和癌旁正常组织中的表达差异,LINC00626对细胞迁移能力影响的Transwell实验、分子机制实验中的qRT-PCR实验和蛋白质印迹法结果分析采用两独立样本t检验;LINC00626、KHSRP在人食管黏膜上皮细胞和食管癌细胞系中的表达差异,转染sh-NC、sh-LINC00626+vector、sh-LINC00626+KHSRP后LINC00626表达量的差异,回复实验中的Transwell实验结果分析采用单因素方差分析;CCK8实验结果分析采用双因素方差分析。结果qRT-PCR结果显示:ESCC组织中LINC00626表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义,t=12.68,P<0.001;4株食管癌细胞中LINC00626的表达量高于人食管黏膜上皮细胞Het-1A,F=38.19,P=0.017;ESCC组织中KHSRP表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义,t=19.23,P<0.001;4株食管癌细胞中KHSRP的表达量高于人食管黏膜上皮细胞Het-1A,差异有统计学意义,t=103.20,P<0.001。CCK8增殖实验结果显示:LINC00626组细胞生长率高于vector组,且24、48、72 h差异有统计学意义,F_(不同组别×时间)=1909.00,P<0.05;sh-LINC00626组细胞生长率低于sh-NC组,且24、48、72 h差异均有统计学意义,F_(不同组别×时间)=94.50,P<0.001;回复实验中,sh-LINC00626+KHSRP组细胞生长率高于sh-LINC00626+vector组,且24、48、72 h细胞生长率差异有统计学意义,EC-9706细胞中F_(不同组别×时间)=2653.00,SK-GT-4细胞中F_(不同组别×时间)=543.60,均P<0.05。Transwell小室实验显示:LINC00626组穿过小室的细胞数量高于vector组,差异有统计学意义,t=460.30,P<0.001;sh-LINC00626组穿过小室的细胞数量少于sh-NC组,差异有统计学意义,t=44.00,P<0.001;回复实验中,sh-LINC00626+KHSRP组穿过小室的细胞数量高于sh-LINC00626+vector组,差异有统计学意义,EC-9706细胞中F=252.80,SK-GT-4细胞中F=690.00,均P<0.001。分子机制相关实验结果显示,LINC00626、KHSRP过表达和敲降均可影响JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3的表达,差异有统计学意义,均P<0.05。结论LINC00626、KHSRP在ESCC组织和细胞中均表达上调,且LINC00626可以通过JAK1/STAT3调控KHSRP影响ESCC转移的恶性进程。