转录因子LMO3在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及对预后的临床意义

目的探讨转录因子LMO3在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的表达及对预后的临床意义。方法收集82例石河子大学第一附属医院经病理检查确诊为DLBCL的患者的临床资料,采用免疫组织化学染色法检测LMO3在DLBCL中的表达,分析LMO3的表达与DLBCL临床特征及预后的关系。结果纳入的82例DLBCL患者中,LMO3阳性表达19例(23.2%),阴性表达63例(76.8%)。LMO3表达患者在性别、国际预后指数(IPI)评分、乳酸脱氢酶(LDH)水平、免疫分型等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。LMO3表达与年龄、临床分期(Ann Arbor分期)、B组症状、美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分、CD5阳性有相关性(P<0.05)。LMO3阳性组的无进展生存时间和总生存时间短于LMO3阴性组,无进展生存率和总生存率均低于LMO3阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。CD5、LMO3表达双阳性患者的无进展生存率和总生存率均低于双表达阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析发现,年龄>60岁、CD5表达阳性、LMO3表达阳性、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ、B组症状、ECOG评分>1分、IPI评分>2分是影响总生存时间的风险因素;年龄>60岁、CD5表达阳性、LMO3表达阳性、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、症状为B组症状、ECOG评分>1分、IPI评分>2分、治疗方案为CHOP是影响无进展生存时间的危险因素。多因素分析结果发现,B组症状和IPI评分>2分为影响总生存时间的独立危险因素。结论LMO3在DLBCL中的表达有可能成为预测患者预后的新型免疫位点。LMO3在DLBCL中的表达与其临床特征存在相关性,CD5与LMO3在DLBCL中的表达有明显相关性,有可能存在相互联系的致病机制或信号通路,有望成为新的免疫治疗靶点。

LMO3 mRNA在小鼠中枢神经系统的表达定位

目的 观察神经特异性转录因子LMO3mRNA在小鼠中枢神经系统中的定位。方法 原位杂交组织化学染色。结果LMO3mRNA阳性神经元可见于大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓，在小鼠中枢神经系统中，LMO3mRNA阳性反应产物主要位于细胞质和突起内。强阳性信号主要出现于大脑皮质的Ⅱ一Ⅵ层、梨状皮质、内嗅皮质、海马的CA1区、齿状回、中脑的黑质致密部、红核、室旁核、巨细胞网状核、外侧网状核、三叉神经脑桥核、面神经核、三叉神经运动核、舌下神经核等部位；中等强度着色主要分布于扣带前皮质、嗅球、海马的CA2区、梨状内核、杏仁核等部位；海马的CA3区、尾壳核、苍白球、杏仁复合体、丘脑、三叉神经脊束核、疑核、中缝核团、小脑间置核及外侧核、浦肯野细胞可见弱的阳性细胞。结论LMO3基因在CNS的广泛分布提示它除了在多巴胺神经递质的活动中起作用外，还参与了机体的学习记忆、嗅觉的调节。

LMO3 mRNA在小鼠脑发育过程中的表达

目的：研究不同发育时期小鼠脑内LMO3的表达．方法：采用以SYBR Green Ⅰ为荧光染料的定量RT-PCR及以地高辛标记的cRNA为探针的原位杂交组织化学法检测LMO3基因在小鼠脑发育过程中的表达．结果：FQRT-PCR结果表明，LMO3在出生前高表达，P7d后表达水平急剧下降，至成年都维持在一个较低的水平．LMO3 mRNA在小鼠胚胎期E10．5d即有表达，但仅限于整个脑泡组织内，胚体其他区域均为阴性；E11．5d脑区信号逐渐加强，无核团及脑区的特异性，胚体其他部分仍为阴性；E15．5～P0d期LMO3阳性信号在几乎所有观察的脑区均有广泛而较强的着色；P7d LMO3阳性信号较出生前变弱，分布逐渐集中；P14～P60d LMO3mRNA表达范围较P7d逐渐缩小，但仍有广泛表达，阳性信号主要集中于不同核团，表达有强弱之分．结论：LMO3基因可能与小鼠出生前脑的发育以及出生后特定脑区神经元的特化及特性维持有关．

多巴胺对C8胶质细胞生长及LMO3和CIB1表达的影响

目的了解多巴胺对C8胶质细胞生长的影响、可能受体途径以及对CIB1、LMO3表达的影响。方法采用MTT方法检测多巴胺、多巴胺受体激动剂、多巴胺受体拮抗剂对C8胶质细胞生长增殖的作用,同时采用免疫荧光组化法检测不同浓度多巴胺对C8胶质细胞中LMO3、CIB1表达及定位的影响。结果多巴胺对C8胶质细胞的作用与浓度相关,低浓度(10μmol/L)对C8胶质细胞生长无明显影响,中浓度(100μmol/L)可明显促进C8胶质细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),而高浓度(500μmol/L)则抑制C8胶质细胞生长(P<0.05);多巴胺处理组比多巴胺D1激动剂组促C8胶质细胞生长作用明显,同时加入多巴胺及D2受体拮抗剂组比多巴胺处理组C8胶质细胞显著增加(P<0.01)。低浓度(10μmol/L)多巴胺显著增加C8胶质细胞LMO3的表达水平(P<0.05);高浓度(500μmol/L)多巴胺则降低CIB1蛋白的表达(P<0.05)。结论多巴胺主要通过多巴胺D2受体对C8胶质细胞生长增殖起作用,并呈浓度相关性,多巴胺D2受体拮抗剂对C8胶质细胞促增殖作用有协同性,不同浓度多巴胺对C8胶质细胞中CIB1及LMO3的表达影响不同,具体作用机制还有待进一步研究。

miRNA-382靶向LMO3对非小细胞肺癌上皮间质转化的影响

目的探究miRNA-382靶向LMO3对非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转化及侵袭的影响。方法收集2017年11月至2018年7月于福建医科大学附属第二医院手术切除的NSCLC组织和癌旁组织标本各60例,采用荧光定量PCR检测NSCLC和癌旁组织中miRNA-382的表达水平。构建miRNA-382过表达(miRNA-382 OE)和质粒对照(miRNA-382 NC)慢病毒稳定感染细胞系,通过生物信息学和荧光素酶基因检测验证miRNA-382与LMO3的靶向关系。采用Western blot分析miRNA-382过表达对LMO3、Vimentin、E-cadherin蛋白水平的影响。采用Transwell实验检测miRNA-382过表达对A549细胞侵袭能力的影响。结果与癌旁组织(1.36±0.27)相比,NSCLC组织中miRNA-382的相对表达水平(0.49±0.10)显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学预测LMO3可能是miRNA-382的一个靶基因;荧光素酶报告检测显示,与转染WT-LMO3的miRNA-382 NC细胞比较,转染WT-LMO3的miRNA-382 OE细胞荧光素酶活性显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组和miRNA-382 NC组比较,miRNA-382 OE组细胞中LMO3和Vimentin的蛋白表达水平显著降低,E-cadherin的蛋白表达水平显著增强,差异有统计学意义(均P<0.05);与miRNA-382 OE组比较,miRNA-382 inhibitor组细胞中LMO3和Vimentin的蛋白表达水平明显上调,E-cadherin的蛋白表达水平则明显降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。Transwell小室检测结果表明,miRNA-382 OE组细胞的侵袭能力[(34.72±7.29)个]较对照组[(77.83±9.71)个]和miRNA-382 NC组[(81.16±10.53)个]显著下调,miRNA-382 OE+LMO3组细胞的侵袭能力[(60.77±7.31)个]较miRNA-382 OE组明显上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miRNA-382可能通过下调LMO3的表达抑制NSCLC细胞的侵袭和上皮间质转化。

转录因子LMO3对子宫内膜癌患者预后的影响

目的探讨转录因子LMO3表达水平对子宫内膜癌患者预后的影响。方法应用TCGA、GeneMANIA、STRING数据库分析子宫内膜癌组织中LMO3表达与患者预后的关系,以及LMO3的基因互作关系、LMO3与TP53突变的关系。收集51例2011年3月至2014年12月在重庆医科大学附属第一医院接受手术且组织病理学诊断为子宫内膜癌患者的子宫内膜组织石蜡切片及临床信息,并进行免疫组织化学染色,分析LMO3在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系。利用SPSS绘制生存曲线及COX多因素进行回归分析。在子宫内膜癌细胞中过表达LMO3后验证其对肿瘤细胞迁移的影响。结果TCGA数据库分析结果显示,在子宫内膜癌患者中LMO3高表达组的总生存期和无病生存期均显著低于LMO3低表达组(P<0.05),LMO3在TP53突变型患者中的表达水平显著高于TP53野生型患者,通过GeneMANIA及STRING数据库分析发现与LMO3相互作用的基因主要有NHLH2、LDB2等。免疫组织化学染色结果显示LMO3高表达组患者的无病生存期低于LMO3低表达组(P=0.005),多因素COX分析提示LMO3可作为子宫内膜癌的预后因素。过表达LMO3后,子宫内膜癌细胞的迁移能力增强。结论LMO3高表达的子宫内膜癌患者预后差,其可能与LMO3过表达促进子宫内膜癌细胞的迁移有关。

LMO3基因在卒中后抑郁大鼠认知功能障碍中的作用

目的探讨LMO3基因在卒中后抑郁(PSD)大鼠认知功能障碍中的作用.方法选择清洁级SD雄性大鼠40只,随机分为对照组、模型组、阴性对照组(control-shRNA组)、LMO3抑制组(LMO3 shRNA组),每组10只,除对照组外,其余各组采用线栓法构建PSD模型.对各组大鼠神经功能缺损评价和Morris水迷宫实验;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脑海马组织病理形态学变化;采用免疫组化检测各组大鼠脑组织LMO3的表达水平;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测神经元凋亡水平;采用蛋白印迹法(Western blot)检测脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测脑组织LMO3、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平.结果与对照组相比,模型组和control-shRNA组大鼠逃避潜伏期长,象限停留时间短,穿越平台次数减少(P<0.05),差异有统计学意义;LMO3 shRNA组与control-shRNA组相比,大鼠逃避潜伏期短,象限停留时间长、穿越平台次数增加(P<0.05).模型组和control-shRNA组大鼠神经元凋亡数均高于对照组;抑制LMO3基因的表达后神经元凋亡数减少.与对照组相比,模型组和control-shRNA组大鼠脑组织LMO3、Bax蛋白及mRNA表达水平均显著升高,Bcl-2蛋白及mRNA表达水平下降(均P<0.05);与control-shRNA组相比,LMO3 shRNA组大鼠脑组织LMO3蛋白及mRNA表达水平显著降低,抑制LMO3表达明显下调Bax蛋白及mRNA表达水平,上调Bcl-2蛋白及mRNA表达水平(P<0.05).结论抑制LMO3基因表达可改善PSD大鼠认知功能障碍,其作用机制可能是通过减少海马组织神经元凋亡水平.

LMO3过表达对胶质细胞增殖的作用

构建重组质粒pcDNA4/HisA-LMO3,转染C8-D1A胶质细胞,对照组为pcDNA4/HisA空载体质粒转染组和未转染组,MTT观察各组细胞的体外生长情况,流式细胞术(FCM)测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞百分比,Western-blot检测LMO3转染后凋亡相关蛋白的表达变化,从而观察LMO3基因对C8-D1A胶质细胞体外生长的影响.RT-PCR、Western印迹显示pcDNA4/HisA-LMO3转染组LMO3mRNA及LMO3蛋白表达水平明显高于对照组;与对照组细胞相比,转染组细胞的增殖能力明显高于空载体对照组及C8细胞(P<0.01),S期细胞增加,G0/G1期细胞减少,C8细胞转染LMO3后可以促进C8细胞从G0/G1期进入S期,从而促进细胞的增殖.

LMO3基因在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的观察LMO3基因在人脑胶质瘤组织中的表达与临床病理特征的关系。方法用半定量方法检测44例人脑胶质瘤组织与12例正常脑组织中经逆转录-聚合酶链式反应扩增后的LMO3基因表达。结果LMO3基因在胶质瘤、正常脑组织中均有表达,在低分化胶质瘤中(Ⅲ～Ⅳ级16例)的表达高于高分化胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级28例,P<0.05);在高分化胶质瘤组和低分化胶质瘤组的表达均高于正常脑组织组(12例,P<0.05)。结论LMO3基因的表达水平与胶质瘤的分化程度相关。

LMO3与肿瘤关系研究进展

LIM蛋白是以新杆状钱虫LIN11,ISL1和MEC3蛋白命名的含有UM结构域的蛋白,其作为一种转录调节因子在胚胎发育、肿瘤发生等过程中发挥作用.LIM结构域的典型特征为含有高度保守的半胱氨酸组成的锌指结构,且存在CX2CX17-19HX2CX2CX16-20CX2C/H/D的高度保守序列。

LMO3蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的观察LMO3蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化两步法检测44例人脑胶质瘤患者与12例正常脑组织中LMO3蛋白的表达。结果LMO3蛋白在人脑胶质瘤、正常脑组织中均有表达，表达强度随恶性程度的增高而增高，差异有统计学意义（χ^2=15．402，P〈0．05）。Spearman等级相关检验证实LMO3蛋白的表达强度与胶质瘤的恶性程度呈正相关（r=0．485。P〈0．05）。结论LMO3蛋白在人脑胶质瘤及正常脑组织中均有表达，其表达水平与胶质瘤的分化程度相关。

癌基因LMO3的原核表达及多克隆抗体的制备及应用

目的:制备抗神经特异性表达的癌基因LMO3的多克隆抗体,进行LMO3分子检测和功能研究。方法:采用RT-PCR方法扩增LMO3的基因序列,构建其原核表达载体pET32a-LMO3。在大肠埃希菌中诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE分离纯化原核表达的融合蛋白,PBS溶解聚丙烯酰胺凝胶颗粒中的融合蛋白,乳化后免疫新西兰兔制备多克隆抗体。采用免疫印迹、免疫组化等对该抗体的特异性进行鉴定。结果:构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实序列正确。经诱导表达在相对分子质量为37×103处有一条明显的蛋白条带,与预期值一致;免疫动物所得抗血清效价为1∶16 000,该抗体能够识别原核表达的LMO3蛋白及细胞内源性表达的LMO3蛋白;免疫组化显示,LMO3在SHG44胶质瘤细胞株及脑胶质瘤组织中均有表达。结论:制备了能识别天然LMO3分子的抗LMO3的多克隆抗体,为检测LMO3分子的表达和进一步研究其功能提供了有力的工具。

LMO3逆转录病毒表达载体的构建及其对SK-N-AS细胞增殖的影响

目的构建包含LM03（LIM-only3，LM03）全长基因的逆转录病毒表达载体，感染人神经母细胞瘤SK-N-AS，检测LM03对SK-N-AS细胞增殖的影响。方法将质粒pEGFP-Cl-一LM03经EcoRI和BamHI双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN，构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-LMO3，导人包装细胞pA317，获得逆转录病毒颗粒，感染SK-N-AS细胞，用RT-PCR及Western印迹鉴定，检测LM03感染后细胞的增殖及细胞周期分布情况。结果获得了能正确表达LM03基因的重组逆转录病毒表达载体pLX-SN-LMO3；LM03基因被逆转录病毒成功导入SK-N-AS细胞后，与对照组细胞相比，LM03感染组G1／G1期细胞减少，S期细胞增加，感染48h后，LM03感染组细胞的增殖能力显著高于空载体对照组及SK-N．AS组（P〈0．05）。结论成功构建了LM03基因的逆转录病毒表达载体，LMO3可以通过促进SK-N-AS细胞由G0／G1期进入S期，从而促进细胞的增殖。

LMO3在肿瘤转移中的机制

LIM结构域蛋白是一大类在人类癌症中十分关键的蛋白分子。其家族中的一员LIM结构域蛋白3(LMO3)参与了数种肿瘤的发病或进展,包括神经母细胞瘤、神经胶质瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌等。LMO3通过与神经系统特异性转录因子2等互相作用、受上游基因或miRNA调节及作用于下游各种信号通路来调节基因表达程序而起作用。通过这些活动,LMO3基因以及其编码的蛋白在与癌症相关的过程中起重要作用,这些功能使它们在肿瘤的靶向治疗中具有巨大潜力,本文重点研究LMO3在肝瘤发生、发展、转移过程中的分子机制以及最新进展。

原癌基因LMO3相互作用蛋白的筛选及鉴定

目的 通过筛选LMO3的相互作用蛋白，进一步了解LMO3的作用及可能机制。方法酵母双杂交方法筛选LMO3相瓦作用蛋白，并通过酵母结合试验、免疫共沉淀及荧光共定位等进行验证。结果在初步获得相互作用蛋白：钙-整合素结合蛋白（Calcium—and integrin—binding protein，CIB）的基础上，在酵母中证实了LMO3与CIB的相互作用，并通过酵母结合试验确定了CIB与LMO3的相互作用位点，发现CIB可与LMO3的第一个LIM结构域（LIMI）及全长LMO3结合，免疫共沉淀试验确证了它们可以在真核细胞内结合，荧光共定位表明与CIB的相互作用可使LMO3在C8细胞中的定位由细胞核移到细胞质。结论LMO3可以与CIB在真核细胞中发生相互作用，提示LMO3可能通过与CIB的相互作用参与细胞相关功能的调节。