pGEX-5X-1-hLMO4原核质粒构建及重组蛋白表达

目的:构建hLMO4的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:hLMO4全长编码基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在BL21大肠杆菌中诱导GST-hLMO4融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western blot鉴定结果。结果:hLMO4编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在E.coli BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为49 000 Da,成功纯化出GST及GST-hLMO4蛋白,Western blot检测到蛋白表达。结论:构建了hLMO4基因原核表达载体,鉴定了GST-hLMO4融合蛋白表达。

单纯LIM蛋白在实体瘤中的研究进展

单纯LIM蛋白(LMO)是一类含有锌指结构的蛋白的总称,这类蛋白包含4个家族成员,分别为:LMO1、LMO2、LMO3、LMO4,这4个蛋白成员在功能区都有锌指结构,因此在结构上具有相似性。研究表明LMO并非直接参与肿瘤的发生和发展,而是通过与相关蛋白组成蛋白复合体影响肿瘤细胞增殖、侵袭和转移。LMO在恶性肿瘤中的研究最早在急性T淋巴细胞白血病和急性B淋巴细胞白血病中展开,并且针对LMO2基因突变导致的急性T淋巴细胞白血病开展了早期的基因治疗。近年来LMO在神经母细胞瘤、神经胶质细胞瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌以及肺癌等实体瘤细胞的研究也有不少报道。然而,这类蛋白的具体作用机制,如在不同肿瘤中与什么蛋白组成复合体影响肿瘤的发生、发展,复合体中蛋白的各自作用机理等问题还需更深入的研究。