不结球白菜BrLOS2基因cDNA全序列克隆及结构特征分析

利用RT-PCR和5′/3′RACE方法,从不结球白菜冷诱导12 h的根中,克隆到1个冷适应相关基因BrLOS2,Gen-Bank登录号DQ334724,其cDNA全长1 666 bp,含有1 335 bp的完整开放阅读框,编码444个氨基酸。BrLOS2基因与芜菁、甘蓝型油菜、拟南芥等物种的烯醇酶基因有80%以上的同源性,有1个烯醇酶N端结构域、1个烯醇酶结构域和保守的DNA结合域。二级结构及三维结构分析表明,BrLOS2具有许多其他LOS家族的共同特性。

锡林郭勒羊肉真实性分析方法的建立及其适用性

建立基于绵羊多胎(fecundity booroola,FecB)基因保守单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分析方法,为锡林郭勒羊肉的真实性检测提供有益科学借鉴。利用锡林郭勒羊肉(乌珠穆沁羊和苏尼特羊)FecB基因的保守SNP位点(A)与高繁品种(小尾寒羊和湖羊)的对应基因位点(G)有明显差异,采集乌珠穆沁羊、苏尼特羊及小尾寒羊核心保种场种质资源对此基因位点进行大样本验证,建立锡林郭勒羊肉真实性判定模型,通过春节冷库抽样以及屠宰季现场采样对判定模型进行适用性研究。根据实时荧光扩增曲线检测结果判定FecB基因分型AA、AG和GG,建立以基因位点(G)的比率大于5%为判定界限,样本量不少于10为前提,来判断锡林郭勒羊群中是否含有高繁品种羊。春节冷库抽样验证20批冷库羊肉样品中有17批羊肉为锡林郭勒羊肉,3批羊肉样品存在高繁品种羊肉;屠宰季现场采样验证11批羊肉样品有9批为锡林郭勒羊肉,2批羊肉样品存在高繁品种羊肉。所建立的锡林郭勒羊肉真实性判定模型具有较好的判定能力,锡林郭勒本地市场中存在小尾寒羊和湖羊等高繁品种羊肉。

红芪总黄酮对人白血病细胞诱导分化的影响

目的研究红芪总黄酮对人早幼粒白血病HL-60细胞诱导分化的作用及其分子机制。方法HL-60细胞经红芪总黄酮处理后,检测细胞NBT还原能力的改变,用流式细胞仪测定细胞增殖周期及CD11b、C-fos表达。结果红芪总黄酮作用于HL-60细胞后,NBT还原能力增强;CD11b表达升高;细胞被阻滞于G0/G1及G2/M期,S期细胞数相应减少;C-fos基因表达增强。结论红芪总黄酮可诱导HL-60细胞分化成熟,其机制可能与上调C-fos基因表达有关。

自愿转轮运动对抑郁模型大鼠学习记忆及基底外侧杏仁核c-fos表达的影响

探讨4周自愿转轮运动对慢性不可预知性应激致抑郁大鼠旷场行为及空间学习记忆能力、血清皮质醇和基底外侧杏仁核c-fos表达的影响。将40只大鼠随机分为4组,即对照组、运动组、应激模型组及应激运动组,每组10只。应激模型组及应激运动组大鼠每日进行慢性不可预知性应激1次,连续28 d,同时运动组及应激运动组大鼠进行4周自愿转轮运动。自愿转轮运动结束后检测大鼠血清皮质醇水平;运用旷场实验测试大鼠自主活动能力及探索行为;八臂迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;采用免疫组织化学结合图像半定量方法对基底外侧杏仁核c-fos神经元的数量、面积及灰度进行测量和分析。结果发现:1)与应激模型组比较,应激运动组大鼠穿越格数、直立次数及修饰次数显著增多(P<0.01、P<0.05),粪便颗粒显著减少(P<0.05);2)与应激模型组比较,应激运动组大鼠血清皮质醇水平显著下降(P<0.05),完成八臂迷宫时间显著缩短(P<0.01),WME、RME显著减少(P<0.05),总错误次数(TE)远远低于应激模型组(P<0.01);3)与应激模型组比较,应激运动组基底外侧杏仁核c-fos免疫阳性细胞数量和阳性产物面积表达均增加(P<0.05),阳性细胞灰度值虽降低,但没有显著差异性(P>0.05)。以上结果说明,自愿转轮运动可提高抑郁大鼠的学习记忆能力,机理可能与长期自愿转轮运动降低抑郁大鼠的血清皮质醇水平及增强大脑基底外侧杏仁核c-fos的表达有关。

赖氨酰氧化酶基因在上消化道癌组织内的表达及临床意义

背景与目的:赖氨酰氧化酶(lysyloxidase,LO)是近来发现的肿瘤候选抑癌基因,国外研究发现其表达与乳腺及前列腺癌的复发转移有关,但有关该基因与上消化道癌复发、转移之间关系的研究至今未见报道。本研究的目的在于探讨LO基因在食管、贲门及胃三种上消化道恶性肿瘤转移中的作用。方法:应用RT-PCR的方法检测食管癌,贲门癌,胃癌组织及其相应癌旁正常组织内LO基因的表达情况。结果:研究表明LO基因在以上三种癌组织表达率分别为42.1%(16/38)、42.9%(9/21)及28.0%(7/25);伴有淋巴结转移的癌组织LO表达率均低于不伴淋巴结转移的组织(P<0.05);肿瘤浸润至深肌层以下者LO表达率降低(P>0.05)。该基因的表达与肿瘤组织学分型、浸润方式、肿瘤大小及淋巴结转移个数等无关(P>0.05)。结论:本研究实验表明LO基因表达率降低与上消化道肿瘤转移存在相关性,提示该基因可能在抑制肿瘤转移中起重要作用。

大鼠二次脑损伤后脑内c-fos基因表达和血浆β-内啡肽的变化及意义

目的探讨脑内c-fos基因表达及血浆β-内啡肽的变化在二次脑损伤(SBI)中的作用。方法125只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、颅脑损伤组和SBI组。分别采用免疫组化及放免分析测定大鼠脑内c-fos蛋白与血浆β-EP的含量,并对脑组织进行病理学观察。结果SBI组c-fos基因表达分别于伤后3h、24h出现两个高峰,伤后3￣48hc-fos基因表达均明显高于颅脑损伤组及脑缺血组(P<0.05)。SBI组大鼠血浆β-EP水平在伤后1h达高峰,至伤后48h仍未恢复正常(P<0.05),伤后各时间点均明显高于颅脑损伤组和脑缺血组(P<0.05)。在伤后12hSBI组脑含水量达高峰;伤后3￣48h明显高于颅脑损伤组及脑缺血组(P<0.05)。伤后6￣48hSBI组神经元损伤数目明显高于颅脑损伤组及脑缺血组(P<0.05)。结论伤后大鼠脑内c-fos基因表达增加、血浆β-EP水平明显升高参与了SBI后病理生理过程,提示两者同SBI发展密切相关。

IL-10基因单核苷酸多态性与福建地区非贲门胃癌的相关性研究

目的探讨白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)启动子区3个位点(IL-1082/-819/-592)的单核苷酸多态性、H.pylori感染与福建地区非贲门胃癌之间的相关性。方法采用PCR和直接测序分析来检测IL-10基因多态性;采用胃黏膜快速尿素酶实验检测幽门螺旋杆菌。结果①IL-10-1082位点:胃癌组中A/A型(17.4%)、A/G型(26.4%)、G/G型(9.4%)与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。②IL-10-592位点与IL-10-819位点:胃癌组中C/C基因型(44.8%),C/A基因型(31.2%),A/A基因型(24%)与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。③胃癌患者IL-10-1082、IL-10-592和IL-10-819等位基因分布在H.pylori感染阳性组与阴性组之间,差异无统计学意义(P>0.05)。结论①IL-10-1082A等位基因与福建地区胃癌发生相关。②IL-10-819/592等位基因与胃癌发生无相关。③IL-10-1082位点、IL-10-819/-592位点等位基因与H.pylori感染之间无相关。

三羟异黄酮对去卵巢大鼠主动脉雌激素β受体和原癌基因c-fos表达的影响

目的观察三羟异黄酮(GST)对去卵巢大鼠主动脉雌激素β受体(ERβ)和原癌基因c-fos表达的影响。方法将成年雌性大鼠40只随机分为4组:假手术对照组(A组);去卵巢组(B组);去卵巢+雌二醇组(C组);去卵巢+GST组(D组)。给药8周后处死大鼠。免疫组化法检测主动脉中ERβ和原癌基因c-fos的表达。结果1)去卵巢手术大鼠主动脉ERβ的表达明显降低,GST与雌二醇明显增加去卵巢大鼠主动脉ERβ的表达。2)去卵巢手术增加大鼠主动脉原癌基因c-fos的表达,但GST与雌二醇能阻止c-fos表达增加。结论GST对血管ERβ的表达具有调节作用;GST可抑制血管平滑肌原癌基因c-fos的表达。这可能是植物雌激素防止动脉粥样硬化,发挥心血管保护作用的机理之一。

白细胞介素10启动子基因多态性与强直性脊柱炎的易感性

背景:在强直性脊柱炎患者中,基因多态性很可能影响细胞因子的分泌模式。目的:在中国胶东半岛地区汉族人强直性脊柱炎患者中,探讨白细胞介素10启动子基因的单核苷酸多态性和单体型与强直性脊柱炎易感性的相关性。方法:用酶联免疫吸附测定法测定血清中白细胞介素10的水平,用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法对白细胞介素10基因启动子中的-1082A/G、-819C/T和-592C/A位点的单核苷酸多态性进行分析。结果与结论:收集了110例强直性脊柱炎患者和120例同种族的健康人,强直性脊柱炎患者组血清中白细胞介素10水平明显高于健康对照组(Z=10.9,P<0.001),单核苷酸多态性分析显示:在强直性脊柱炎患者组和健康对照组之间-592A/C位点基因型分布和等位基因频率没有明显差异,该研究中没有发现-1082GG基因型。强直性脊柱炎患者-1082G等位基因频率较健康对照组增加(P=0.047),通过logistic回归分析,强直性脊柱炎患者-1082AG基因型的比值比为1.993(95%CI:1.046-3.800,P=0.034),而-819CC基因型的比值比为3.125(95%CI:1.246-7.836,P=0.015),此外,单体型分析显示与ATA基因型相比,GCC基因型显著增加了患强直性脊柱炎的风险(OR=2.19,95%CI:1.13-4.26,P=0.020)。结果表明白细胞介素10的基因单体型与中国胶东半岛地区汉族人强直性脊柱炎的易感因素相关。

不同血型大鼠电刺激后c-fos基因表达的差异

目的研究不同血型大鼠电刺激后c-fos基因表达的差异。方法选取雄性Wistar大鼠40只,类人A血型和类人B血型各20只,均分别有10只大鼠以2mA直流电行电刺激,刺激时限1s,间隔30s,持续15min。采用免疫组化方法和实时荧光定量RT-PCR方法分别检测大鼠脑内c-fos蛋白的分布以及mRNA水平相对表达量。结果电刺激后大鼠c-fos阳性信号均呈增强趋势,且类人A血型大鼠强于类人B血型大鼠(P<0.05)。电刺激后类人A血型大鼠脑c-fosmRNA表达明显低于类人B血型大鼠(P<0.05)。结论电刺激后大鼠c-fos基因表达增强,类人A血型大鼠更加明显。

γ干扰素诱导蛋白-10的硫氧还基因融合表达、纯化及生物活性检测

γ干扰素诱导蛋白-10是由γ干扰素刺激单核细胞、内皮细胞等所诱导产生趋化T淋巴细胞的一类分泌性糖蛋白。本研究PCR扩增人与鼠γ干扰素诱导蛋白-10的成熟蛋白编码区,克隆到硫氧还载体pET-32(a)进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:在IPTG诱导下,人与鼠的γ干扰素诱导蛋白-10表达量约占目标总蛋白的25.3%,主要以包含体的形式存在,可溶性成分约占目标总蛋白的20%。将可溶性蛋白以S-Tag亲和层析柱进行纯化,纯化的蛋白质纯度约为90%的γ干扰素诱导蛋白-10。通过趋化性分析,证实重组表达的人与鼠γ干扰素诱导蛋白-10在100ng/ml浓度下对激活的T淋巴细胞具有趋化活性。

IL-10启动子基因在云南傣族、哈尼族人群中的遗传多态性

目的分析云南省西双版纳地区傣族和哈尼族人群IL-10启动子基因多态性的分布情况。方法运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术检测傣族和哈尼族人群IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点基因型及等位基因频率。结果傣族与哈尼族人群rs1800871和rs1800896位点基因型与等位基因分布频率显著不同,差异有统计学意义(rs1800871:χ2分别为7.023和7.373,P分别为0.030和0.007;rs1800896:χ2分别为6.184和5.870,P分别为0.013和0.015)。结论 IL-10启动子rs1800871和rs1800896多态性位点基因型和等位基因分布频率具有民族、种族差异。

小鼠IL-10重组慢病毒载体的构建和病毒包装

目的:构建小鼠IL-10重组慢病毒表达载体并进行包装,为进一步研究IL-10基因修饰树突细胞在哮喘免疫耐受中的作用提供实验基础。方法:小鼠IL-10基因片段经PCR扩增后,与酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,获得PGC-LV-IL-10重组慢病毒并转化细菌感受态细胞。克隆菌落行PCR鉴定,对阳性的重组质粒进行测序并转入293T细胞,荧光显微镜下观察GFP表达并行Western blot鉴定。将重组质粒与慢病毒包装系统一同转染293T细胞进行病毒包装,Real-time定量PCR法检测病毒滴度。结果:DNA测序结果及Western blot鉴定证实成功构建小鼠IL-10重组慢病毒载体,对其进行包装后测定慢病毒滴度为2×108TU/ml。结论:成功构建并包装小鼠IL-10重组慢病毒表达载体。

小鼠急性氧化乐果中毒对c-fos在肌组织内表达的影响

目的应用免疫组化技术,检测急性氧化乐果中毒对c-fos在肌组织内表达的影响。方法将鼠龄为8周的93只雄性昆明小鼠分为空白对照组、生理盐水对照组及实验组。实验组小鼠按染毒后24h、48h、72h、96h及5-7d时间点分笼(15只/笼),同时腹腔注射氧化乐果(50mg/kg)及阿托品(10mg/kg)。对实验组中各时间点小鼠进行肌力测定,并应用免疫组化技术检测染毒后小鼠腓肠肌组织内c-fos阳性细胞率。结果实验组中与染毒5-7d小鼠比较,染毒后1-4d小鼠出现肌无力百分率最高(P<0.05)。染毒后1-4d发生肌无力小鼠腓肠肌细胞c-fos表达均有不同程度升高,与空白对照组、生理盐水对照组及正常肌力小鼠比较差异有显著性(P<0.01)。正常肌力小鼠腓肠肌细胞c-fos阳性细胞率与空白对照组、生理盐水对照组比较差异无显著性。结论急性期有机磷农药中毒可导致c-fos表达增高,提示c-fos表达增高可能与急性期过后IMS的发生存在一定关系。

白介素-10基因启动子多态性及其血浆水平与腹泻型肠易激综合征重叠功能性消化不良的关系

目的:探讨腹泻型肠易激综合征(diarrheairritable bowel syndrome,D-IBS)重叠功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)患者白介素-10(interleukin-10,IL-10)基因启动子区域多态性及其血浆水平与疾病易感性的关系.方法:对164例D-IBS重叠FD患者和200例健康对照者抽血提取其白细胞DNA,应用聚合酶反应-限制性片段多态性(polymerasechain reaction-restriction fragment lengthpolymorphism,PCR-RFLP)分析方法以及扩增受阻突变系统-聚合酶链反应(amplificationrefractory mutation system-polymerase chainreactions,ARMS-PCR)结合DNA测序法,对IL-10基因启动子区-592与-1082位点进行多态性分析,并使用酶联免疫吸附法测定血浆IL-10水平.结果:D-IBS重叠FD病例组与正常对照组相比,IL-10启动子区域592位点基因型分布与等位基因频率无显著差异,592CC基因频率显著下降,基因型频率风险相关分析表示,AA基因型是CC基因型患病风险的1.989倍;A等位基因携带型(AA+AC基因型)为CC型纯合子的1.808倍;-1082位点基因型分布与等位基因频率均无显著差异;-592位点与-1082位点组合基因型分布与等位基因频率也无显著差异;不同IL-10分泌水平基因型分布无显著差异.D-IBS重叠FD病例组血浆IL-10平均水平为14.60 pg/mL±7.14 pg/mL,对照组为22.86 pg/mL±10.62 pg/mL,两组比较,病例组显著低于正常对照组(P<0.001).D-IBS重叠FD病例组592位点AA、AC、CC、AA+AC基因型血浆IL-10水平分别为14.50 pg/mL±6.37 pg/mL、14.85 pg/mL±7.75 pg/mL、13.92 pg/mL±7.63 pg/mL,14.68 pg/mL±7.10 pg/mL,病例组各基因型之间血浆IL-10水平无显著差异,592位点AA+AC与CC基因型血浆IL-10水平也无显著差异.结论:IL-10-592位点A和IL-10血浆水平降低可能与罹患D-IBS重叠FD的相关,但这二者之间并无关联.

毫米波急性辐照对大鼠脊髓P物质和c-fos表达的影响

目的检测毫米波急性辐照后SD大鼠脊髓P物质(SP)和c-fos表达的变化,探索毫米波痛觉效应的机制。方法采用毫米波(35GHz,40W/cm2)一次性辐照SD大鼠局部皮肤0s(对照组)、30s、1min、3min,采用Real-time RT-PCR和Western blotting检测辐照后0min、5min、10min、1h、3h大鼠对应节段脊髓SP、c-fos mRNA、c-fos蛋白的表达水平。结果毫米波辐照30s后各时间点辐照部位相应节段脊髓SP和c-fos mRNA表达与对照组比较无明显差异。毫米波辐照1min后第10min辐照部位相应节段脊髓SP和c-fos mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),此后下降至对照组水平。毫米波辐照3min后第5min、10min和1h辐照部位相应节段脊髓SP和c-fos mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05),于3h时间点下降至对照组水平。毫米波辐照30s及1min后各时间点辐照部位相应节段脊髓c-fos蛋白表达与对照组比较无明显差异。毫米波辐照3min后第5min和10min辐照部位相应节段脊髓c-fos蛋白表达水平显著上调(P<0.01),此后下降至对照组水平。结论毫米波急性辐照后皮肤SP含量增加可能与毫米波辐照导致的热疼痛刺激诱导对应节段脊髓SP和c-fos的表达增加有关。

早基因c-fos反义寡核苷酸诱导豚鼠实验性近视

目的:观察早基因c-fos反义寡核苷酸对豚鼠眼球发育及视网膜c-fos表达的影响,以证明早基因c-fos在豚鼠近视形成中的重要作用,并研究其在视网膜信号转导及抑制近视的可能分子机制。方法:3周三色豚鼠31只,随机均分为3组:高浓度寡核苷酸注射组(1nmol)、低浓度寡核苷酸注射组(0.1nmol)及对照组。玻璃体注药前后分别对各组进行视网膜检影和A超测眼轴长度,分别运用免疫组织化学和RT-PCR观察各组视网膜c-fos蛋白及mRNA表达和变化。结果:高浓度和低浓度c-fos反义寡核苷酸注射眼均呈明显中度近视(-5.425D及-5.575D),视网膜c-fos表达明显下调,c-fos反义寡核苷酸注射眼与自身c-fos正义寡核苷酸注射眼、生理盐水注射眼及自然对照眼比较:屈光度、眼轴及视网膜c-fos表达差异均有统计学意义(P<0.01);高浓度与低浓度c-fos反义寡核苷酸注射眼比较:屈光度、眼轴及视网膜c-fos表达差异均无统计学意义(P>0.05);c-fos正义寡核苷酸注射眼与生理盐水注射眼及自然对照眼比较:屈光度、眼轴及视网膜c-fos表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:c-fos反义寡核苷酸能诱导豚鼠近视发生及发展,并抑制视网膜c-fos表达,早基因c-fos可能参与视网膜的信号转导和近视的抑制机制。

多巴胺受体在可卡因诱导的MAPK通路激活和c-fos基因表达中的作用

目的:探讨多巴胺受体对可卡因诱导的MAPK通路及c-fos基因表达的调控作用。方法:应用多巴胺受体基因敲除小鼠模型,采用Western blotting检测可卡因作用后2h,MAPK家族成员ERK,JNK和p38蛋白激酶的磷酸化活化,及早期反应基因c-fos的基因表达。结果:可卡因急性作用下,D1多巴胺受体促进CPu区ERK激酶的激活和c-fos基因的诱导表达,D3多巴胺受体抑制CPu区ERK激酶的激活和c-fos基因的诱导表达。而p38和JNK没有被可卡因激活。ERK激酶的特异性抑制剂SL327可以阻断可卡因对c-fos基因的激活。结论:D1和D3多巴胺受体对ERK激酶的激活和c-fos基因的诱导表达起相反的调节作用,并且c-fos基因的诱导表达依赖于ERK信号通路。

白细胞介素-1β-511C/T、IL-10-819C/T、-592C/A基因多态性与慢性鼻及鼻窦炎相关性研究

目的初步探讨白细胞介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)基因、IL-10基因多态性在中国上海地区汉族人群中与慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)的相关性。方法采用病例-对照研究方法,收集123例CRS患者(CRS组)和239例健康对照者(对照组)。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测两组的IL-1β基因-511位点多态性和错配聚合酶链反应检测IL-10基因-819位点、-592位点多态性。用非条件Logistic回归分析基因型对发病危险度的影响。结果 IL-1β基因-511位点在两组中的基因型和等位基因频率差异均有显著性意义(χ2=6.943,P=0.031;χ2=5.167,P=0.023)。-511TT基因型对CRS具有独立的影响(P=0.011,OR=1.693)。IL-10基因-819位点在两组中的基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=3.135,P=0.209;χ2=1.641,P=0.200)。-592位点在两组中的基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=3.135,P=0.209;χ2=1.641,P=0.200)。IL-10基因-819和-592位点之间存在完全连锁不平衡(D’=1.0)。结论 IL-1β基因-511TT基因型可能是CRS发病的独立危险因子。IL-10基因-819和-592位点与CRS的发病无相关性。

孕鼠被动吸烟对胎鼠脑组织c-fos基因表达的影响

目的探讨胚胎期被动吸烟对胎鼠学习能力的影响及其机制。方法采用反映学习记忆功能的水迷宫法测试仔鼠神经行为的改变;免疫组织化学染色法研究胎鼠脑组织中蛋白表达的水平。结果胚胎期被动吸烟使大鼠学习记忆能力下降。大脑皮质及海马区内均有较多的FOS蛋白阳性细胞。结论胚胎期被动吸烟对大鼠学习记忆能力有明显影响,且这种改变可能与脑组织的c-fos基因表达有关系。