circIRAK3靶向miR-942-5p/LITAF轴调控滋养层细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT

目的探讨环状RNA circIRAK3对滋养层细胞生物学行为的影响及其潜在分子调控机制。方法采集19例正常足月妊娠孕妇和25例早发型子痫前期(PE)孕妇的血液和胎盘组织样本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析circIRAK3的表达量,受试者工作特征曲线(ROC)分析其对PE的诊断价值。体外培养人滋养层细胞HTR-8/SVneo,通过CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验评估细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot实验检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达。采用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验分析并验证circIRAK3的调控机制。结果circIRAK3在PE患者血液和胎盘组织样本中高表达,且血液中circIRAK3的表达对PE具有一定诊断价值(AUC=0.882)。细胞功能研究显示,过表达circIRAK3能够抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭。调控机制分析显示,miR-942-5p是circIRAK3的靶miRNA,而脂多糖诱导肿瘤坏死因子α(LITAF)是miR-942-5p的靶基因,circIRAK3可作为miR-942-5p的分子海绵上调LITAF的表达;过表达miR-942-5p或抑制LITAF表达均能减弱circIRAK3对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论circIRAK3通过靶向miR-942-5p上调LITAF的表达,从而抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭,提示circIRAK3可能参与PE的发病。

LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症患者的突变分析

为了分析LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)的突变特点,文章分别应用PCR结合DNA序列分析方法和PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合DNA序列分析方法对6个常染色体显性遗传家系先证者和27个散发病例进行LITAF和RAB7基因突变分析;应用PCR-SSCP结合DNA序列分析方法对14个常染色体遗传的CMT家系先证者和27个散发患者进行LMNA和MTMR2基因突变分析。结果发现:LITAF基因c.269G→A、c.274A→G序列变异和LMNA基因c.1243G→A、c.1910C→T序列变异,未发现RAB7和MTMR2基因的序列变异。其中LITAF基因c.269G→A、LMNA基因c.1243G→A和c.1910C→T为新发现的单核苷酸多态;LITAF基因c.274A→G为已知多态。说明LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因突变在中国人CMT患者中罕见。

高通量测序法检测胃癌患者融合基因LRP5-LITAF

目的了解胃癌发病过程中融合基因表达水平的变化,探讨其在胃癌的发病机制中的作用。方法用Illumina高通量测序仪对早期胃癌患者组织及匹配的癌旁组织进行RNA测序,以检测差异基因表达水平及结构变化。结果在胃癌组织中发现1 590个基因上调和709个基因下调;功能富集分析表明,这些差异表达基因富集于细胞周期、肿瘤侵入与扩散有关的基因实体(gene ontology,GO)注释中;且在约40%(2/5)的胃癌患者的癌组织中发现融合基因LRP5-LITAF。结论发现了胃癌发病过程中的大量差异表达基因及融合基因LRP5-LITAF,为胃癌的辅助诊断及靶向治疗提供了初步实验依据。

虾夷扇贝脂多糖诱导的肿瘤坏死因子LITAF基因的克隆及表达分析

脂多糖诱导的肿瘤坏死因子(Lipopolysaccharide-induced TNF-alpha factor,LITAF)是一类重要的炎症细胞因子,在先天性免疫系统中发挥重要的介质作用。文章根据虾夷扇贝LITAF基因EST序列,应用RACE技术克隆了虾夷扇贝LITAF全长cDNA,对序列及编码的氨基酸进行生物信息学分析。结果显示,该基因cDNA全长1 551 bp,其5′非编码区包含76 bp,3′非编码区包含1 001 bp;开放阅读框(ORF)为474 bp,编码157个氨基酸,氨基酸序列中存在一个保守的LITAF结构域;理论分子量16.99 kDa,等电点为6.24。LITAF基因序列为3 698 bp,由3个外显子和两个内含子组成。利用实时荧光定量PCR技术分析LITAF在虾夷扇贝不同组织、不同胚胎发育阶段以及鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激后各时间段的表达情况。结果表明:LITAF基因在所检测的6个成体组织中均有表达,其中肾脏的表达量最高;胚胎发育的7个时期中,担轮幼体时期表达量最高;菌刺激36 h实验组与对照组的表达量差异大。LITAF基因是LITAF家族的一员,推测LITAF基因参与虾夷扇贝的先天性免疫反应。

抑制LITAF基因对人脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖、凋亡和放疗敏感度的影响

目的分析人脑胶质母细胞瘤组织中LITAF基因mRNA表达情况,并通过抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞中LITAF基因表达,观察其对U251细胞增殖、凋亡和放疗敏感度的影响。方法分析TCGA数据库中人脑胶质母细胞瘤组织中LITAF基因mRNA表达;通过RNAi抑制U251细胞中LITAF基因表达,采用胸腺嘧啶核苷类似物(EDU)检测U251细胞增殖变化,流式细胞仪分析U251细胞凋亡的变化,克隆形成实验和流式细胞分析U251细胞放疗敏感度的变化。结果 TCGA数据库分析结果显示人脑胶质母细胞瘤组织LITAF表达显著高于正常脑组织;抑制LITAF表达后,U251细胞的增殖和凋亡未见明显变化,但在电离辐射后,LITAF抑制组U251细胞凋亡显著低于对照组,克隆形成显著高于对照组,对放疗敏感度减弱。结论 LITAF基因高表达于人脑胶质母细胞瘤组织,抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞中LITAF基因表达不影响细胞的增殖和凋亡,但显著降低细胞的放疗敏感度。

菲律宾蛤仔脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α VpLITAF基因克隆及其对微生物侵染的应答研究

脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α(LITAF)是一种重要的转录因子,在调节LPS诱导炎症因子TNF-α的表达过程中发挥重要作用。采用表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)结合cDNA末端快速克隆技术(rapid amplification of cDNA Ends,RACE),获得了菲律宾蛤仔LITAF基因cDNA全长(VpLITAF),并利用实时荧光定量PCR技术研究VpLITAF的组织分布以及鳗弧菌、藤黄微球菌刺激下的时序表达特征。VpLITAF基因序列包含393bp的开放阅读框,编码130个氨基酸,预测分子量为14.39kD,理论等电点7.47。序列分析表明,VpLITAF具有高度保守的LITAF结构域,与其它贝类LITAF具有高度同源性,并在系统进化树中与海洋软体动物LITAF聚为一簇。VpLITAF基因主要表达于蛤仔肝胰腺,肌肉中的表达量则相对较低。鳗弧菌和藤黄微球菌刺激在某些时段可显著诱导VpLITAF基因的表达水平,最高可达对照组表达量的3.5倍,且鳗弧菌对VpLITAF基因表达的诱导作用明显强于藤黄微球菌。以上结果表明,VpLITAF在菲律宾蛤仔的固有免疫反应中发挥着重要作用。

红笛鲷LITAF基因的克隆与表达分析

通过同源克隆和RACE PCR技术从红笛鲷脾脏中鉴定得到了脂多糖诱导的肿瘤坏死因子(LITAF)基因,命名为Ls-LITAF。该基因c DNA全长815 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸,理论分子量为15.7 ku。序列分析显示Ls-LITAF蛋白具有保守的LITAF结构域,其中包含一个CXXC基序与一个(H)x Cxx C基序。Ls-LITAF蛋白与其他鱼类LITAF蛋白相似度较高,在系统进化树中也与其他鱼类该蛋白聚为一支。Ls-LITAF基因在健康鱼体多种组织均有表达,其中鳃、脾脏、皮肤与头肾的表达量较高;且哈氏弧菌刺激鱼体后,Ls-LITAF在脾脏和头肾中的表达量显著上调。以上研究结果为进一步了解Ls-LITAF在红笛鲷免疫反应中的作用提供了参考。

外源性胆绿素对氧糖缺失-复氧复糖损伤PC12细胞Litaf表达的影响

目的评价外源性胆绿素对氧糖缺失-复氧复糖损伤PC12细胞Litaf表达的影响。方法将PC12细胞以1×104个/孔的密度接种于96孔细胞培养板培养3 d,采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、氧糖缺失-复氧复糖组(OGD/R组)和胆绿素组(BV组)。C组37℃培养箱(95%空气+5%CO2)中培养6 h;采用无糖培养基,37℃培养箱(95%N2+5%CO2)中培养2 h后将培养基更换为正常培养基,37℃培养箱(95%空气+5%CO2)继续培养的方法制备PC12细胞氧糖缺失-复氧复糖模型,BV组于复氧复糖即刻加入2μg/ml胆绿素孵育。于复氧复糖6 h时每组随机取6孔,采用Western blot和RT-PCR法检测Litaf及其mRNA表达,采用ELISA法检测上清液TNF-α浓度。结果与C组比较,OGD/R组Litaf及其mRNA表达上调,上清液TNF-α浓度升高(P<0.05);与OGD/R组比较,BV组Litaf及其mRNA表达下调,上清液TNF-α浓度降低(P<0.05)。结论外源性胆绿素减轻PC12细胞氧糖缺失-复氧复糖损伤的机制与抑制Litaf表达上调,减轻炎症反应有关。

LITAF基因对脂肪酸诱导HPA-v细胞胰岛素抵抗的影响

目的:通过RNA干扰技术特异性抑制LITAF基因,观察HPA-v人前脂肪细胞胰岛素信号通路的变化情况。方法:将HPA-v人前脂肪细胞和THP-1源巨噬细胞共培养,分为3组,分别为阴性对照组(Scramble组)、siRNA组和正常对照组(NC组),通过qRT-PCR,Western blot法检测LITAF,IRS-2,p-PKC,PI3-K及GLUT2的表达。结果:在软脂酸的刺激下Scramble组LITAF的表达较高于LITAF siRNA和IVC组;IRS-2,p-PKC,PI3-K及GLUT2在LITAF RNAi组较NC组和Scramble组明显提高(P<0.05)。结论:LITAF参与了软脂酸引起的脂肪细胞胰岛素抵抗,而脂肪酸作用于巨噬细胞的受体TLR4同样也是LITAF通路的细胞膜受体,软脂酸减弱了对胰岛素信号通路分子的抑制作用,因此LITAF参与胰岛素抵抗对糖尿病的发病起了至关重要的作用。

PIG7基因与Litaf/Simple蛋白

PIG7基因是与p53诱导凋亡密切相关的基因,与代谢、炎症、肿瘤等关系紧密。该基因可能存在2种不同的转录本——Litaf与Simple,Litaf在LPS诱导TNF-α表达过程中起转录激活作用,Simple可能参与溶酶体介导的细胞内蛋白分选和降解过程。

脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

探讨构建人脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子(LITAF)基因的过表达慢病毒载体的技术方法,并检测其体外表达目的基因的水平。设计LITAF基因引物,应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增LITAF基因片段;应用EcoRI、Bam HI酶切LV8载体,通过连接酶将LITAF基因片段连接至线性化的LV8载体上,应用酶切及测序方法鉴定LITAF-LV8重组质粒,将其包装慢病毒后感染293T细胞(人胚肾细胞),观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,验证后感染肝癌细胞株HepG2。RT-PCR和Westernblot鉴定感染后HepG2中LITAF的表达。LITAF基因在慢病毒感染的HepG2细胞中的表达显著高于对照组细胞。说明成功构建了过表达LITAF的HepG2细胞株,为后期研究提供了实验基础。

脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α基因在眼附属器非霍奇金淋巴瘤的表达及意义

目的研究脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α(lipopolysaccharide-induced TNF-αfactor,LITAF)基因在眼附属器非霍奇金淋巴瘤中的表达,并探讨其与临床病理参数间的关系。方法采用免疫组织化学法对从青岛大学附属医院收集的50例眼附属器非霍奇金淋巴瘤标本和10例反应性淋巴组织增生病变组织标本中LITAF基因的表达进行检测,并分析其与眼附属器非霍奇金淋巴瘤患者临床病理参数间的关系。结果眼附属器非霍奇金淋巴瘤中LITAF基因阳性表达率显著低于反应性淋巴组织增生病变(P<0.05);LITAF基因的阳性表达率与性别、年龄、发病部位、肿瘤大小无关(均为P>0.05),与非霍奇金淋巴瘤病理分级有关(P<0.05)。结论 LITAF基因可能发挥着抑制眼附属器非霍奇金淋巴瘤的功能。

PIG7基因与疾病

P53分子介导的凋亡途径是细胞内重要的信号整合机制,通过识别细胞损伤启动下游促凋亡信号。PIG7是与P53诱导凋亡密切相关的基因,与代谢、炎症、肿瘤等关系紧密,逐渐成为近年相关领域的研究热点。本文从PIG7基因的发现、生物学功能及与人类疾病的关系等方面对该基因的研究进展予以综述。

Cellular reprogramming and inherited peripheral neuropathies: perspectives and challenges

Inherited peripheral neuropathies （or Charcot-Marie-Tooth disease, CMT） are a phenotypically and genetically heterogeneous group of disorders, which are currently untreatable. They are the most common inherited neuromuscular disorder, affecting around 1 in every 2,500 people （over 120,000 people in the US）. Based on clinical neurophysiological and histopathological features, inherited neuropathies can be divided into two major forms： demyelinating （type 1） and axonal （type 2） CMT （Saporta, 2014）.