我国北方地区鼻咽癌患者EB病毒LMP1基因缺失分析

为研究我国北方地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者Epstein Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)基因C端区缺失状况,探讨其在鼻咽癌发生中所起的作用。收集我国东北地区鼻咽癌石蜡组织22例,非鼻咽癌患者外周血26例,提取DNA后,采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增LMP1基因的C末端,对其中有缺失的4例鼻咽癌进行了克隆和序列分析。结果显示:22例鼻咽癌组织标本中,有19例扩增出特异性条带,阳性率为86%。其中8例存在缺失,缺失率42%。取4例缺失样品进行序列分析,并与B95-8原型LMP1做比较,结果显示:4例鼻咽癌样品均存在30个碱基的缺失和某些位点的单点突变,并由此引起所编码的氨基酸改变。26例非鼻咽癌患者LMP1阳性扩增率为92 31%,无一例缺失。此结果表明:与广东、广西鼻咽癌高发区相比,我国北方地区鼻咽癌与非鼻咽癌患者中EB病毒LMP1基因缺失型和原型的分布有明显的地区差异。

ubr1基因缺失对粟酒裂殖酵母有丝分裂动力学的影响

为探究粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中ubr1基因缺失后有丝分裂动力学的变化情况,采用荧光蛋白标记和活细胞成像技术分析ubr1基因缺失型(ubr1Δ)菌株和野生型(WT)菌株细胞形态和有丝分裂期的细胞动力学差异。结果显示,ubr1基因缺失后细胞长宽比变小,微管束数目增多,细胞形态出现短棒状和梨形。有丝分裂过程中18.5%的ubr1Δ菌株会错误形成双动粒,且有丝分裂后期纺锤体伸长长度较野生型菌株增加(1.58±0.76)μm,有丝分裂后期持续时间较野生型菌株延长(3.00±1.36)min。有丝分裂末期纺锤体出现鱼钩型和S型断裂,且纺锤体断裂延迟。同时,ubr1Δ菌株与野生型菌株相比肌动蛋白环初始直径增加(1.12±0.19)μm,形成时间延长(3.60±2.85)min,收缩时间延长(4.90±0.21)min,但收缩速度并无明显差异。研究结果可为明确ubr1基因在有丝分裂中的功能及分子机制提供科学依据。

EB病毒LMP1基因C端区缺失突变与肿瘤发生相关性的Meta分析

目的探讨Epstein-Barr(EB)病毒LMP1基因C端区缺失突变与肿瘤发生的关系。方法通过计算机检索Cochrane Library、PubMed、EMBASE、中文期刊全文数据库、维普中文科技期刊数据库、中国知网全文数据库(CNKI)等数据库中发表于1995年1月～2012年5月的与EB病毒LMP1 30 bp缺失相关的文献,根据文献纳入标准提取相关数据。采用Stata 11.0软件进行Meta分析,计数资料采用OR及95%CI表示,对病例组、对照组LMP1基因C端区30 bp缺失进行分析。各组中研究异质性无统计学意义(P≥0.1)时采用固定效应模式分析,否则采用随机模式分析。结果纳入针对EB病毒LMP1基因C端区缺失突变的文献共13篇。通过对纳入的文献进行Meta分析发现,LMP1 30 bp缺失与肿瘤发生相关,95%CI为2.88(1.29～6.41),合并统计值Z=2.59,P=0.01。结论 EB病毒LMP1基因C端区的缺失突变与肿瘤发生存在相关性。

1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析

为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。

马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建

为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。

应用18对引物对DMD患者基因缺失分析

进行性肌营养不良症（Ｄｕｃｈｅｎｎｅｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｙ），是一种较常见的Ｘ－连锁隐性遗传致死性疾病。本文采用１８对引物－Ａ、Ｂ两套ＰＣＲ多重反应体系，对我院３７例ＤＭＤ患者进行基因缺失检测，其中有１９例患者不同区域的缺失。其中有２例患者，虽无亲缘关系但缺失的外显子完全相同，无法确定，有待对其家系应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ的方法进一步确定其缺失区域。其中１３／１７例缺失４５－５２号外显子，８／１３例均有４８号外显子的缺失，与国内外文献报道完全一致。在这１９例缺失患者中，有１例患者原先用６对引物只检测出３个外显子的缺失，经用１８对引物后检测为１２－４４外显子的缺失。另１例患者应用６对引物未检测出缺失，经用１８对引物后检测出了和４４号外显子的缺失。从这两个病例可以看出，应用１８对引物可以更准确地检测出缺失患者，使检测缺失率达到９８％以上。因此为ＤＭＤ患者的产前诊断提供更精确的依据。

荧光探针熔解曲线分析法快速检测SMN1基因纯合性缺失

目的建立一种快速检测SMN1基因纯合缺失的荧光探针熔解曲线分析方法。方法收集正常成人的外周血标本94份,经MLPA检测过的已知SMN1和SMN2基因拷贝数的样本238例。采用荧光探针熔解曲线分析技术,分别对SMN1基因c.840C>T和c.835-45G>A进行基因分型,根据基因分型结果判断是否存在SMN1基因exon7纯合缺失。对SMN1基因和SMN2基因拷贝数比值为2∶2、2∶0和0∶2基因型样本进行10倍梯度稀释,评估检测体系的敏感性。选取SMN1基因和SMN2基因拷贝数比值为2∶2、2∶0和0∶2基因型样本各8例,不同时间检测3次,用于评估检测体系的重复性。结果该方法可以方便地检测SMN1基因exon7纯合缺失,灵敏度至少为0.05ng基因组DNA。应用此方法检测94例正常成人样本,未发现SMN1基因exon7纯合缺失;对238例已知基因型样本进行检测,结果显示准确率为100%。结论荧光探针熔解曲线分析方法可以快速准确检测SMN1基因exon7纯合缺失,操作简单实用,适合大规模人群筛查和产前分子诊断。

半乳糖代谢酶uge1基因的缺失导致裂殖酵母有丝分裂中细胞动力学的变化

uge1基因编码一种参与半乳糖代谢的酶,对细胞生长和有性繁殖等有着重要作用.该文以裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)为材料,采用激光共聚焦活细胞成像的方式首次探究了uge1基因缺失对有丝分裂的分裂期染色体、纺锤体、肌动蛋白动力学的影响.对间期微管的观察结果显示,uge1Δ细胞中含有5根微管的细胞比例增加.有丝分裂期的染色体、纺锤体动力学结果表明,uge1基因缺失会导致染色体分离异常、单极纺锤体的出现、纺锤体从形成到解聚的时间显著增加.uge1基因缺失还会影响裂殖酵母有丝分裂前期和后期纺锤体伸长.纺锤体形成类型显示,uge1Δ细胞中“棒状”纺锤体的比例显著降低,而“点状”纺锤体比例则显著增加.uge1Δ细胞的形态相较野生型细胞有显著变化,表现为长度增加及长宽比增加.肌动蛋白动力学跟踪结果表明,uge1Δ细胞中肌动蛋白束长度、从聚合到解聚的时间、停留时间和收缩时间均显著增加,而肌动蛋白从聚合到解聚的速率显著降低.以上结果表明,uge1基因缺失会导致有丝分裂染色体、纺锤体及肌动蛋白动力学缺陷.

GSTT1和GSTM1基因缺失多态与胃癌易感性

目的 探讨与致癌物解毒有关的谷胱甘肽转硫酶 (GST) T1和 M1基因遗传缺失多态与胃癌易感性的关系。方法 采用病例对照分子流行病学研究方法 ,以 PCR技术对福建省福州市 92例胃癌病例和 92例正常对照者的 GSTT1和 GSTM1基因型进行检测。结果 GSTT1基因在胃癌病例和对照组中的缺失率分别为 5 3.3%和41.3% ,差异无显著性 (x2 =2 .6 4,P=0 .10 4)。而 GSTM1基因在胃癌病例和对照组中的缺失率分别为 6 9.6 %和5 2 .2 % ,差异具有显著性 (x2 =5 .84,P=0 .0 15 7)。携带 GSTM1(- )基因型者发生胃癌的危险性是携带 GSTM1(+)基因型者的 2 .1倍 (OR=2 .10 ,95 % CI=1.10～ 4.0 1)。联合分析表明 ,GSTT1和 GSTM1基因之间可能存在联合作用 ,携带 GSTT1(- )和 GSTM1(- )基因型者发生胃癌的危险性高于携带 GSTT1(+)和 GSTM1(+)基因型者 (OR=4.6 7,95 % CI=1.5 5～ 14.41)。结论

谷胱甘肽硫转移酶基因GSTM_1及GSTT_1缺失与肺癌发病关系的研究

在我国肺癌高发区云南省宣威市进行了一次１１配对的以人群为基础的病例对照研究。共收集８６例新发肺癌病人，并选择８６例与病例相同性别、相同燃料品种、年龄相差２岁以内的宣威居民作为对照。采集研究对象的口腔细胞做ＧＳＴＭ１及ＧＳＴＴ１基因型鉴定。结果发现肺癌组的ＧＳＴＭ１缺失率高于对照组，ＯＲ值为２．３９（９５％可信限：１．２５～４．５６）。多因素的条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析调整吸烟、慢性阻塞性肺部疾患（ＣＯＰＤ）、一生中无烟囱用煤吨数后，ＯＲ值为２．６２（９５％可信限１．３３～５．１５）。但没有发现ＧＳＴＴ１基因的缺失与肺癌的显著联系。

胃癌中p16基因表达、缺失及突变的检测

目的:研究p16基因表达与胃癌发生发展、侵袭、转移的关系及p16基因外显子2缺失、突变在胃癌发生中的地位。方法:运用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶SP免疫组织化学方法检测胃癌及癌前病变组织中p16蛋白的表达;采用聚合酶链反应PCR、聚合酶链反应-单链构象多态性PCRSSCP分析方法检测胃癌中p16基因外显子2的缺失、突变。结果:1p16蛋白表达阳性率:①正常胃粘膜96.25%77/80,不典型增生92.00%45/50,胃癌47.54%58/122,胃癌组中p16蛋白表达低于正常胃粘膜及不典型增生(P<0.05);②粘液腺癌10.00%,1/10低于低分化腺癌51.22%,21/41、未分化癌57.69%,15/26和印戒细胞癌62.50%,10/16(P<0.05);③30例原发癌和淋巴结转移癌配对标本中p16蛋白表达阳性率:原发癌46.67%(14/30),淋巴结转移癌16.67%5/30,淋巴结转移癌低于原发癌P<0.05;2p16基因缺失与突变分析:25例胃癌中检测出缺失5例但未发现突变。结论:①p16蛋白表达缺失与胃癌的发生、组织学类型及淋巴结转移有关。②p16基因外显子2缺失可能与胃癌发生有关而p16基因突变可能与胃癌发生无关。

乳腺癌MTS1/p16基因缺失及表达异常的初步研究

采用ＰＣＲ和免疫组化等方法对５１例乳腺肿瘤ＭＴＳ１／ｐ１６基因的缺失及表达异常情况进行了分析，结果显示，ＭＴＳ１／ｐ１６基因在乳腺癌中的阴性表达率为３２．６％（１５／４６），而其中６０％（９／１５）因纯合性缺失而无转录和表达产物，占总检测病例的１９．５％（９／４６）。ＭＴＳ１／ｐ１６基因缺失的病例多为淋巴结转移阳性，组织浸润程度高和分化程度低，提示ＭＴＳ１／ｐ１６基因的纯合性缺失与乳腺癌的发生发展及恶性程度密切相关。另外，在ｐ１６蛋白阴性表达的病例中除了基因的纯合性缺失造成的蛋白失表达外，还有４０％（６／１５）的病例有ＭＴＳ１／ｐ１６基因的扩增但没有表达产物，则可能是ＤＮＡ的异常甲基化，基因位移，点突变等其它基因变异作用的结果。

GSTT1、GSTM1基因缺失多态性与鼻咽癌的发病关系

目的:研究解毒酶GSTT1、GSTM1基因多态性与鼻咽癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR技术检测鼻咽癌组和对照组人群GSTM1和GSTT1基因。结果:GSTM1和GSTT1基因缺失率在鼻咽癌组分别为62.5%(50/80)和63.75%(51/80),对照组分别为44.44%(32/72)和40.27%(29/72),两组比较,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。多因素Logistic回归分析:吸烟及GSTT1缺乏与鼻咽癌的发生有关。结论:广西柳州地区鼻咽癌高发,当地人GSTM1和GSTT1缺失为遗传易感因素,联合环境致癌物作用,成为鼻咽癌主要原因之一。

1株NSP2蛋白5个氨基酸缺失的PRRSV遗传进化分析

【目的】研究新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况。【方法】提取PRRSV感染病猪肺脏RNA,通过RT-PCR方法对PRRSV NSP2部分基因和ORF5基因进行扩增、克隆和测序,分析其分子变异特征。【结果】成功克隆到1株PRRSV,命名为XJzx1株,其NSP2基因编码蛋白第472~476位存在5个氨基酸的连续缺失,有别于高致病毒株第482、533~561位30个氨基酸的典型缺失,位于经典毒株HB-2(sh)/2002第471~482位12个氨基酸缺失区域内;XJzx1与HK13株NSP2部分基因核苷酸序列相似性最高,为87.5%,系统进化树分析显示,XJzx1株与我国高致病毒株JXA1、HUN4、SX2009等同属一个分支;XJzx1 ORF5基因与我国经典毒株CH-1a、BJ-4、HK6等同属一个分支,其GP5蛋白不存在氨基酸的缺失或插入,而表现为多位点的突变。【结论】PRRSV XJzx1株具有独特的遗传进化特征,其毒性较经典毒株有所加强,推测为新型变异株。

鸭疫里默氏杆菌CH3株tonB1或tonB2基因缺失对生物被膜形成的影响

为探究鸭疫里默氏杆菌CH3株TonB1和TonB2蛋白对其生物被膜形成的影响,本研究采用自杀质粒同源重组的方法分别构建了tonB1和tonB2基因的缺失突变株CH3△tonB1和CH3△tonB2。同时将tonB1和tonB2基因ORF克隆于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达载体pRES中,构建回补株CH3△tonB1(pRES-TonB1)和CH3△tonB2(pRES-TonB2)。利用结晶紫染色法对野生株CH3、突变株CH3△tonB1和CH3△tonB2及其回补株的生物被膜进行测定。结果表明,与野生株CH3相比,突变株CH3△tonB1和CH3△tonB2生物被膜形成能力显著降低(p<0.05),而回补株CH3△tonB1(pRES-TonB1)和CH3△tonB2(pRES-TonB2)的生物被膜形成能力较突变株显著增强。本研究结果表明鸭疫里默氏杆菌的TonB1和TonB2蛋白与其生物被膜的形成相关。

GSTM1基因缺失多态与胃癌发病相关性研究

目的 :探讨 Mu类谷胱甘肽转移酶基因 (GSTM1基因 )缺失多态与胃癌发病的相关性。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对 99例经手术及活检病理证实的胃癌患者进行 GSTM1基因检测 ,结合国人 GSTM1基因缺失统计学分布的标准对照进行病例对照研究。结果 :胃癌组 GSTM1基因缺失率为 6 3.6 % ,明显高于对照组缺失率 5 1.1% (P <0 .0 5 )。按吸烟分层分析表明 ,胃癌组大量吸烟者的 GSTM1基因缺失率增高趋势更明显 ,达6 7.5 % ,但此差异缺乏统计学显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :GSTM1基因缺失多态与胃癌发病相关 ,该基因缺失可作为胃癌的宿主易感性标志之一。

人胃癌组织WAF1基因的缺失与不表达

探讨ＷＡＦ１与胃癌的关系，为胃癌基因治疗提供有价值的依据。方法３２例胃癌和３０例正常胃粘膜标本提取细胞ＤＮＡ、总ＲＮＡ，ＭＴＳ１ｃＤＮＡ探针采用随机引物法进行３２Ｐ－ｄＡＴＰ掺入标记，ＷＡＦ１与所提ＤＮＡ、ＲＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析，检测标本中有无ＷＡＦ１的缺失和ｍＲＮＡ的不表达。ｐ５３抗体与提取的蛋白质进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析，检测标本中有无ｐ５３的表达。结果ＷＡＦ１Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示，３２例胃癌标本ＷＡＦ１基因缺失率及ｍＲＮＡ不表达率分别为３４．４％和４０．６％，明显高于正常胃粘膜组。ＷＡＦ１基因缺失率及ｍＲＮＡ不表达与胃癌浸润的深度及分化程度有关，胃癌侵及肌层组ＷＡＦ１基因缺失及ｍＲＮＡ不表达率分别为５２．６％和５７．９％，胃癌未侵及肌层组分别为７．７％和１５．４％，高、中分化胃癌组ＷＡＦ１基因缺失及ｍＲＮＡ不表达率分别为７．１％和１４．３％，而低分化及印戒细胞胃癌组分别为５５．８％和６１．１％。结论胃癌的发生与ｐ５３失活及ＷＡＦ１ｍＲＮＡ不表达有关，胃癌组织中ｐ５３失活与ＷＡＦ１ｍＲＮＡ不表达关系密切。

胃癌与谷胱甘肽S-转移酶M1基因缺失相关性的研究

目的 探讨GSTM 1基因缺失与胃癌的关系。方法 应用PCR技术对皖南地区 88例汉族健康人和 32例胃癌患者的GSTM 1基因进行检测。结果 32例胃癌患者中GSTM1基因缺失者 2 5例 ,GSTM1 (- / - )基因型频率为 78.1 % ;88例健康人中GSTM1基因缺失者 50例 ,GSTM 1 (- / - )基因型频率为 56 .8% ,两组差异具有显著性 (χ2 =4.55 ,P <0 .0 5)。结论 GSTM

急性白血病MTS1/P^(16)基因缺失的研究

急性白血病是我国常见的造血系统恶性疾病。其病因及发病机理目前还不完全清楚,病毒、遗传因素及染色体异常与它的发生都有关系。现已证实,ＭＴＳ1/Ｐ16基因在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变[1,2],但有关ＭＴＳ1/Ｐ16基因在急性白血病中的研究国内报道少[3]。我?..

中国心肌梗死患者血管紧张素Ⅰ转换酶基因插入/缺失多态性Meta分析

目的 对中国人血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)基因内含子16插入(Ⅰ)/缺失(D)多态性与心肌梗死的关联性进行Meta分析。方法 以心肌梗死组和健康对照组基因型分布的比值比(OR)为统计量。全面检索到相关文献,剔除不符合要求的文献,排除发表偏倚的影响,应用REVMAN3.1软件对各研究结果进行一致性检验和采用相应的数学模型进行数据合并。结果 相关文献未发现显著发表偏倚,数据合并结果心肌梗死组和健康对照组DD/(ID+II)OR 2.33,95％可信区间(CI)1.65～3.29,(P<0.01),II/(ID+DD)OR 0.59,95％ CI 0.47～0.73,(P<0.01)。结论 中国人ACE I/D多态性与心肌梗死有关联,心肌梗死组DD基因型增多,II基因型减少。