siRNA干扰降低ARK5或Gab2表达对LN-229细胞侵袭的影响及作用机制

目的探讨siRNA干扰降低ARK5或Gab2表达对LN-229细胞侵袭的影响及作用机制。方法采用小RNA干扰技术转染LN-229细胞株,并用Western blot分别检测转染前和瞬时转染后ARK5和Gab2蛋白表达。通过体外侵袭实验检测转染后侵袭能力的变化。ARK5或Gab2下降后明胶酶谱分别检测MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 转染ARK5,Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称SiARK5/LN-229,SiGab2/LN-229和SCR/LN-229。转染后,与SCR/LN-229及LN-229相比,SiARK5/LN-229中ARK5蛋白表达降低,SiGab2/LN-229中Gab2蛋白表达降低。ARK5或Gab2降低的LN-229细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量均比SCR/LN-229少(P<0.01)。与SCR/LN-229细胞相比,SiARK5/LN-229和SiGab2/LN-229中MMP-2,MMP-9蛋白表达均降低。结论 应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2的表达使LN-229细胞侵袭力降低,同时MMP-2和MMP-9表达降低,提示ARK5和Gab2表达降低可通过调节MMP-2和MMP-9的表达影响LN-229细胞的侵袭。

Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究

目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。