二甲双胍对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤和LKB-1/AMPK通路的影响

目的探索二甲双胍对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的作用以及LKB-1/AMPK通路的影响。方法采取高脂高糖饮食、小剂量链脲佐菌素(STZ,40mg/kg)腹腔注射建立DCM大鼠模型,随机均分为对照组(10例)、模型组(10例)、二甲双胍组(10例),二甲双胍组大鼠给予盐酸二甲双胍[450mg/(kg·d)]灌胃干预,对照组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,干预4周。观察各组大鼠血脂、血糖水平,氧化应激及炎性因子水平;HE染色观察各组大鼠心脏病理学变化;Western bolt检测P-LKB-1、P-AMPK及Caspase-3水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平。结果二甲双胍组干预后血糖(BG)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)含量均低于模型组(均P<0.05),而超氧化物歧化酶(SOD)含量高于模型组(P<0.05);HE染色结果显示模型组心肌组织细胞水肿、排列混乱、炎性细胞浸润,二甲双胍组大鼠心肌病理情况均优于模型组;Western bolt结果显示二甲双胍组大鼠PLKB-1、P-AMPK蛋白水平高于模型组(P<0.05),而Caspase-3蛋白水平低于模型组(P<0.05);RT-PCR结果显示二甲双胍组MMP-2、MMP-9表达量均低于模型组(均P<0.05),而TIMP-1表达量高于模型组(P<0.05)。结论二甲双胍对DCM大鼠心肌损伤有保作用,可能与激活LKB-1/AMPK信号通路、调节细胞凋亡与心肌纤维化相关蛋白水平、降低氧化应激及炎性反应有关。

Claudin-1和LKB1在百色市壮族人群宫颈鳞癌发生发展中的表达及意义

分析百色市壮族人群宫颈鳞癌的发生发展中进行LKB1、Claudin-1的表达水平及临床意义。方法 本研究回顾性分析2018年7月-2022年6月在广西百色市妇幼保健院进行宫颈脱落细胞筛查中呈现炎症及阳性病例的18-70岁人群5000例作为研究对象,排除患有阴道宫颈疾病以及严重妇科疾病的妇女,同期脱落细胞筛查阳性病例活检标本180例。收集患者一般信息,入院日期、月经情况、性行为史,妇科疾病史及诊疗经过,将宫颈脱落细胞液基薄层细胞学检查(TCT), HPV进行检测,按照诊治常规,对HR-HPV阳性和/或 TCT检测阳性者进行阴道镜下的宫颈活检,并使用免疫组化 SP方法,来完成claudin-1,LKB1蛋白的检测。分析分析百色市壮族人群宫颈鳞癌的发生发展中进行LKB1、Claudin-1的表达水平及临床意义。结果 与淋巴结转移、临床分期、宫颈管浸润长度、Claudin-1阳性及LKB1阳性等有关,两者间有显著性差异(P<0.05);但无论其是否具有一定的年龄,两组间的差别均无显著性(P>0.05)。结论 可为临床判断宫颈鳞癌患者肿瘤恶性程度、评价预后、筛选高危个体、选择针对性的个体化治疗提供理论依据,同时低耗、环保,可为临床医生和患者本人接受,易于推广应用。

有氧运动与膳食干预对IR大鼠胰岛β细胞LKB1/AMPK信号的影响

目的:探讨有氧运动与膳食干预对胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛β细胞LKB1/AMPK信号的影响,进一步阐明有氧运动与膳食干预改善IR的中心机制。方法:采用10w高脂膳食喂养的方法建立IR大鼠模型,建模成功后随机分为高脂膳食组(IRHC)、高脂膳食运动组(IRHE)、普通膳食组(IRNC)、普通膳食运动组(IRNE);正常大鼠随机分为安静对照组(NC)和单纯运动组(NE)。运动组大鼠进行中等强度有氧运动,跑台速度为20 m/min,坡度0%,60min/d,5 d/w,共计8 w。末次运动后24 h,禁食12 h后麻醉处死并取材。测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、C肽、肿瘤抑制因子(LKB1)、腺苷蛋白激酶(AMPKα)蛋白和磷酸化表达。结果:1)10 w高脂膳食喂养后大鼠与普通膳食组相比体重、FBG、FINS、Homa-IR均显著升高(均P<0.01),Homa-ISI显著下降(P<0.01)。2)有氧运动与膳食干预8 w后对IR大鼠的影响:与NC组相比,NE组大鼠体重、FBG、C肽显著降低(P<0.05-0.01),胰岛β细胞pAMPKαThr172表达显著升高(P<0.05)。与IRHC组相比,IRHE组和IRNE组大鼠体重、FBG、FINS、C肽、Homa-IR均显著降低(P<0.05-0.01)、Homa-ISI均显著升高(P<0.05-0.01),IRNC组大鼠体重、C肽均显著降低(P<0.01)。与IRHC组相比,IRNC组和IRNE组大鼠胰岛β细胞LKB1、AMPKα、p-AMPKαThr172蛋白表达均显著升高(P<0.05-0.01)。结论:长期高脂膳食可降低胰岛β细胞LKB1/AMPK信号蛋白表达,促进胰岛素分泌;8 w膳食干预可增加IR大鼠胰岛β细胞LKB1/AMPK信号蛋白表达,减少胰岛素分泌。

LKB1对胰腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响及机制研究

目的研究LKB1基因对人胰腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响及机制。方法将LKB1过表达质粒转染至人胰腺癌细胞ASPC-1,实验分为转染试剂组、空载体组和LKB1过表达组。Western blot检测细胞转染后LKB1蛋白的表达水平;划痕实验和Transwell实验分别检测LKB1过表达对人胰腺癌细胞ASPC-1迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测LKB1过表达对AMPKα、p-AMPKα及上皮间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响。结果与转染试剂组相比,LKB1过表达质粒转染人胰腺癌细胞ASPC-1后LKB1蛋白表达水平明显增高(P<0.01),细胞迁移、侵袭能力均显著降低(P<0.01),p-AMPKα及上皮细胞标志物E-cadherin的蛋白相对表达水平增高(P<0.01),间质表型细胞标志物N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著下降(P<0.01)。结论 LKB1抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的迁移、侵袭和上皮间质转化,该抑制过程可能通过激活AMPK信号通路发挥作用。

抑癌基因LKB1在肺癌研究中的进展

大约30%的非小细胞肺癌患者中存在LKB1的功能性缺失突变,而肺癌小鼠模型的研究结果也表明LKB1的缺失很大程度上促进了肺癌的发病及进展,而且LKB1的缺失突变在促进肺癌组织类型的分化和肺癌转移中扮演着相当重要的角色,这充分说明LKB1是一个非常重要的抑癌基因。然而目前还未有充分的证据显示出LKB1的功能性缺失突变与肺癌预后有关,针对这种情况,本文对近年来LKB1在肺癌领域中的研究进展作一综述。

LKB1对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的探究LKB1基因对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响情况。方法通过细胞实验检测LKB1过表达对胰腺癌上皮间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白,及间质标记物N-钙黏蛋白、vimentin的影响,并分析其对人胰腺癌细胞PANC-1迁移和侵袭能力的影响。通过免疫荧光法对转染后的细胞进行处理,并通过荧光显微镜高倍镜观察细胞的变化情况。结果与空载体组、转染试剂组相比,LKB1过表达组中LKB1蛋白及E-钙黏蛋白表达水平显著升高(P<0.05);间质细胞标志物N-钙黏蛋白、Vimentin的蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。LKB1过表达对胰腺癌细胞PANC-1迁移和侵袭能力的影响分别为转染试剂组(45.56±6.60)、空载体组(45.06±3.85)、LKB1过表达组(22.54±3.74);转染试剂组(111.48±14.90)、空载体组(107.58±13.18)、LKB1过表达组(57.48±7.94);LKB1过表达组细胞迁移和侵袭能力均显著降低(t=-14.501、-14.824、-12.810、-13.808,P均=0.000)。结论 LKB1可以抑制人胰腺癌细胞的迁移和侵袭,该抑制过程可能与其参与上皮间质转化有关。

BZL方对游离脂肪酸诱导HepG2细胞脂肪沉积和LKB1-AMPK-ACC信号传导通路的影响

目的:研究"祛湿化瘀方"中3种已被认知的、能被分离提取的有效组分(白术多糖、栀子苷、绿原酸)组成的BZL复方对体外肝脂毒性模型脂肪沉积和LKB1-AMPK-ACC信号传导通路的影响,以进一步探讨BZL方防治脂肪肝的作用机制。方法:建立游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,设正常组、模型组和不同浓度药物血清组分别观察细胞上清液中的细胞内甘油三酯(TG)含量,细胞油红O染色,细胞的P-LKB1、P-AMPKα、P-ACC蛋白表达及LKB1、AMPKα、ACC基因表达。结果:FFA刺激24h后,模型组细胞内脂肪沉积明显,其TG含量明显高于正常组(P<0.01),细胞内P-LKB1、P-AMPK、P-ACC的蛋白表达均减弱,LKB1、AMPK、ACC的mRNA表达均明显减弱,而BZL方高剂量组细胞内TG含量显著低于模型组(P<0.01),其脂肪沉积与模型组相比也明显减轻;与模型组比较,BZL药物血清组细胞内P-LKB1、P-AMPKα、P-ACC的蛋白表达均明显增强(P<0.05,P<0.01),LKB1、AMPKα、ACC的mRNA表达也均明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:BZL方对FFA诱导的HepG2细胞脂肪沉积有显著的抑制作用,且呈剂量依赖关系,激活LKB1-AMPK-ACC信号传导通路可能是BZL方防治非酒精性脂肪性肝病的重要作用机制之一。

RNA干扰LKB1基因对前列腺癌细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨沉默肝激酶B1/丝氨酸-苏氨酸激酶11(liver kinase B1/serine-threonine kinase 11,LKB1/STK11),基因对前列腺癌细胞株RWPE-1中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的调控作用。方法构建3个sh RNA LKB1重组载体,转染至高表达LKB1的前列腺癌细胞株RWPE-1中,RT-PCR、Western blot法分别检测LKB1及TGF-β1 m RNA及蛋白表达水平;ELISA法检测细胞培养液上清中TGF-β1的分泌水平。结果构建获得的3种sh RNA LKB1表达载体,均能抑制LKB1基因的表达,其中以LKB1-sh RNA1沉默效果最强,其对LKB1 m RNA水平的抑制率为74.20%,对蛋白水平的抑制率为71.66%;转染重组质粒LKB1-sh RNA1后,TGF-β1的m RNA、蛋白表达及分泌水平均明显增加(P﹤0.05)。结论 LKB1基因沉默后,TGF-β1的表达明显增高,LKB1参与调节前列腺癌细胞中TGF-β1的表达,提示LKB1基因可作为研究前列腺癌发生发展的分子机制的新靶点。

黑斑息肉病LKB1基因胚系突变和肿瘤易感性研究

目的 检测黑斑息肉病患者LKB 1基因胚系突变及特点 ,并调查国内黑斑息肉病患者的肿瘤发生率和肿瘤发生特点。方法 (1)对 12例确诊的黑斑息肉病患者 (9例家族性 ,3例散发性 )取血 ,提取血脱氧核糖核酸 (DNA) ,分别以多聚酶链反应 (PCR)扩增LKB 1的 9个外显子 ,并逐一测序 ;(2 )综合分析作者搜集的 5个大的黑斑息肉病家系 32例患者和 7例散发性患者 ,并结合国内近 10年来报道的较大家系和有关文献 34篇共计 16 9例患者 ,总结恶性肿瘤的发生率和特点。结果 (1) 12例患者中 ,7例有LKB 1的胚系突变 ,多数突变为病理性突变 ;(2 )综合分析 16 9例患者中 ,恶性肿瘤发生率为 2 0 1% ,家族性患者 90例中恶性肿瘤发生率为2 0 .0 %。发病较多的肿瘤为结肠癌 12例 ,胃癌 5例 ,直肠癌、小肠癌和宫颈癌各 3例 ,卵巢癌和骨肉瘤各 2例 ,病理类型以低分化黏液腺癌为多 ,患者平均确诊年龄 32 2岁。结论 (1)LKB 1基因胚系突变是本病重要的分子遗传学基础 ,LKB 1基因突变检测可用于多数患者的遗传学诊断 ;(2 )黑斑息肉病患者是典型的肿瘤高发人群 ,常见肿瘤依次为结直肠癌、胃癌、小肠癌、宫颈癌和卵巢癌等 ,恶性肿瘤发病年龄轻 ,分化较差。

LKB1抑癌机制研究进展

人LKB1(Liver Kinase B1,或Serine-Threonine Kinase 11,STK11)基因的胚系失活突变可导致癌症易感病皮杰氏综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS),该病患者多发错构瘤息肉且患癌症风险增加。LKB1基因的体细胞突变还广泛地存在于众多类型的恶性肿瘤中,如肺癌、结肠癌和乳腺癌等,因此,LKB1被普遍认为是抑癌基因。LKB1基因的编码产物LKB1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,调节多种细胞生理病理过程。虽然LKB1的抑癌机制尚不完全清楚,但现有的研究表明,对细胞生长增殖、能量代谢和细胞极性等的调控是其抑制肿瘤发生和发展的重要方面。本文就目前已知的LKB1的抑癌机制作一综述。

人喉癌组织中抑癌基因LKB1和血管内皮生长因子C的表达及意义

目的:研究人喉癌组织中抑癌基因LKB1与血管内皮生长因子C(Vascular Endothelial Growth Factor-C,VEGF-C)的表达并探讨其意义。方法:选取50例喉鳞状细胞癌患者喉癌组织及50例喉良性疾病喉组织,采取逆转录聚合酶链反应检测组织标本中LKB1 mRNA与VEGF-C mRNA的表达情况,并比较不同Broder分级及临床分期等的表达差异。结果:喉癌组织中的LKB1mRNA阳性表达明显低于良性疾病喉组织,VEGF-C mRNA阳性表达明显高于良性疾病喉组织,差异具有统计学意义(P<0.05);Broder分级LKB1 mRNA在I级中阳性表达率最高,III级-IV级中阳性表达最低,VEGF-C mRNA阳性表达在I级中最低,II级-IV级中最高,差异具有统计学意义(P<0.05);LKB1 mRNA在T1中阳性表达率最高,T3-T4中阳性最低,VEGF-C mRNA阳性表达在T1中最低,T3-T4中最高,差异具有统计学意义(P<0.05);LKB1 mRNA、VEGF-C mRNA阳性表达与年龄无关(P>0.05);喉癌组织中的LKB1 mRNA、VEGF-C mRNA阳性表达Spearman相关性分析呈现直线负相关(r=0.648,P<0.05)。结论:喉鳞状细胞癌组织中抑癌基因LKB1、血管内皮生长因子VEGF-C的表达存在异常,并且与肿瘤的Broder分级、分期等病理情况有关,提示LKB1、VEGF-C可能在喉癌发生及发展中起到重要作用。