LMP-1 mRNA反义寡核苷酸抑制大鼠成骨细胞的分化

为深入探讨LIM矿化蛋白 1(LMP 1)在成骨细胞分化中的作用 ,体外培养大鼠成骨细胞 ,在培养基中加入LMP 1反义寡核苷酸 (LMP 1antisense终浓度为 0 8mol L) ,以阻断大鼠成骨细胞中LMP 1mRNA的表达。对照组加nonsense(终浓度为 0 8mol L)。测定细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活性、培养基中骨钙素 (OC)的含量 ,免疫组化分析Ⅰ型胶原蛋白的表达 ,Northernblotting检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果显示 :LMP 1mRNA被LMP 1antisense阻断后 ,ALP活性降低、OC分泌减少、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达下降。上述结果表明 :LMP 1mRNA被LMP 1反义寡核苷酸阻断后 ,成骨细胞分化受到明显的抑制 ,提示LMP 1是成骨细胞分化必不可少的正调节因子。

EB病毒LMP-1上调鼻咽癌细胞系AP-1的活性

为了探讨 EB病毒潜伏膜蛋白 1 ( LMP- 1 )通过信号传导途径介导的致瘤分子机制 ,由此首先构建了 AP- 1报告基因 ,用佛波酯诱导确定了其报道 AP- 1的功能 ;通过建立荧光素酶双报道系统 ,研究了 LMP- 1表达对 AP- 1和 NFκB活性的影响 .研究发现 :在 LMP- 1阴性鼻咽癌 ( NPC)细胞系 ,导入 LMP- 1表达质粒后 ,AP- 1和 NFκB的活性均升高 4～ 5倍 ;而在 LMP- 1阳性 NPC细胞系中 ,当导入 LMP- 1反义表达质粒 ,AP- 1和 NFκB的活性则受抑制 ,活性下调 3～ 4倍 .结果表明 ,LMP- 1能上调 NPC细胞系 AP- 1的活性 ,同时再次证实了 LMP- 1能活化 NFκB.

EB病毒LMP-1在鼻咽癌细胞中通过JNK介导AP-1活化

EB病毒潜伏膜蛋白 1 (latentmembraneprotein 1 ,LMP 1 )活化激活蛋白 1 (activatorprotein 1 ,AP 1 )信号传导途径与其致瘤作用密切相关 .为了探讨LMP 1活化AP 1信号传导的分子机制 ,在可诱导调控LMP 1表达的鼻咽癌细胞系L7中 ,首先通过荧光酶双报道系统确定了LMP 1表达能激活AP 1 ;在此基础上 ,用c JunPathDetect系统确定LMP 1表达活化AP 1是通过c Jun的磷酸化 (活化 )介导 .虽然LMP 1不能上调c Jun上游主要调节激酶c JunN端激酶 (c JunN terminalkinase ,JNK)的蛋白表达 ,但能显著促进JNK的磷酸化 (活化 ) ;在L7细胞中导入JNK相互作用蛋白 (JNK interactingprotein ,JIP)基因 ,抑制JNK的核移位能显著抑制LMP 1诱导的AP 1活化 ,同时对NFкВ活化也有部分抑制作用 .结果表明 ,EB病毒LMP 1在鼻咽癌细胞中通过JNK介导AP

LMP-1基因慢病毒载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞的表达

目的:构建人LMP-1重组慢病毒载体,体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,检测LMP-1基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达。方法:利用PCR法从cDNA文库中钓取LMP-1基因,将其与经AgeⅠ酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU-EGFP相连接,转化感受态大肠杆菌,筛选出阳性克隆pGC-FU-LMP-1-EGFP,基因测序对其鉴定。经293T细胞包装后,收集富含病毒颗粒LV-LMP-1-EGFP的细胞上清,浓缩并标定滴度,RT-PCR检测并鉴定。以最佳MOI值体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察转染是否成功,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot检测转染细胞LMP-1基因的表达。结果:①基因测序及RT-PCR检测证实携带人LMP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装后获得滴度为2×108TU/ml的LV-LMP-1-EGFP。②以MOI=100转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达,转染效率可达93.5%,经RT-PCR与Western blot检测,被转染细胞内有LMP-1基因表达。结论:成功构建携带人LMP-1基因的慢病毒载体,可高效转染大鼠骨髓间充质干细胞,被转染细胞可高效表达LMP-1基因。

T-cadherin和LMP-1在鼻咽癌中的表达及相关性研究

目的检测鼻咽癌组织中T-cadherin和LMP-1的表达情况,探讨两者的相关性及T-cadherin与鼻咽癌临床病理特征的关系.方法采用免疫组化SP法检测50例鼻咽癌组织和20例鼻咽炎症组织中T-cadherin及LMP-1表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 T-cadherin在鼻咽炎症组织阳性表达率为100%(20/20),而在鼻咽癌组织中的阳性表达率仅为40%(20/50).经χ2检验两者差异有显著性意义(P<0.01).LMP-1在鼻咽癌组织中阳性表达率为64.0%(32/50),而在鼻咽炎症组织阳性表达率为20.0%(4/20).经χ2检验两者差异有显著意义(P<0.01).Spearman相关分析显示鼻咽癌组织中LMP-1与T-cadherin的表达呈负相关.T-cadherin在鼻咽癌组织中的表达情况与TNM分期和颈淋巴结转移负相关.T-cadherin在鼻咽癌组织中的表达情况与患者年龄、性别、肿瘤瘤体直径大小等因素无显著相关.结论在鼻咽癌组织中存在T-cadherin的表达缺失或低水平表达,与LMP-1在鼻咽癌组织中异常高表达呈负相关,提示T-cadherin和LMP-1在鼻咽癌的发生、发展和转移中起着重要的作用.

EB病毒膜潜伏蛋白LMP-1筛选鼻咽癌的初步结果

背景与目的:早期诊断鼻咽癌是提高疗效的重要途径,而目前临床上用于鼻咽癌早期诊断的指标存在灵敏度及特异度不理想的问题,EB病毒膜潜伏蛋白LMP-1是目前被证实的具有转化功能的蛋白质之一,本研究旨在探讨LMP-1作为鼻咽癌筛选指标的价值。方法:收集2007—2008年期间以耳鼻咽喉症状到福建省肿瘤医院放疗科就诊并同意参加本试验的患者300例,利用鼻咽拭子法取鼻咽部黏膜脱落细胞,提取DNA,聚合酶链反应法(PCR法)检测LMP-1基因的表达,所有入组患者均行鼻咽组织病理活检明确诊断。结果:300份鼻咽拭子标本提取了有效DNA样本数243份,合格率81%。非鼻咽癌的患者及健康者中,LMP-1的阳性表达率为3.70%(4/108),明显低于鼻咽癌患者(P<0.05)。LMP-1诊断鼻咽癌的灵敏度为88.15%(119/135),特异度为96.30%(104/108),阳性预测值为96.75%(119/123),阴性预测值为86.67%(104/120),正确率为91.77%,Youden指数为84.45%。结论:利用PCR法检测鼻咽拭子中鼻咽黏膜脱落细胞EB病毒膜潜伏蛋白LMP-1的表达作为鼻咽癌筛选的指标可重复性好,具有较高的灵敏度和特异度,适合作为高危人群的筛查指标。

鼻咽癌细胞凋亡与细胞毒淋巴细胞和LMP-1表达之间的关系

目的 :探讨鼻咽癌细胞凋亡与肿瘤内细胞毒淋巴细胞和LMP 1表达之间的关系。方法 :收集未经治疗的鼻咽癌活检组织 38例 ,采用TUNEL法定量检测鼻咽癌细胞凋亡程度 ,用免疫组化法检测肿瘤细胞LMP 1表达情况和肿瘤内TIA 1+细胞毒淋巴细胞数。结果 :(1) 38例鼻咽癌组织学分为角化性鳞癌 7例 ,非角化性癌 8例 ,未分化癌 2 3例。平均凋亡指数分别为72 3、74 6和 30 7。角化性鳞癌和非角化性癌与未分化癌相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;(2 ) 38例中LMP 1阳性病例 19例 ,占 5 0 %。除外角化性鳞癌后 ,LMP 1阳性组平均凋亡指数为 5 1 7,高于LMP 1阴性组的 37 3,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;(3)每 10 0 0个癌细胞范围内浸润的TIA 1+细胞数为 3～ 75个 ;在角化性鳞癌中平均 12 ,低于非角化性癌和未分化癌 (平均2 1 4) ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;除外角化性鳞癌后 ,TIA 1+细胞数多者凋亡指数较高 (r =0 40 47,P <0 0 5 )。结论∶(1)鼻咽癌细胞凋亡程度在不同组织学类型中差异有显著性 ;(2 )鼻咽癌组织内TIA 1+细胞数在不同的组织学类型中有差别 ;(3)非角化性鼻咽癌组织中 ,LMP 1阳性者凋亡指数高 ,TIA 1+细胞数多者凋亡指数高。说明细胞毒淋巴细胞和LMP 1的表达具有促进鼻咽癌细胞凋亡的作用。

MMP-9、LMP-1在鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及意义

目的通过检测鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、潜伏膜蛋白-1(LMP-1)蛋白的表达及分布情况,探讨两者间的相互关系,为临床治疗和预后判断提供依据。方法采用免疫组化S-P法检测20例鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中MMP-9、LMP-1的表达情况,同时与组织芯片中其他类型淋巴瘤及10例淋巴组织反应性增生进行比较。结果鼻NK/T细胞淋巴瘤组中MMP-9、LMP-1阳性表达率分别为90.0%(18/20)和45.0%(9/20);组织芯片包含的B细胞淋巴瘤组及外周T细胞淋巴瘤组MMP-9的阳性表达率分别为61.1%(11/18)、50.0%(6/12),LMP-1的阳性表达率分别为11.1%(2/18)、25.0%(3/12)。淋巴组织反应性增生组未见LMP-1的阳性表达,MMP-9的阳性表达率为30.0%(3/10)。鼻NK/T细胞淋巴瘤组MMP-9、LMP-1阳性表达率与淋巴组织反应性增生组比较差异有统计学意义(P<0.05),MMP-9与LMP-1表达呈正相关(r=0.327,P<0.05)。结论MMP-9在鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中存在高表达,与EB病毒感染关系密切,LMP-1能上调MMP-9表达,可能与鼻NK/T细胞淋巴瘤的高度侵袭性有关。

EB病毒LMP-1筛查鼻咽癌的诊断效果分析

鼻咽癌传统检査主要依赖于鼻咽镜检查或病变组织取样进行病理学检查,由于上述检查均具有侵袭性,且部分患者需反复取样活检,故不是鼻咽癌筛查和诊断的理想手段。因此,有必要寻找能够早期筛查鼻咽癌的简便方法,为临床早诊断、早治疗提供依据。

EB病毒转化淋巴母细胞LMP-1,LMP-2A及LMP-2B的表达

目的了解EB病毒转化淋巴母细胞LMP-1,LMP-2A,LMP-2B基因的表达改变。方法采用实时定量PCR方法分别检测并比较同一献血员来源的正常人淋巴细胞与EBV转化淋巴母细胞前后LMP基因(LMP-1、LMP-2A、LMP-2B)的表达改变。采用Western bolt检测LMP-1蛋白表达。结果 LMP-1、LMP-2A、LMP-2B基因在转化淋巴母细胞比在正常人淋巴细胞的表达分别上调863倍、1 763倍、90 078倍。Western bolt检测LMP-1蛋白在转化淋巴母细胞中的表达比正常人淋巴细胞明显增强。结论在EBV转化淋巴母细胞过程中LMP-1、LMP-2A和LMP-2B表达均上调。

EBER1/2、LMP-1在NK/T细胞淋巴瘤中的表达

目的 探讨NK /T细胞淋巴瘤与EB病毒 (EBV )的关系。方法 收集 2 6例NK /T细胞淋巴瘤 (淋巴结内 10例 ,淋巴结外 16例 ) ,采用免疫组织化学S P法确定瘤细胞本质 ,用原位杂交法检测EBV编码的RNA (EBER 1/2 )。结果 ①在 2 6例NK /T细胞淋巴瘤中 ,EBER1/2检出率为 46 .2 % (12 /2 6 ) ,其中淋巴结内检出率为 10 .0 % (1/10 ) ,淋巴结外检出率为 6 8.8% (11/16 ) ,2组比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。②在淋巴结外NK/T细胞淋巴瘤中 ,EBER 1/2在鼻腔检出率为 90 .0 % (9/10 ) ,其它部位为 33 .3 % (2 /6 ) ,2组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。③EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP 1)在EBER1/2阳性病例中的检出率为16 .7% (2 /12 )。结论 EBV在NK /T细胞淋巴瘤的发生中有一定作用 ,并具有部位依赖性的特点 ;EBV在NK /T细胞淋巴瘤中的潜伏感染模式不完全一致。

EB病毒潜伏膜蛋白LMP-1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的观察EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)在鼻咽癌(NPC)鼻咽拭子中的表达,探讨LMP-1表达与NPC临床病理特征的关系。方法纳入2007年～2008年福建省肿瘤医院放疗科收治的经病理检查确诊为NPC且同意参加该试验的初治患者129例,均在治疗前应用鼻咽拭子法取鼻咽部黏膜脱落细胞,提取DNA,采用PCR法检测LMP-1基因的表达。结果 129例患者中有114例患者LMP-1呈阳性表达,另15例呈阴性表达,阳性率为88.37%(114/129);对照组中无1例呈阳性表达。LMP-1阳性表达率有颈部淋巴结转移组明显高于无颈部淋巴结转移组。LMP-1表达与患者年龄、性别、临床分期、T分期及M分期无相关性。结论 PCR法检测鼻咽拭子中LMP-1的检出率高于免疫组化法,LMP-1表达与鼻咽癌患者颈部淋巴结转移密切相关,临床中可预测鼻咽癌患者的转移潜能,LMP-1可能做为抗肿瘤转移靶向治疗的潜在靶点。

LMP-1转染人胎盘源间充质干细胞前后蛋白质组学研究

目的:采用蛋白质组学技术检测LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)转染人胎盘源间充质干细胞(Human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPDMSCs)前后蛋白质组学改变。方法:提取hPDMSCs LMP-1和hPDMSCsvector细胞总蛋白,通过二维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)制备两组细胞的二维电泳图谱,并用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异表达的蛋白质点,并用基质辅助激光解吸粒子-飞行时间电离质谱(matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析技术对这些差异表达的蛋白质点进行鉴定,并选取6个与成骨相关的蛋白(PCNA,vimentin,annexin A1,annexin A2,eEF2和peroxiredoxin-1)作为验证对象,蛋白质印迹法检测各蛋白在两组细胞中的表达水平。结果:采用2-DE技术建立了hPDMSCsLMP-1和hPDMSCsvector两组细胞的二维电泳图谱;PDQuest软件分析图像发现两组细胞有22个差异蛋白质点,采用MALDI-TOF-MS质谱初步鉴定出15个蛋白质点,其中表达上调9个,下调6个。Western blot检测结果与蛋白质组学一致。结论:LMP-1基因转染hPDMSCs后共筛选获得15个差异表达的蛋白,它们是成骨分化潜在的重要参与者,为进一步阐明LMP-1对hPDMSCs细胞功能和成骨分化影响的分子机制奠定基础。

儿童非霍奇金淋巴瘤EB病毒LMP-1和P^(53)、bcl-2表达的关系

目的 探讨儿童NHL EB病毒LMP-1和P^(53)、bcl-2蛋白的表达及关系。方法 采用免疫组化Envision法检测64例儿童NHL中LMP-1和P^(53)、bcl-2蛋白。结果(1)P^(53)蛋白阳性表达39例(60.9％),表达强度与淋巴瘤恶性程度呈正相关;阳性表达率在低恶组与中、高恶性组间有显著性意义,P<0.01。bcl-2蛋白阳性表达37例(53.8％),bcl高于TCL,低恶性高于高恶性。(2)LMP-1蛋白阳性表达45例(70.3％),阳性表达率与肿瘤恶性程度和年龄有统计学意义,P<0.01;而与淋巴瘤免疫表型、性别和发病部位无关。LMP-1表达与P^(53)及bcl-2的表达呈正相关。结论 EBV感染是儿童NHL发生发展不可忽视的病毒致病因素,其致病作用可能是通过上调P^(53)、bcl-2蛋白实现的。

LMP-1与CXCR4在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨LMP-1、CXCR4在鼻咽癌中的表达、相关性和临床意义。方法应用免疫组化检测LMP-1及CXCR4在66例鼻咽癌组织中的表达,分析其与患者临床特点及预后的关系,并探讨两者间的关系。结果LMP-1和CXCR4阳性表达率分别为75.76%和98.48%。LMP1与CXCR4表达无相关性。CXCR4表达与临床病理因素、预后均无关。LMP-1表达与患者N分期、颈部转移淋巴结体积和有无远处转移有关(P<0.05)。生存分析发现:LMP-1是影响鼻咽癌患者总生存、无进展生存和无远处转移生存的预后因素,LMP-1阳性的鼻咽癌患者预后差。结论LMP-1可作为预测鼻咽癌远处转移的重要分子标志物。CXCR4在鼻咽癌中的价值有待进一步探讨。

LMP-1基因与椎间盘退变

细胞内信号转导分子LIM矿化蛋白-1(LMP-1)基因是近年证实与椎间盘退变相关的基因之一,其表达产物为一种细胞内非分泌性骨诱导蛋白。它可通过调节各种细胞因子的生成和其他相关基因的表达,来实现其所诱导的透明样基质的合成增加。研究证明LMP-1基因在椎间盘细胞过度表达,以及通过骨形态发生蛋白介导机制,在体内外条件下均可增加蛋白聚糖、硫酸氨基葡聚糖及Ⅱ型胶原的合成,从而减缓甚至逆转椎间盘细胞的退化。

LMP-1、EBNA-2在滤泡上皮起源甲状腺肿瘤中的表达及意义

目的研究EB病毒LMP-1、EBNA-2在滤泡上皮起源甲状腺肿瘤中的意义。方法应用Envision二步免疫组织化学方法检测LMP-1、EBNA-2在30例甲状腺乳头状癌、11例甲状腺滤泡癌、3例甲状腺未分化癌、9例滤泡腺瘤及5例桥本甲状腺炎中的表达。结果甲状腺肿瘤中LMP-1与EBNA-2表达均主要位于细胞质,偶见于细胞核,癌旁甲状腺组织为阴性;LMP-1和EBNA-2在甲状腺癌和滤泡腺瘤、乳头状癌和滤泡癌的表达差异均无统计学意义(P>0.05);LMP-1与EBNA-2在甲状腺乳头状癌和滤泡癌的表达无相关性。结论推测部分甲状腺癌的发生及演变可能与EBV感染有关,两者的关系还有待于进一步研究和探讨。

甲状腺肿瘤ras-p21及EBV/LMP-1的表达及意义

目的 :研究ras癌基因及EBV感染在甲状腺癌中的意义。方法 :应用SABC免疫组化法对88例甲状腺肿瘤 (乳头状癌 34例 ,滤泡性癌 17例 ,髓样癌 5例 ,未分化癌 8例 ,腺瘤 2 4例 )进行研究 ,观察ras癌基因蛋白产物p2 1及EBVLMP 1的表达情况。 结果 :甲状腺癌 p2 1的表达与甲状腺肿瘤良恶性有关 ,甲状腺癌 p2 1阳性率 ( 62 5% )明显高于甲状腺腺瘤 ( 33 3% ) (P <0 0 5)。甲状腺癌 p2 1与组织学分型无关。LMP 1在甲状腺癌中的表达率为 15 6% ,癌周组织无表达。结论 :ras癌基因突变为甲状腺癌发生中的早期事件 ,p2 1检测可作为甲状腺滤泡性肿瘤良恶性鉴别的辅助指标 ,提示EBV感染与甲状腺癌的发生有关。

EB病毒编码LMP-1在鼻咽癌中的致瘤机制

EB病毒的基因产物中LMP-1是最主要的转化蛋白,其致瘤作用日益受到人们的重视。本文论述了EB病毒编码的LMP-1的结构、致瘤机制,以及临床上检测LMP-1对鼻咽癌诊断的意义。