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基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术的药用黄精掺伪研究
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作者 王多梅 胡冲 +4 位作者 蒲婧哲 陈灵丽 杨建波 张亚中 张文娟 《中国现代中药》 CAS 2024年第3期457-462,共6页
目的:建立一种快速、灵敏、有效的实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,用于检测湖北黄精掺伪药用黄精。方法:基于锁核酸(LNA)-TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,利用不同基原药用黄精样品的叶绿体DNA中trnC-petN基因序列差异,根据常见... 目的:建立一种快速、灵敏、有效的实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,用于检测湖北黄精掺伪药用黄精。方法:基于锁核酸(LNA)-TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,利用不同基原药用黄精样品的叶绿体DNA中trnC-petN基因序列差异,根据常见混伪品湖北黄精特异性差异位点设计筛选探针引物,并对引物及LNA-TaqMan探针的特异性进行验证。根据扩增曲线临界循环数(Ct)值的差值计算湖北黄精掺伪比例。结果:基于LNA-TaqMan探针能够特异性地检测出湖北黄精并确定掺伪比例,在湖北黄精掺伪1%时,仍可稳定检出。结论:该方法简便准确、稳定可靠,可以用于药用黄精掺伪湖北黄精定量检测。 展开更多
关键词 湖北黄精 锁核酸-TaqMan探针 实时荧光定量聚合酶链式反应 掺伪 鉴定
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TaqMan-LNA探针荧光定量PCR快速检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒 被引量:6
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作者 韦信贤 童桂香 +5 位作者 谢宗升 吴祥庆 黄国秋 黄玉柳 廖永志 黎小正 《南方农业学报》 CAS CSCD 2011年第12期1545-1549,共5页
【目的】建立快速、特异、灵敏检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的TaqMan-LNA探针荧光定量PCR方法,为IHHNV的临床诊断和疫情监测提供更简便的检测技术。【方法】根据GenBank已发表的IHHNV毒株序列,在IHHNV保守区序列设计特... 【目的】建立快速、特异、灵敏检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的TaqMan-LNA探针荧光定量PCR方法,为IHHNV的临床诊断和疫情监测提供更简便的检测技术。【方法】根据GenBank已发表的IHHNV毒株序列,在IHHNV保守区序列设计特异性引物和TaqMan-LNA探针;对荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性和灵敏度;应用TaqMan-LNA探针荧光定量PCR对广西地区的300份凡纳滨对虾样品进行检测,验证方法的实用性。【结果】TaqMan-LNA探针荧光定量PCR检测IHHNV的灵敏度高,约为10个病毒粒子/反应,定量范围宽,在1.6×101~1.6×108拷贝/μL的范围内具良好的线性关系;与SPF凡纳滨对虾组织、WSSV、副溶血弧菌的DNA和TSV的RNA均无反应,特异性好;组内变异系数为0.53%~1.75%,组间变异系数为0.81%~1.14%,重复性和重现性均较好,结果稳定可靠;临床应用结果表明,300份凡纳滨对虾样品检出193份阳性,阳性率为64.3%,表明广西沿海地区养殖的凡纳滨对虾IHHNV感染率较高。【结论】利用TaqMan-LNA探针建立检测IHHNV的荧光定量PCR方法具有快速、特异、灵敏、重复性好、能定量等优点,可用于对虾IHHNV的检测。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) TaqMan-lna探针 荧光定量PCR
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检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立 被引量:6
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作者 茅凌翔 徐岚 +7 位作者 葛琴娟 鲍务新 杨静 吴斌 陈建国 徐顺高 黄新祥 许化溪 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期327-329,共3页
目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方... 目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到102拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%~2.02%和0.89%~2.13%。结论本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。 展开更多
关键词 TaqMan-lna探针 多重荧光定量RT-PCR 肠道病毒71型(EV71) 肠道病毒通用型(EV-U) 手足口病
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应用LNA-TaqMan探针实时荧光PCR检测大米制品中转基因成分 被引量:3
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作者 潘广 章桂明 +4 位作者 陈枝楠 程颖慧 向才玉 包先雨 凌杏园 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期211-215,共5页
大米制品中痕量转基因成分的检测需要特异和超灵敏的检测方法。本研究以行业标准中转基因大米筛查位点Ca MV35S启动子、NOS终止子和Cry1A基因为目标,利用在常规Taq Man探针中掺入锁核苷酸提高探针退火温度和杂交特异性等特点,经比较以... 大米制品中痕量转基因成分的检测需要特异和超灵敏的检测方法。本研究以行业标准中转基因大米筛查位点Ca MV35S启动子、NOS终止子和Cry1A基因为目标,利用在常规Taq Man探针中掺入锁核苷酸提高探针退火温度和杂交特异性等特点,经比较以上位点不同LNA-Taq Man探针实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测效果,建立了针对上述筛查位点的基于LNA-Taq Man探针的新型实时荧光PCR检测方法。该方法特异性强,检测灵敏度超高;与普通Taq Man实时荧光PCR方法相比,其反应Ct值可提前1~3个循环(Cry1A位点除外),检测低限可达3 pg。该检测方法可以用以检测大米制品中常规实时荧光PCR难以检测到的痕量转基因大米成分。 展开更多
关键词 大米制品 锁核酸 锁核酸探针 实时荧光PCR
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猪伪狂犬病病毒野毒LNA探针real-time PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 李艳 楚品品 +7 位作者 雷雯 勾红潮 蒋智勇 蔡汝健 宋帅 卞志标 杨东霞 李春玲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第1期36-41,共6页
本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计特异性引物和LNA-TaqMan探针,建立了基于LNA-TaqMan探针的猪伪狂犬病病毒野毒株荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株;灵敏度更高,最低检测... 本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计特异性引物和LNA-TaqMan探针,建立了基于LNA-TaqMan探针的猪伪狂犬病病毒野毒株荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株;灵敏度更高,最低检测下限为10个拷贝/μL;批内变异系数和批间变异系数分别为0.43%~0.64%、0.44%~2.34%,重复性良好。对67份临床样品进行检测,病毒分离培养法检测出23份阳性样品,LNA-TaqMan探针荧光定量PCR方法检测出26份阳性样品,常规TaqMan探针法检测出21份阳性样品,与病毒分离法比较,LNA-TaqMan探针法的符合率为96%。本研究建立的基于LNA-TaqMan探针检测猪伪狂犬病病毒野毒株的荧光定量PCR方法,为猪伪狂犬病的诊断和流行病学调查提供了可靠的技术支持。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GE基因 lna探针 实时荧光定量PCR
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实时荧光RT-PCR快速检测蚊体内乙型脑炎病毒及福建省基因Ⅰ型乙型脑炎病毒的发现 被引量:8
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作者 郑夔 黄吉城 +6 位作者 李小波 洪烨 师永霞 幸芦琴 相大鹏 郭波旋 胡龙飞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第11期2212-2215,共4页
目的:应用实时荧光RT-PCR方法快速检测蚊体内乙型脑炎病毒,并对蚊体内携带的乙型脑炎病毒进行基因分型。方法:从蚊媒监测点采集蚊标本,研磨后提取RNA,用新型的LNA探针实时荧光RT-PCR方法进行高通量快速筛查蚊体携带的乙型脑炎病毒,对核... 目的:应用实时荧光RT-PCR方法快速检测蚊体内乙型脑炎病毒,并对蚊体内携带的乙型脑炎病毒进行基因分型。方法:从蚊媒监测点采集蚊标本,研磨后提取RNA,用新型的LNA探针实时荧光RT-PCR方法进行高通量快速筛查蚊体携带的乙型脑炎病毒,对核酸阳性的标本进一步用乙型脑炎病毒E基因特异引物进行RT-PCR扩增和序列测定,根据所测序列与GenBank中不同地理来源乙型脑炎病毒株E基因核苷酸序列分析的结果进行基因型别的判定。结果:12575只蚊子分成254份,用实时荧光RT-PCR方法从来源于福州的2份三带喙库蚊标本中检出乙型脑炎病毒核酸阳性,经RT-PCR及核苷酸序列测定,得到一段长1500nt的E基因核苷酸序列,序列分析结果显示,其核苷酸同源性最大的是来源于上海(DQ404100)和浙江(EU258742)的毒株,分别是99.1%和99.0%,均属于基因Ⅰ型病毒。结论:实时荧光RT-PCR方法是快速检测蚊体内乙型脑炎病毒的理想方法,此次调查发现的乙型脑炎病毒是以往福建省内未见报道的基因Ⅰ型病毒。 展开更多
关键词 实时荧光RT—PCR lna探针 乙型脑炎病毒 E基因 基因型
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一种无RNA纯化步骤TaqMan RT-PCR方法用于快速检测登革病毒 被引量:2
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作者 郑夔 洪烨 +6 位作者 李小波 黄吉城 师永霞 幸芦琴 相大鹏 郭波旋 胡龙飞 《华南预防医学》 2008年第3期6-9,14,共5页
目的 建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法。方法 设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqManRT—PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模... 目的 建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法。方法 设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqManRT—PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模拟含登革病毒血清中RNA。以优化的TaqManRT—PCR方法进行检测,比较有或无RNA纯化步骤检测的敏感性和重复性。结果 LNA探针TaqMan RT—PCR有较好的PCR扩增效率(104%)、较广的线性范围(10^0-10^-7样品稀释度)、较高的敏感性(0.003TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于4.53%),新方法检测经简单热释放RNA的细胞培养液和模拟含登革病毒血清中登革病毒也有较高的敏感性(0.03TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于6.36%)。结论 新型LNA探针可替代MGB探针用于TaqMan RT—PCR反应。简便的热释放RNA方法结合高敏感性的TaqMan RT—PCR可满足登革病毒快速检测的需要。 展开更多
关键词 登革病毒 逆转录聚合酶链反应 lna探针
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锁核酸探针技术快速检测鸭源性成分的试验 被引量:6
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作者 许如苏 周广彪 +4 位作者 魏霜 段建发 刘中勇 陈冠武 苏建晖 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期91-93,共3页
为了建立快速鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分的改良荧光PCR方法,针对鸭线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和锁核酸(LNA)探针,建立快速鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分的Taqman-LNA荧光PCR方法,通过设定合理的掺假判定标准,解决肉... 为了建立快速鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分的改良荧光PCR方法,针对鸭线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和锁核酸(LNA)探针,建立快速鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分的Taqman-LNA荧光PCR方法,通过设定合理的掺假判定标准,解决肉污染导致的掺假误判。结果建立的方法对鸭肉DNA的检测灵敏度高达1.64 pg;与猪、牛、鸡等11种动物的DNA无非特异性反应;应用该法检测模拟掺假肉制品,结果与预期相符;应用该法检测80份市售肉制品,发现有5份产品掺有鸭源性成分而标签未标示。表明本试验建立的方法特异、敏感,可快速、准确鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分。 展开更多
关键词 lna探针 Taqman-lna荧光PCR 鸭源性成分 肉及肉制品
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锁核酸探针多重荧光PCR快速检测肉制品中4种动物肉掺假的研究 被引量:6
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作者 许如苏 周广彪 +3 位作者 魏霜 段建发 刘中勇 陈冠武 《检验检疫学刊》 2016年第2期12-16,共5页
应用锁核酸探针技术建立同时检测肉制品中牛、猪、鸡、鸭4种动物肉掺假的方法。针对动物线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立同时检测肉制品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的多重Taqman-LNA荧光PCR方法,用于市售肉... 应用锁核酸探针技术建立同时检测肉制品中牛、猪、鸡、鸭4种动物肉掺假的方法。针对动物线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立同时检测肉制品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的多重Taqman-LNA荧光PCR方法,用于市售肉制品的检测,同时采用标准方法进行验证。结果显示,建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中上述动物源性成分,检测限均达到肉含量的0.01%。将样品Ct≤30,且|样品Ct-纯肉Ct|≤7判为肉掺假;将样品Ct≤30,且|样品Ct-纯肉Ct|>7判为肉污染。对200份市售肉制品检测发现,有42份样品掺入标签标示以外肉种,有22份样品存在肉污染,其中2份样品暨掺假又污染。多重方法对肉源性成分的检测结果与现行标准方法符合率达99%。本研究建立的方法可同时检测肉制品中牛、猪、鸡、鸭4种动物源性成分,具有特异、快速、经济、高通量等优点,设定的肉掺假和肉污染判定标准合理,可有效避免肉污染导致的掺假误判。 展开更多
关键词 动物源性成分 掺假 锁核酸探针 多重Taqman-lna荧光PCR 肉制品
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基于锁核酸探针的传感器用于BCR/ABL融合基因检测的研究 被引量:4
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作者 汪红梅 林丽清 +3 位作者 翁少煌 王丽满 刘银环 林新华 《电化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期180-185,共6页
依据慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因的碱基序列,设计了一种新型发夹结构锁核酸(locked nu-cleic acids,LNA)探针,将该探针借助Au—S键固定在金电极表面构建了特异的生物传感器.LNA探针与目标链DNA杂交,以本实验室合成的苯甲酸二聚铜... 依据慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因的碱基序列,设计了一种新型发夹结构锁核酸(locked nu-cleic acids,LNA)探针,将该探针借助Au—S键固定在金电极表面构建了特异的生物传感器.LNA探针与目标链DNA杂交,以本实验室合成的苯甲酸二聚铜配合物([Cu2(C7H5O2)4(C2H6O)2],简称[Cu(R)2]2+)为杂交指示剂,应用差示脉冲伏安法进行检测,表现出良好的响应信号.该新型锁核酸传感器能较好的区分完全互补链DNA、单碱基错配链DNA.互补链DNA检测的线性范围为1.0×10-8~1.0×10-6 mol.L-1,检出限2.0×10-9mol.L-1. 展开更多
关键词 发夹锁核酸探针 生物传感器 BCR/ABL融合基因 苯甲酸二聚铜配合物
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TaqMan-LNA探针多重实时荧光定量PCR检测炭疽芽胞杆菌的研究 被引量:8
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作者 刘东立 李文涓 +4 位作者 石一 张铮 马国柱 张恩民 李伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期244-248,258,共6页
目的设计检测多个靶基因的炭疽多重荧光定量PCR反应系统,建立快速准确的基因诊断方法,解决蜡样芽胞菌群基因诊断交叉反应问题。方法选择炭疽杆菌PX01毒素质粒基因pagA,PX02毒素质粒基因capB,以及染色体上的前噬菌体λBa03基因PL3作为靶... 目的设计检测多个靶基因的炭疽多重荧光定量PCR反应系统,建立快速准确的基因诊断方法,解决蜡样芽胞菌群基因诊断交叉反应问题。方法选择炭疽杆菌PX01毒素质粒基因pagA,PX02毒素质粒基因capB,以及染色体上的前噬菌体λBa03基因PL3作为靶基因,利用在线荧光定量PCR引物设计软件设计、优化多重PCR引物以及相应的TaqMan探针序列,对探针进行LNA标记并优化荧光PCR反应体系,构建多重实时荧光定量PCR反应系统。以3对引物PCR扩增并克隆靶基因的质粒标准品,倍比稀释后进行敏感度试验,以炭疽、蜡样芽胞杆菌、苏云金杆菌、蕈状杆菌以及常见肠道致病菌进行特异度试验,利用炭疽弱毒株污染土壤及奶粉进行模拟检测。结果 TaqMan-LNA多重实时荧光定量PCR可迅速检出3个炭疽杆菌靶基因,常用的探针法荧光定量PCR反应液均适用;pagA、CapB、PL3基因克隆标准品序列正确;该方法对pagA、CapB、PL3基因的检出限分别为63、398、114copies/μl,且仅检出炭疽杆菌基因,其余4种蜡样芽胞菌扩增均阴性。土壤及奶粉样品检测均阳性,其中pagA近检出限为6.6×104/ml,PL3基因检出限为6.6×105/ml。结论 TaqMan-LNA多重实时荧光定量PCR方法具有适用性广,检测迅速,灵敏度及特异度高等特点,能够将炭疽杆菌与蜡样芽胞菌群中其他细菌相鉴别,可试用于炭疽杆菌的感染检测。 展开更多
关键词 炭疽 TaqMan-lna探针 多重实时荧光定量PCR 锁核酸 前噬菌体
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LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT—PCR方法的建立
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作者 姬奕昕 毛乃颖 +2 位作者 王焕焕 谢正德 许文波 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期388-390,共3页
目的人副流感病毒1,2,3型是呼吸道感染的主要病原。本研究建立了特异、快速、灵敏的多重荧光定量RT—PCR方法用于人副流感1,2,3型病毒临床标本检测。方法针对人副流感1,2,3型病毒设计特异性引物探针,优化荧光RT—PCR反应条件。... 目的人副流感病毒1,2,3型是呼吸道感染的主要病原。本研究建立了特异、快速、灵敏的多重荧光定量RT—PCR方法用于人副流感1,2,3型病毒临床标本检测。方法针对人副流感1,2,3型病毒设计特异性引物探针,优化荧光RT—PCR反应条件。应用体外转录方法分别制备人副流感1,2,3型病毒的标准品。验证荧光定量RT-PCR方法的特异性,敏感性和稳定性。结果该方法对人副流感1,2,3型病毒核酸检测有高度特异性,检测的灵敏度HPIV1为10个拷贝,HPIV2为100个拷贝,HPIV3为100个拷贝。可从临床患者鼻咽吸出物标本中直接检出。结论’本研究建立的LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法具有较高的特异性和敏感性。适用于临床早期诊断和实验室病原谱筛查。 展开更多
关键词 人副流感病毒Ⅱ型 人副流感病毒Ⅲ型 聚合酶链反应 DNA探针 lna
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LNA探针实时荧光定量PCR检测小麦矮缩病毒体系的建立 被引量:1
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作者 王亮 刘艳 王锡锋 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期313-319,共7页
本研究通过对多个小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)小麦分离物进行序列分析,在编码Rep蛋白N端的基因保守区域设计一对特异性引物和一条长度为19 bp的TaqMan LNA探针,经过探针和引物浓度的系列优化,建立了WDV田间样品LNA探针实时... 本研究通过对多个小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)小麦分离物进行序列分析,在编码Rep蛋白N端的基因保守区域设计一对特异性引物和一条长度为19 bp的TaqMan LNA探针,经过探针和引物浓度的系列优化,建立了WDV田间样品LNA探针实时荧光定量PCR检测方法,确定最优反应条件下的引物和探针终浓度分别为0.5μmol/L和0.3μmol/L。该方法建立的标准曲线斜率及相关系数分别为-3.424 3和0.997 3,扩增效率为96.0%,重复性试验组内变异系数为0.11%-1.34%,组间变异系数为0.44%-1.21%,最低检测限为55 copies/μL,其灵敏度是普通PCR的100倍以上。与普通TaqMan探针荧光定量PCR相比,该方法所用探针长度大大缩短,减少了探针间形成二级结构的机会,探针设计更加简单、方便。该方法适用于田间样品的早期监测,为病害流行调查提供了高效快捷的技术支撑。 展开更多
关键词 小麦矮缩病毒 lna探针 荧光定量PCR 检测
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苯甲酸二聚铜配合物与DNA相互作用的电化学研究及应用 被引量:5
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作者 林丽清 康杰 +2 位作者 林启凰 黄丽英 林新华 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1-4,共4页
采用电化学法对自行合成的苯甲酸二聚铜配合物[Cu(R)2]与鲑鱼精DNA的相互作用进行了研究。配合物在0.197 V和0.162 V处有一对氧化还原峰。加入双链DNA(dsDNA)后,氧化还原峰电流明显降低且式量电位正移,说明苯甲酸二聚铜配合物与DNA以嵌... 采用电化学法对自行合成的苯甲酸二聚铜配合物[Cu(R)2]与鲑鱼精DNA的相互作用进行了研究。配合物在0.197 V和0.162 V处有一对氧化还原峰。加入双链DNA(dsDNA)后,氧化还原峰电流明显降低且式量电位正移,说明苯甲酸二聚铜配合物与DNA以嵌入方式生成一种非电活性超分子复合物,导致苯甲酸二聚铜配合物的峰电流降低,峰电流在一定范围内与鲑鱼精dsDNA质量浓度呈线性关系,线性范围为3.0×10-2~4.5×10-3mg/L,检出限为3.5×10-4mg/L。同时,以[Cu(R)2]作杂交指示剂,把一种新型发夹结构锁核酸探针(LNA)固定在金电极表面制备了电化学生物传感器,将该修饰电极与人工合成的慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因片段进行杂交,用差示伏安法进行检测,该铜配合物能够较好地区分探针序列、单碱基错配序列和互补链序列。 展开更多
关键词 发夹结构锁核酸探针 电化学传感器 苯甲酸二聚铜配合物
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陕西株利什曼原虫ITS-1基因片段序列多态性分析 被引量:6
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作者 刘东立 王凤萍 +5 位作者 王安礼 张铮 王天海 石一 关蓉晖 李文涓 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期282-286,共5页
目的分析陕西株利什曼原虫rRNA内转录间隔区间I(ITS-1)序列多态性,探讨利什曼原虫ITS-1分子遗传规律。方法陕西省韩城市犬、白蛉以及人体利什曼原虫阳性标本7份,提取核酸,PCR法扩增ITS-1片段,双向测序、拼接后与文献发表的代表株进行序... 目的分析陕西株利什曼原虫rRNA内转录间隔区间I(ITS-1)序列多态性,探讨利什曼原虫ITS-1分子遗传规律。方法陕西省韩城市犬、白蛉以及人体利什曼原虫阳性标本7份,提取核酸,PCR法扩增ITS-1片段,双向测序、拼接后与文献发表的代表株进行序列比对,构建系统发育树,进行系统发育分析。结果 7份标本均扩增出约320bp的片段,ITS-1序列之间同源性>99%,与国内山丘型疫区虫株高度一致,与荒漠型遗传距离较远。系统发育分析陕西株与婴儿利什曼原虫和杜氏利什曼原虫聚为一类。结论陕西省韩城市分离自病犬、传播媒介白蛉及黑热病患者的利什曼原虫ITS-1序列同源,应为犬源型婴儿利什曼原虫。 展开更多
关键词 利什曼原虫 ITS-1 序列多态性分析 陕西
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Highly specific quantification of mRNA mutation in single cells based on RNase H cleavage-assisted reverse transcription(RT)-PCR
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作者 Dandan Yang Yuanyuan Sun +3 位作者 Fu Chang Hui Tian Chenghui Liu Zhengping Li 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2020年第5期1095-1098,共4页
Accurate quantitation of site-specific mRNA mutation in single cells or in peripheral blood is of great significance for both biological and biomedical studies.How to eliminate the false-positive interference from the... Accurate quantitation of site-specific mRNA mutation in single cells or in peripheral blood is of great significance for both biological and biomedical studies.How to eliminate the false-positive interference from the abundant normal mRNA is still a big challenge.Herein,we have proposed an LNA(locked nucleic acid)-assisted high-specificity strategy which can selectively guide the RNase H to cleave only the wildtype mRNA(wtRNA)while the mutant mRNA(mutRNA)will remain intact.The intact mutRNA can be amplified and detected by real-time reverse transcription(RT)-PCR but the disconnected wtRNA will be not replicated at all.Based on the highly selective depletion of wtRNA,this elegant design effectively avoids the false-positive interference from the high background of normal mRNA and thus can guarantee the accurate and reliable detection of rare mutRNA in real biomedical samples.Besides for the excellent specificity,ultrahigh sensitivity is also achieved for this proposed assay,which allows the quantification of mutRNA at single molecule and single cell level.Due to its easy design,high sensitivity and specificity,the established LNA probe-assisted RT-PCR strategy provides a powerful tool for studying the function of mutRNA at the single cell level and for the mutRNA-associated liquid biopsy. 展开更多
关键词 mRNA mutation Single cell lna probe RNase H RT-PCR
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荧光定量PCR同步检测人类疱疹病毒6,7,8型方法的建立 被引量:1
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作者 郑毅 高应林 +3 位作者 张凡雄 赵友云 王业富 唐景峰 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2013年第1期9-13,共5页
目的:建立同步检测人类疱疹病毒6,7,8型(HHV-6,-7,-8)的多重荧光定量PCR方法。方法:分别针对HHV-6,-7,-8的U67、U36、ORF65基因设计3对引物和3种Taq Man-LNA探针,构建三重荧光定量PCR反应体系,用于同步扩增HHV-6,-7,-8。分别应用HHV-6,-... 目的:建立同步检测人类疱疹病毒6,7,8型(HHV-6,-7,-8)的多重荧光定量PCR方法。方法:分别针对HHV-6,-7,-8的U67、U36、ORF65基因设计3对引物和3种Taq Man-LNA探针,构建三重荧光定量PCR反应体系,用于同步扩增HHV-6,-7,-8。分别应用HHV-6,-7,-8质粒建立对应标准曲线,并对多重荧光定量PCR方法进行线性范围、灵敏度、特异性、重复性和扩增效率等方法学评价。以DNA测序法为参考方法,检测45例疑似HHV感染者外周血单个有核细胞(PBMC)中的HHV-6,-7,-8,对多重荧光定量PCR方法进行临床特异性和敏感性评估。结果:多重荧光定量PCR方法检测HHV-6,-7,-8的线性范围均在10~6-10^(11)Copies/L,相关系数均>0.99,灵敏度为8×10~5Copies/L,最低检测限为5×10~5Copies/L,无非特异性扩增,线性范围内HHV-6,-7,-8的批间、批内变异系数(CV)均<5.5%;与单重荧光定量PCR相比,检测HHV-6,-7,-8质粒含量的相关性分别为0.980,0.987,0.965。以DNA测序方法为金标准,多重荧光定量PCR检测HHV-6,-7,-8的特异性均为100%,灵敏度分别是93.1%、80%、100%。结论:多重荧光定量PCR能够对HHV-6,-7,-8进行同步、快速和准确的定量检测,将在输血安全筛查方面有着广泛的应用前景。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒 多重荧光定量PCR TaqMan-lna探针 输血筛查
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A full W-band low noise amplifier module for millimeter-wave applications 被引量:3
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作者 赵华 姚鸿飞 +4 位作者 丁芃 苏永波 宁晓曦 金智 刘新宇 《Journal of Semiconductors》 EI CAS CSCD 2015年第9期99-104,共6页
A full W-band low noise amplifier (LNA) module is designed and fabricated. A broadband transition is introduced in this module. The proposed transition is designed, optimized based on the results from numerical simu... A full W-band low noise amplifier (LNA) module is designed and fabricated. A broadband transition is introduced in this module. The proposed transition is designed, optimized based on the results from numerical simulations. The results show that 1 dB bandwidth of the transition ranges from 61 to 117 GHz. For the purpose of verification, two transitions in back-to-back connection are measured. The results show that transmission loss is only about 0.9-1.7 dB. This transition is used to interface integrated circuits to waveguide components. The characteristic of the LNA module is measured after assembly. It exhibits a broad bandwidth of 75 to 110 GHz, and has a small signal gain above 21 dB. The noise figure is lower than 5.2 dB throughout the entire W-band (below 3 dB from 89 to 95 GHz) at room temperature. The proposed LNA module exhibits potential for millimeter wave applications due to its high small signal gain, low noise, and low DC power consumption. 展开更多
关键词 W-band: low noise amplifier lna waveguide-to-microstrip probe transition noise figure lnamodule
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