抗人LOC339524单克隆抗体的制备和应用

目的制备特异性抗人LOC339524的单克隆抗体(m Ab)并进行应用。方法将LOC339524蛋白的非糖基化抗原序列的编码基因进行三段重复表达,合成的基因克隆到质粒p ET28a上。采用大肠杆菌表达系统获得LOC339524重组蛋白,以此作为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得m Ab。ELISA测定抗体特异性及效价。Western blot法鉴定LOC339524重组蛋白、免疫组织化学技术分别检测人心肌组织和H9C2细胞中LOC339524蛋白的表达,采用制备的抗体检测不同心脏病患者血清LOC339524水平。结果筛选出2株能稳定分泌抗人LOC339524蛋白m Ab的杂交瘤细胞株,5-D3和4-F8。其中5-D3效价高于4-F8,达2×106。Western blot法、免疫组织化学技术证明5-D3能特异性识别人和大鼠LOC339524蛋白,应用制备的抗体可成功检测不同心脏病患者血清LOC339524的水平。结论成功制备了特异性好、效价高的抗人LOC339524蛋白m Ab。

LOC339524基因介导脂多糖诱导小鼠小胶质bv2细胞系炎症因子的表达

目的研究LOC339524基因对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠小胶质bv2细胞系炎症因子表达的影响。方法 100 ng/mL LPS处理bv2细胞3、6、9、12 h用于摸索最佳炎症反应时间; 10、100、1 000、10 000 ng/mL LPS处理bv2细胞和100 ng/mL LPS处理bv2细胞3、6、9、12 h用于研究LOC339524蛋白表达变化; si RNA沉默LOC339524和慢病毒转染构建过表达LOC339524的细胞株后加LPS处理用于检测炎症因子变化; qPCR检测TNF-α、IL-6和LOC339524 m RNA水平变化,Western blot检测TNF-α、IL-6和LOC339524蛋白水平变化。结果与0 h相比,LPS处理不同时间均可使TNF-α、IL-6 m RNA和蛋白表达增加(P <0. 05),12 h两者表达一致,选择12 h进行后续炎症反应研究;与0 ng/mL LPS处理组相比,不同浓度LPS均可诱导LOC339524蛋白的表达增加(P <0. 05),100 ng/mL LPS处理后呈时间依赖性增加(P <0. 05)。LPS处理12 h后,si RNA组较无关片段组,TNF-α和IL-6 m RNA和蛋白表达显著上调(P <0. 05),反之,过表达组较正常组TNF-α和IL-6 m RNA和蛋白表达显著下调(P <0. 05)。结论 LOC339524基因介导了脂多糖诱导bv2细胞的炎症反应。