一种应用LORF11同源子鉴别诊断鸭瘟病毒的PCR方法

为建立一种鉴别诊断鸭瘟病毒的PCR方法,根据已发表的8株鸭瘟病毒株的长区开放阅读框(LORF11)等位基因序列,在其开放阅读框等位基因的上游5 bp和下游101 bp的位置设计1对特异性引物。应用这对引物对鸭瘟病毒LH2011株、v2085株、VAC株、Clone-03株DNA进行PCR扩增,分别获得了4 448 bp、3 277bp、934 bp和2 518 bp的特异性条带。此PCR方法特异性强,敏感性高,可检测到10TCID50或0.1LD50的鸭瘟病毒。在感染鸭瘟病毒的组织(肝脏)中均能检测到鸭瘟病毒DNA。对疑似鸭瘟的临床病料的检测结果也证明,建立的PCR方法不仅能够鉴别样品是否感染了鸭瘟病毒,而且能鉴别感染的鸭瘟病毒的来源。

鸭瘟病毒LH2011强毒株部分基因序列的测定与分析

为了分析鸭瘟病毒LH2011强毒株部分基因序列的特征。设计6对特异性引物,应用PCR方法扩增鸭瘟病毒强毒株LH2011株的LORF11、UL47、UL41、UL12、UL2和US10序列,然后对PCR产物进行序列测定,并与已发表的鸭瘟病毒的同源序列进行比较。序列分析结果显示,LH2011株LORF11同源子与中国强毒株CHv中有相同的结构,而与欧洲强毒株(2085株、Jansen株、Holland株和D11-JW-016株)和中国疫苗株(VAC株和Clone-03株)存在较大差异,发生了大片段碱基插入,使其被分为LORF11A和LORF11B 2个开放阅读框(ORF)。UL47、UL41、UL12、UL2和US10序列与德国强毒株2085株完全一致,其中UL2序列与N3株、LS株、N2株、N1株、2085株和CHv株6株强毒株均一致,而在Attenuated strain 2株、Attenuated strain 1株、Clone-03株和VAC株4个弱毒株中都缺失了一个528 bp的大片段。表明:LH2011株具有强毒株的基因型特征,提示弱毒株中LORF11同源子和UL2发生的大片段碱基缺失很可能与病毒的毒力减弱直接相关。