层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析

目的利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基。方法采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能。结果同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点。点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段,合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成。结论成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基。所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能。