转录因子LMO3在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及对预后的临床意义

目的探讨转录因子LMO3在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的表达及对预后的临床意义。方法收集82例石河子大学第一附属医院经病理检查确诊为DLBCL的患者的临床资料,采用免疫组织化学染色法检测LMO3在DLBCL中的表达,分析LMO3的表达与DLBCL临床特征及预后的关系。结果纳入的82例DLBCL患者中,LMO3阳性表达19例(23.2%),阴性表达63例(76.8%)。LMO3表达患者在性别、国际预后指数(IPI)评分、乳酸脱氢酶(LDH)水平、免疫分型等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。LMO3表达与年龄、临床分期(Ann Arbor分期)、B组症状、美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分、CD5阳性有相关性(P<0.05)。LMO3阳性组的无进展生存时间和总生存时间短于LMO3阴性组,无进展生存率和总生存率均低于LMO3阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。CD5、LMO3表达双阳性患者的无进展生存率和总生存率均低于双表达阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析发现,年龄>60岁、CD5表达阳性、LMO3表达阳性、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ、B组症状、ECOG评分>1分、IPI评分>2分是影响总生存时间的风险因素;年龄>60岁、CD5表达阳性、LMO3表达阳性、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、症状为B组症状、ECOG评分>1分、IPI评分>2分、治疗方案为CHOP是影响无进展生存时间的危险因素。多因素分析结果发现,B组症状和IPI评分>2分为影响总生存时间的独立危险因素。结论LMO3在DLBCL中的表达有可能成为预测患者预后的新型免疫位点。LMO3在DLBCL中的表达与其临床特征存在相关性,CD5与LMO3在DLBCL中的表达有明显相关性,有可能存在相互联系的致病机制或信号通路,有望成为新的免疫治疗靶点。

单核细胞增生李斯特菌新型转录调节因子lmo2486的分子特征及原核表达研究

克隆目的基因LM lmo2486,分析目的基因及其编码蛋白的分子特征,并验证其编码蛋白的反应原性,为进一步研究LM lmo2486的生物学特性奠定前期的基础。通过PCR扩增单核细胞增生李斯特菌(LM)新型转录调节因子lmo2486基因,对该基因进行测序,预测分析其编码蛋白质的二、三级结构、理化特性、蛋白结构域等分子特征,并进行遗传进化分析。PCR克隆lmo2486基因的抗原集中区lmo2486K,构建重组载体pET-32a(+)-lmo2486K转化至大肠埃希氏菌感受态细胞BL21(DE3)并使用IPTG低温诱导表达,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测重组蛋白。结果显示,LM lmo2486基因全长1212 bp,共编码403个氨基酸;lmo2486基因编码的蛋白具有亲水性和跨膜结构,无信号肽,预测发现lmo2486含有PspC和DUF4097结构域。序列同源对比发现,LM lmo2486测序所得的核苷酸序列与LM不同分离株属于同一分支,亲缘关系较近,表明lmo2486基因在LM中高度保守。SDS-PAGE检测表明,重组蛋白Lmo2486K的分子质量约为64.6 ku,Western blot分析发现,Lmo2486K蛋白具有一定的反应原性。

考虑评估可靠性的2.25Cr-lMo钢蠕变损伤剩余寿命预测方法

蠕变损伤是火电厂管道最常见失效形式之一,对其进行剩余寿命预测是确保设备使用安全性、利用率和效益最大化的有效保障。基于实际服役超20万h 2.25Cr-lMo耐热钢蠕变持久试验数据,综合考虑工作应力与时间-温度热强参数(TTP),分析了TTP选择原则及对寿命预测精度的影响,利用Z参数法的关系曲线族表征了不同电厂管道持久性能数据的垂直分散性,建立了评估寿命预测可靠性的应力-TTP-可靠度曲线,得出不同电厂管道预测寿命与机组工作状态的关系,获得不同电厂试样在540℃/45.26 MPa环境下运行的蠕变剩余寿命分别为1.7256×10^(5) h和3.3788×10^(5) h,且预测可靠度达到99%。研究结果可为电厂设备运行可靠性提供检修建议。

Lmo7对MC3T3-E1细胞增殖、迁移及成骨分化影响的实验研究

目的:研究Lmo7基因对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1 cells)增殖、迁移及成骨能力的影响。方法:体外培养MC3T3-E1细胞并对其进行成骨诱导,在0、3、7、14 d时收样,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)验证Lmo7的表达变化。利用慢病毒转染pLV-shLmo7获得稳定干扰Lmo7表达的细胞株,并通过CCK-8实验、EdU细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测Lmo7对细胞增殖、迁移能力的影响。通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法检测ALP的表达活性,通过RT-qPCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、Osterix、ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达。结果:Lmo7基因在成骨诱导的过程中表达上调。成功构建了Lmo7干扰的稳转细胞株,其增殖活性显著提高,而迁移能力受到抑制。对其进行成骨诱导后发现,与对照组相比,Lmo7干扰稳转株的ALP染色较浅,成骨相关基因Runx2、Osterix、ALP、OCN表达水平明显下调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Lmo7低表达后可促进细胞增殖,抑制细胞迁移,下调Runx2、Osterix、ALP、OCN的表达能够抑制MC3T3-E1细胞体外成骨分化。

PD-1、LMO2蛋白表达在伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤病理诊断中的价值研究

本研究旨在探讨PD-1、LMO2在伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤(LBCL-IRF4)的病理诊断中的价值。采用免疫组化方法检测LBCL-IRF4、弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和滤泡性淋巴瘤(FL)组织中PD-1、LMO2的表达情况,并比较它们在不同亚型间的差异。结果显示,联合检测PD-1、LMO2有助于LBCL-IRF4的诊断及鉴别诊断。具体来说,PD-1在LBCL-IRF4组的表达率低于FL组,而LMO2在LBCL-IRF4组的表达率高于DLBCL的Non-GCB组。

磷酸钙纳米颗粒介导干扰LMO4对皮肤鳞癌细胞增殖的影响

目的运用磷酸钙纳米颗粒包裹DNA转染皮肤鳞癌细胞,以靶向干扰LIM结构域蛋白4(LMO4)表达,探讨转录因子LMO4在皮肤鳞癌中作用和机制。方法采用逆转录-定量PCR技术(RT-qPCR)、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹技术检测目的分子表达。利用经典方法制备磷酸钙纳米颗粒,包裹含有靶向干扰LMO4的shRNA表达载体,转染人皮肤鳞癌细胞A431。采用噻唑蓝(MTT)方法检测细胞增殖能力;运用流式细胞分析技术检测细胞周期变化。结果LMO4在皮肤鳞癌组织和A431细胞中高水平表达。磷酸钙纳米颗粒与DNA的最佳包裹比例为10∶1。此纳米颗粒包裹的DNA可以有效转染A431细胞并有效干扰LMO4表达,与脂质体转染后的干扰效率相比,差异无统计学意义(P=0.21)。在A431细胞中干扰LMO4后的24、36和48 h,细胞的增殖能力较对照组均显著降低。细胞周期分析显示:干扰组G_(0)/G_(1)期细胞为39.82%±1.86%,与对照组G_(0)/G_(1)期细胞(30.76%±1.96%)相比,差异有统计学意义(P=0.003);干扰组的S期细胞为39.56%±0.65%,与对照组的S期细胞(50.65%±0.62%)比较,差异有统计学意义(P=0.002)。干扰LMO4表达可以抑制细胞周期素蛋白E和周期素蛋白激酶2(CDK2)的表达。结论磷酸钙纳米颗粒能有效包裹DNA,并具有较高的转染效率;干扰LMO4表达可抑制细胞周期素蛋白E和CDK2的表达,抑制细胞增殖。

LMO7通过CUL4A促进结直肠癌转移的机制研究

目的探究LIM结构域蛋白7(LMO7)在结直肠癌中的表达及其调控结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的机制。方法采用qRT-PCR检测正常组织、结直肠癌组织中LMO7的表达情况。采用Transwell实验检测敲低或过表达LMO7对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。采用生物信息学方法预测LMO7的共表达分子。qRT-PCR和Western blot检测过表达或沉默LMO7后CUL4A表达水平的变化。采用染色质免疫沉淀实验(ChIP)探究LMO7结合CUL4A启动子区域促进其表达的机制。结果与正常组织相比,LMO7在无转移结直肠癌组织、伴转移结直肠癌组织中的表达量依次上调(P<0.05)。与人正常结直肠黏膜细胞株FHC相比,LMO7在5种结直肠癌细胞株中的表达水平明显上调(P<0.05)。敲低LMO7抑制HCT116和SW480细胞的迁移、侵袭能力,过表达LMO7增强HCT116和SW480细胞的迁移、侵袭能力。过表达LMO7会促进CUL4A的表达,而沉默LMO7会抑制CUL4A的表达。LMO7可能通过结合CUL4A启动子P3区域促进其表达。结论LMO7在结直肠癌组织和细胞中呈高表达,通过结合CUL4A的启动子P3区域增强其表达,促进结直肠癌的迁移和侵袭。

脑胶质瘤患者LMO-1和LMO-4基因表达水平的改变及其意义

目的探讨脑胶质瘤患者脑组织中LMO-1和LMO-4基因表达水平的改变及其意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测46例脑胶质瘤手术患者脑组织及19例正常脑组织标本中LMO1和LMO4的表达水平,分析LMO1、LMO4与病理分级之间的关系。结果脑胶质瘤患者脑组织中LMO-1表达高于正常对照组(P<0.05);LMO1在不同分级的胶质瘤中表达并不相同,在Ⅲ、Ⅳ级中的相对表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ级(P<0.01);LMO1表达水平与胶质瘤分级正相关,差异具有显著性意义(P<0.05)。在多形性胶质母细胞瘤患者脑组织中,LMO-4的表达明显高于其它级别胶质瘤和正常对照组(P<0.05)。结论脑胶质瘤患者肿瘤组织中LMO-1和LMO-4表达增高,可能参与了胶质瘤的发生、发展过程。

pGEX-5X-1-hLMO4原核质粒构建及重组蛋白表达

目的:构建hLMO4的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:hLMO4全长编码基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在BL21大肠杆菌中诱导GST-hLMO4融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western blot鉴定结果。结果:hLMO4编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在E.coli BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为49 000 Da,成功纯化出GST及GST-hLMO4蛋白,Western blot检测到蛋白表达。结论:构建了hLMO4基因原核表达载体,鉴定了GST-hLMO4融合蛋白表达。

GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。

LMO3 mRNA在小鼠脑发育过程中的表达

目的：研究不同发育时期小鼠脑内LMO3的表达．方法：采用以SYBR Green Ⅰ为荧光染料的定量RT-PCR及以地高辛标记的cRNA为探针的原位杂交组织化学法检测LMO3基因在小鼠脑发育过程中的表达．结果：FQRT-PCR结果表明，LMO3在出生前高表达，P7d后表达水平急剧下降，至成年都维持在一个较低的水平．LMO3 mRNA在小鼠胚胎期E10．5d即有表达，但仅限于整个脑泡组织内，胚体其他区域均为阴性；E11．5d脑区信号逐渐加强，无核团及脑区的特异性，胚体其他部分仍为阴性；E15．5～P0d期LMO3阳性信号在几乎所有观察的脑区均有广泛而较强的着色；P7d LMO3阳性信号较出生前变弱，分布逐渐集中；P14～P60d LMO3mRNA表达范围较P7d逐渐缩小，但仍有广泛表达，阳性信号主要集中于不同核团，表达有强弱之分．结论：LMO3基因可能与小鼠出生前脑的发育以及出生后特定脑区神经元的特化及特性维持有关．

LMO3 mRNA在小鼠中枢神经系统的表达定位

目的 观察神经特异性转录因子LMO3mRNA在小鼠中枢神经系统中的定位。方法 原位杂交组织化学染色。结果LMO3mRNA阳性神经元可见于大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓，在小鼠中枢神经系统中，LMO3mRNA阳性反应产物主要位于细胞质和突起内。强阳性信号主要出现于大脑皮质的Ⅱ一Ⅵ层、梨状皮质、内嗅皮质、海马的CA1区、齿状回、中脑的黑质致密部、红核、室旁核、巨细胞网状核、外侧网状核、三叉神经脑桥核、面神经核、三叉神经运动核、舌下神经核等部位；中等强度着色主要分布于扣带前皮质、嗅球、海马的CA2区、梨状内核、杏仁核等部位；海马的CA3区、尾壳核、苍白球、杏仁复合体、丘脑、三叉神经脊束核、疑核、中缝核团、小脑间置核及外侧核、浦肯野细胞可见弱的阳性细胞。结论LMO3基因在CNS的广泛分布提示它除了在多巴胺神经递质的活动中起作用外，还参与了机体的学习记忆、嗅觉的调节。

过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

不同蛋白标签对LMO2融合蛋白沉淀实验的影响

融合蛋白沉淀技术是一种用来研究蛋白质相互作用的新的体外实验技术,通常利用蛋白亲和标签与探针蛋白融合表达来钓取未知相互作用蛋白或验证已知蛋白间的相互作用,其中以谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签最为常用。LMO2(由LIMonly缩写得名,也称Ttg-2或Rbtn2)是一种小分子量难溶蛋白。利用原核系统分别表达了含有GST和麦芽糖结合蛋白(MBP)两种标签的LMO2融合蛋白,发现GST-LMO2融合蛋白以包涵体的形式表达,而MBP-LMO2融合蛋白则能够以可溶形式表达,而且MBP-LMO2的表达量明显高于GST-LMO2融合蛋白。将可溶性的MBP-LMO2融合蛋白和复性后的GST-LMO2融合蛋白分别用于钓取K562细胞中LMO2的结合蛋白,结果显示二者都可以结合K562细胞中内源性的GATA1蛋白,而MBP-LMO2融合蛋白捕获的GATA1蛋白明显多于复性后的GST-LMO2融合蛋白。这一结果提示,在研究一些分子量小、疏水性强的蛋白质时改变标签蛋白可能是一种有益的尝试。

TGF-β1、LMO1在胃癌组织中的表达及意义

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)、LMO1在胃癌组织的表达及二者的相关性,探讨TGF-β1、LMO1在胃癌发生发展中的作用。方法选取60例胃癌和50例正常胃组织,采用Real time-PCR和Western Blot检测TGF-β1、LMO1 mRNA和蛋白表达水平。采用免疫组织化学SP法检测TGF-β1、LMO1蛋白表达,分析TGF-β1、LMO1表达与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织TGF-β1、LMO1基因的mRNA和蛋白表达水平均比正常胃黏膜组织明显增强(P<0.05)。TGF-β1、LMO1蛋白在胃癌组织中阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。TGF-β1、LMO1表达与年龄、性别、发病部位无关(P>0.05),而与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。TGF-β1、LMO1表达呈正相关(r=0.875,P=0.001)。结论胃癌组织TGF-β1、LMO1表达异常增高,可能参与了胃癌发生发展。TGF-β1、LMO1可作为反映胃癌恶性生物学行为及治疗的分子指标之一。

LMO2调控E-cadherin启动子的活性对前列腺癌恶化转移的影响

目的:研究原癌基因LMO2异常表达对前列腺癌恶化转移的影响及其可能机制。方法:采用分子克隆技术构建了一系列不同长度和点突变的E-cadherin基因启动子区序列至pGL-3 basic荧光素酶表达载体,然后将这些重组质粒与LMO2表达质粒共转染Lncap细胞并在24 h后检测其荧光素酶活性。结果:过表达LMO2可以显著的抑制E-cadherin启动子荧光素酶报告基因的活性,使荧光素酶活性下降50%左右。通过截短和点突变研究发现其作用机制主要通过结合在启动子区-204/-198处的E-box位点发挥作用。结论:原癌基因LMO2可通过对Ecadherin发挥转录抑制作用来影响前列腺癌的恶化与转移。

大鼠局灶性脑缺血后LMO4和pCREB的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后核转录因子LMO4和pCREB在缺血半暗带的表达规律及与凋亡抗原的共表达。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组及缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、48h组,线栓法制备局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2h后恢复再灌住,采用Western blot法、免疫荧光法检测LMO4、pCREB在缺血半暗带的表达变化,免疫荧光双标观察LMO4、pCREB的表达定位及与TUNEL阳性细胞之间的共表达情况。结果与假手术组比较,缺血侧半暗带皮层组织LMO4蛋白水平再灌后3h开始升高,24h达高峰,48h明显下降,pCREB蛋白水平6h开始升高,24h达高峰,48h逐渐下降(P<0.05或P<0.01);LMO4、pCREB阳性细胞数再灌后6h开始升高,24h达高峰,48h显著下降(P<0.05或P<0.01);免疫荧光双标显示LMO4和pCREB仅表达于神经元,LMO4主要表达于细胞核,少量位于细胞浆,pCREB仅表达于细胞核;LMO4与pCREB完全共表达;LMO4、pCREB均与TUNEL阳性细胞呈分离表达。结论脑缺血再灌后诱导LMO4、pCREB表达升高,并呈动态变化趋势,可能为神经细胞对缺血再灌注损伤的一种内部适应性保护机制。

单增李斯特菌阳性样品细菌存活检测及VIDAS检测LMO效率

目的:观察单增李斯特菌(L.monocytohenes以下简称LMO)存活率,探讨LMO检测的方法。方法:用国标GB/T4789-30-2003[1]与Mini VIDAS[2]平行检测。结果:10份阳性样品置冰箱(0℃以下)存放12个月后,用国标GB/T4789-30-2003检出8株菌株,检出率为80%,用Mini VIDAS法LMO阳性3份。结论:10件阳性样品存活率(国标法检出率)为80%,而Mini VIDAS法阳性率仅为30%。

转录调控因子Lmo2672对LM环境适应性和应激的调控作用

【目的】本文为了解AraC家族转录调控因子Lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)环境适应性和应激的影响。【方法】利用温控型质粒pKSV7构建LM-Δlmo2672缺失株,比较母源株LM EGD-e和缺失株LM-Δlmo2672在不同应激环境中生长情况的差异,并利用qRT-PCR方法分析转录调控因子Lmo2672缺失对应激调控基因及氧化应激相关基因转录水平的影响。【结果】与LM EGD-e相比,LM-Δlmo2672在37、42℃及含5%NaCl、0.3%胆酸盐、5 mM H2O2、1%Triton X-100的培养基中生长速度均显著降低(P<0.05);且环境适应性及应激相关基因(prfA、lexA、fri、perR、kat、sod)转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】提示lmo2672基因在LM环境适应性和应激中发挥重要的调控作用。

转录因子LMO3对子宫内膜癌患者预后的影响

目的探讨转录因子LMO3表达水平对子宫内膜癌患者预后的影响。方法应用TCGA、GeneMANIA、STRING数据库分析子宫内膜癌组织中LMO3表达与患者预后的关系,以及LMO3的基因互作关系、LMO3与TP53突变的关系。收集51例2011年3月至2014年12月在重庆医科大学附属第一医院接受手术且组织病理学诊断为子宫内膜癌患者的子宫内膜组织石蜡切片及临床信息,并进行免疫组织化学染色,分析LMO3在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。利用SPSS绘制生存曲线及COX多因素进行回归分析。在子宫内膜癌细胞中过表达LMO3后验证其对肿瘤细胞迁移的影响。结果TCGA数据库分析结果显示,在子宫内膜癌患者中LMO3高表达组的总生存期和无病生存期均显著低于LMO3低表达组(P<0.05),LMO3在TP53突变型患者中的表达水平显著高于TP53野生型患者,通过GeneMANIA及STRING数据库分析发现与LMO3相互作用的基因主要有NHLH2、LDB2等。免疫组织化学染色结果显示LMO3高表达组患者的无病生存期低于LMO3低表达组(P=0.005),多因素COX分析提示LMO3可作为子宫内膜癌的预后因素。过表达LMO3后,子宫内膜癌细胞的迁移能力增强。结论LMO3高表达的子宫内膜癌患者预后差,其可能与LMO3过表达促进子宫内膜癌细胞的迁移有关。