LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨LASP1基因表达对人结肠癌(LOVO)细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.01)。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.01)。结论LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

丹参酚酸B通过抑制ROS对大肠癌LOVO细胞侵袭与迁移的作用

目的:验证丹参酚酸B(SalB)通过上调细胞内活性氧(ROS)含量抑制LOVO细胞侵袭与迁移以及SalB对LOVO细胞侵袭和迁移的量效相关性调控。方法:体外培养人大肠癌LOVO细胞,并将其分成6组,Control组、SalB-L组、SalB-M组、SalB-H组、H_(2)O_(2)组和SalB-M+NAC组,进行分组干预。显微镜下观察LOVO细胞形态,采用流式细胞术测定细胞内ROS浓度,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力。结果:显微镜下可见,SalB干预后LOVO细胞生长抑制、细胞伪足变短或消失;低浓度SalB对LOVO细胞内ROS含量无影响(P>0.05),中、高浓度SalB浓度依赖性促进细胞内ROS生成(P<0.01),中浓度SalB诱导产生的ROS可被ROS清除剂NAC完全清除(P<0.01);低浓度SalB对LOVO细胞侵袭、迁移能力无影响(P>0.05),中、高浓度SalB可浓度依赖性抑制LOVO细胞侵袭、迁移(P<0.01),中浓度SalB对细胞侵袭、迁移的抑制作用可被NAC完全逆转(P<0.01)。结论:SalB可通过上调细胞内ROS浓度量效相关性抑制大肠癌LOVO细胞侵袭和迁移。

绿茶水提取物诱导体外培养的大肠癌LOVO细胞的凋亡

目的：探讨绿茶水提取物对体外培养的大肠癌ＬｏＶｏ细胞的抑制和诱导细胞发生凋亡的作用。方法：用ＭＴＴ法、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜和流式细胞仪的方法，观察绿茶水提取物处理ＬｏＶｏ细胞后其生化和形态学等指标的改变。结果：ＭＴＴ法证实绿茶水提取物对ＬｏＶｏ细胞有抑制作用，抑制率与绿茶水提取物的浓度呈正相关；透射电镜可见ＬｏＶｏ细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂等凋亡细胞的形态学改变；琼脂糖凝胶电泳呈典型的“梯状（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）”带。流式细胞仪检测结果示：在绿茶水提取物处理ＬｏＶｏ细胞后０～１２ｈＧ１期前无亚二倍体峰出现，而在３６ｈＧ１期前出现一亚二倍体峰，即凋亡峰。结论：绿茶水提取物对大肠癌ＬｏＶｏ细胞有抑制和杀灭作用，而这种作用的机制之一是通过诱导大肠癌细胞发生凋亡，即诱导大肠癌细胞发生凋亡是绿茶杀灭肿瘤细胞的重要机制之一。

钩吻素子体外诱导人结肠腺癌LoVo细胞凋亡的实验研究

目的探讨钩吻素子(Kou)体外能否诱导LoVo细胞凋亡。方法以Kou(50 μmol/L)作用于LoVo细胞,经光镜、电镜和荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并用流式细胞仪检测细胞增殖周期状态。结果通过光镜、电镜和荧光显微镜观察均证实Kou可诱导LoVo细胞凋亡,且凋亡百分率随Kou作用时间的延长而升高。经Kou作用后的肿瘤细胞,细胞周期状态发生明显变化,G0/G1期细胞从31.3%上升到42.3%,S期细胞从62.0%下降到38.7%。结论Kou可诱导LoVo细胞凋亡,且存在时间依赖关系,Kou可抑制细胞DNA的合成,阻止细胞由G1期向S期转化。

犀黄丸对大肠癌LoVo细胞基质金属蛋白酶2,9蛋白表达的影响

[目的]研究犀黄丸含药血清对大肠癌LoVo细胞中基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,MMP-9)表达的影响及意义。[方法]应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测犀黄丸含药血清作用下LoVo细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平。[结果]在犀黄丸含药血清的干预下,LoVo细胞中MMP-2、MMP-9的蛋白分泌水平与空白对照组比较明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]犀黄丸可能通过抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达,达到抑制大肠癌转移的作用。

放线菌酮和TNFα协同诱导Lovo细胞凋亡

目的探索放线菌酮和ＴＮＦα协同诱导人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞凋亡的发生规律．方法用细胞体外培养方法，以放线菌酮和ＴＮＦα均小剂量作用于人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞，经Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色，光镜观察形态改变，并用流式细胞术检测ＤＮＡ断裂情况．结果单用ＴＮＦα５×１０５Ｕ／Ｌ或放线菌酮４ｍｇ／Ｌ，均未引起Ｌｏｖｏ细胞凋亡效应．而两者协同，随作用１２ｈ～４８ｈ，Ｌｏｖｏ细胞渐出现明显的凋亡形态学改变和ＤＮＡ断裂．结论小剂量的放线菌酮和ＴＮＦα协同作用于人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞，出现明显的凋亡效应．

大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应

目的探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的调节效应。方法体外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24 h处理及大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间处理,采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋白表达位置并初步观察AQP2蛋白表达的变化趋势,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP2蛋白及mRNA的表达。结果AQP2表达于LoVo细胞的细胞膜,且与大黄素用药浓度及用药时间存在着相关性。进一步的Western blotting证实,不同质量浓度大黄素含药培养液均可抑制AQP2蛋白的表达,药物质量浓度愈大,AQP2蛋白的表达愈低,其中大黄素20 mg/L组及40 mg/L组AQP2蛋白表达显著性降低;大黄素作用3、6 h组,AQP2蛋白表达上升,但与对照组比较,无显著差异;作用12、24、48 h组,AQP2蛋白表达呈进行性下降趋势。半定量RT-PCR结果显示,随着大黄素质量浓度的增加,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势;在时间-效应方面,随着用药时间的延长,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势。结论大黄素可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译,这提示大黄素对AQP2表达的调节效应可能与大黄的泻下作用有关。

大黄酸对LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应

目的:探讨大黄酸对体外培养LoVo细胞水通道蛋白4(AQP4)的调节效应。方法:体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸含药培养液处理24 h及大黄酸含药培养液(20 mg/L)处理不同时间,其中不同浓度分为大黄酸高(40 mg/L)、中(20 mg/L)、低(10 mg/L)剂量组和正常对照组;不同作用时间分为3、6、12、24、48 h组和正常对照组。采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP4蛋白表达定位,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达。结果:AQP4主要表达于LoVo细胞的细胞膜上,在细胞浆也有少量表达。随着大黄酸用药剂量增加,AQP4表达持续下降;大黄酸低剂量组与正常对照组比较,AQP4表达下降但无显著性差异;大黄酸中、高剂量组,AQP4表达则呈显著性下降。在时间效应方面,大黄酸3、6 h组AQP4表达无显著性下降,但在12、24、48 h组则显著下降;同时研究发现,AQP4表达下降的程度与大黄酸剂量及大黄酸作用时间均存在相关性。结论:大黄酸可抑制LoVo细胞AQP4基因转录与翻译,提示大黄酸对AQP4表达的调节可能与大黄的泻下作用有关。

三氧化二砷诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡的细胞生物学研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响。方法 :选用不同剂量As2 O3 处理LoVo细胞后 ,通过光镜、电镜、MTT法、AO/EB荧光染色法和流式细胞术研究As2 O3 对LoVo细胞生长的影响。结果 :As2 O3 具有抑制Lo Vo细胞生长和其凋亡的作用 ,这种作用主要在低浓度 (0 5～ 2 0 μmol/L)产生 ,而在高浓度 (5 0～ 10 0 μmol/L)可引起细胞死亡。结论 :As2 O3 有明显抑制LoVo细胞生长的作用 ,并诱导细胞凋亡 ,其作用机制尚不清楚。

大蒜素对结肠癌LoVo细胞增殖的影响

目的:观察大蒜素对结肠癌细胞LoVo生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的LoVo细胞,倒置显微镜下观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对LoVo细胞增殖抑制能力,An-nexinV-FITC标记流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞的凋亡抑制率,流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞周期影响。结果:大蒜素可抑制人结肠癌LoVo细胞增殖,具有明显量效和时间依赖性,24、48和72h大蒜素抑制LoVo细胞的IC50分别为32.23、10.74和6.58μg/ml;大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,作用24h其诱导凋亡率随着药物浓度的递增具有增高趋势,作用48h其诱导凋亡作用峰值浓度为8μg/ml,后再继续增加浓度凋亡率反而下降;大蒜素作用LoVo细胞24h后,大蒜素浓度低于4μg/ml时,LoVo细胞周期被阻滞于G2/M;而高于4μg/ml时,细胞周期被阻滞于G2/M和G1期。结论:大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。

enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制作用

目的研究enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制活性。方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的细胞毒活性。结果enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株都有一定程度的抑制作用,其抑制活性呈现剂量-效应关系,其中以serrin B和nodosin效果较为显著。结论enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin是中药溪黄草拮抗白血病和结肠癌的有效成分,溪黄草具有一定的防治白血病和结肠癌的作用。

羟基喜树碱对结肠癌LoVo细胞凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响

目的 探讨羟基喜树碱治疗结肠癌LoVo细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、琼脂糖凝胶电泳、DNA末端原位标记染色法研究羟基喜树碱对结肠癌LoVo细胞生长及诱导凋亡的作用 ,采用WesternBlot法分析羟基喜树碱处理结肠癌细胞前后bcl 2、p5 3基因的表达情况。 结果 羟基喜树碱对结肠癌LoVo细胞生长具有较强的抑制作用 ,可诱导结肠癌细胞凋亡 ,且其凋亡作用呈浓度及时间依赖性。羟基喜树碱处理结肠癌LoVo细胞后 ,bcl 2基因表达下降 ,p5 3基因表达上升。结论 羟基喜树碱可诱导结肠癌细胞凋亡 ,可能与下调bcl 2基因及升高 p5

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与线粒体膜电位的变化

目的探讨23-羟基白桦酸对人结肠癌细胞株LoVo细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测23-羟基白桦酸对LoVo细胞的增殖抑制作用。Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果23-羟基白桦酸能抑制LoVo细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。Hoechst33258染色显示细胞凋亡特征。23-羟基白桦酸25、50、100及200μmol·L-1作用LoVo细胞48h后,其凋亡率分别为11.32%±0.92%、19.23%±0.78%、24.51%±5.88%及42.22%±2.32%,显示一定的剂量依赖性关系。与空白组相比,23-羟基白桦酸可明显降低LoVo细胞线粒体膜电位(P<0.01)。结论23-羟基白桦酸可抑制LoVo细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位继而诱导LoVo细胞凋亡有关。

抗-CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物特异性激活苦杏仁苷对LoVo细胞的细胞毒作用研究

目的 探讨一种新的前药苦杏仁苷在抗体导向酶解前药疗法中对人大肠癌细胞株LoVo的特异目的 探讨一种新的前药苦杏仁苷在抗体导向酶解前药疗法中对人大肠癌细胞株LoVo的特异性杀伤作用。方法 利用苦杏仁苷作前药,台盼蓝拒染法体外观察抗 CEA单抗 β 葡萄糖苷酶偶联物对苦杏仁苷的特异性激活以及对LoVo细胞的靶向细胞毒作用。结果 苦杏仁苷毒性低,而被抗 CEA单抗 β 葡萄糖苷酶偶联物作用后,细胞毒性增加约40倍,对表达CEA的LoVo细胞具有靶向细胞毒作用; 将LoVo细胞与MCF 7细胞以不同比例同培养发现,此细胞毒作用具有细胞选择性,细胞存活率随 LoVo细胞比例的增加而降低。结论 抗 CEA单抗 β 葡萄糖苷酶偶联物能特异性激活苦杏仁苷,对 LoVo细胞产生靶向杀伤作用,有可能成为一种新的肿瘤治疗方法,降低化疗的毒、副作用。

LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用

目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用。方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性。将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用。结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2·103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68·49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制。结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用。

重组苦瓜MAP30蛋白对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响

目的:克隆及重组苦瓜蛋白MAP30,观察MAP30对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法克隆MAP30基因的cDNA序列,并表达、纯化MAP30蛋白;MTT法测定纯化的MAP30蛋白对LoVo细胞的生长抑制作用;彗星实验观察MAP30引起凋亡的LoVo细胞基因组的降解情况。结果:成功克隆了苦瓜蛋白MAP30基因;MAP30蛋白对LoVo细胞体外生长具有抑制作用;MAP30蛋白对LoVo细胞半数抑制质量浓度(IC50)为70.0mg/L。MAP30在体外能诱导LoVo细胞凋亡。结论:重组的苦瓜MAP30蛋白在体外能抑制LoVo细胞生长,并能诱导其凋亡。

齐墩果酸诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡作用研究

目的研究齐墩果酸（oleanolic acid,OA）诱导人结肠癌LoVo细胞株凋亡的机制。方法应用浓度为2.00~32.00 mg.L-1OA作用于人结肠癌LoVo细胞12~96 h后,采用噻唑蓝（MTT）法检测OA对LoVo细胞的抑制作用,采用流式细胞术、Western blot印迹法等检测细胞周期变化、凋亡及Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3蛋白表达,在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果 OA呈时间-剂量依赖性抑制LoVo细胞增殖,能诱导LoVo细胞凋亡及阻滞细胞于G2/M期,OA作用LoVo细胞48 h后,各组的细胞凋亡率为10.32%~14.24%（P〈0.05）,并出现Bcl-2蛋白表达抑制,p53、Bax及Caspase-3活性增强。结论 OA可以促进人结肠癌LoVo细胞凋亡,其促凋亡机制与抑制Bcl-2表达及促进p53、Bax及Caspase-3表达有关。

大黄蒽醌衍生物对大鼠结肠及LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应

目的探讨大黄总蒽醌对SD大鼠的泻下效应及对结肠水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达的影响及大黄酸、大黄素对体外培养LoVo细胞AQP4的调节效应。方法雄性SD大鼠24只随机分为正常对照组、大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组,分别予大黄总蒽醌悬液或蒸馏水灌胃5天,观察大鼠结肠粪便含水量;应用Western blot、RT-PCR方法观察其近端结肠AQP4表达的变化。体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸/大黄素含药培养液作用24 h及大黄酸/大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间作用,采用Western blot及RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达。结果大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组作用后,大鼠结肠内粪便含水量明显增加,同时其近端结肠AQP4表达降低且表现为量效关系。大黄酸/大黄素能够显著下调体外培养LoVo细胞的AQP4蛋白及mRNA表达,且表现为剂量-效应及时间-效应关系。结论大黄总蒽醌在发挥泻下作用的同时,能够有效下调大鼠近端结肠AQP4的表达;大黄酸、大黄素可抑制体外培养Lo- Vo细胞AQP4的表达,可能是大黄泻下作用机制之一。

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与细胞内活性氧的关系

目的:研究23-羟基白桦酸诱导人结肠癌细胞株LoVo细胞凋亡过程中活性氧(ROS)的变化及其作用机制。方法:光学显微镜法观察23-羟基白桦酸作用LoVo细胞后细胞形态学改变,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内ROS水平。结果:分别以浓度为25、50、100、200μmol/L 23-羟基白桦酸作用LoVo细胞48h后,在光学显微镜下观察到明显的凋亡细胞形态学改变;经流式细胞仪检测,细胞凋亡率分别为(7.17±2.31)%、(15.60±4.02)%、(32.47±5.25)%及(52.71±5.93)%,呈现一定的浓度依赖性关系。23-羟基白桦酸可使LoVo细胞内ROS的水平明显高于空白对照组。细胞内ROS含量(MFI,平均荧光强度)分别为2.83±0.80、5.97±1.72、12.53±2.57及16.73±4.58。其中,浓度为100和200μmol/L 23-羟基白桦酸的作用较明显,与对照组(2.13±0.32)比有显著差异(P<0.05)。结论:23-羟基白桦酸具有明显的诱导LoVo细胞凋亡作用,其作用机制可能与23-羟基白桦酸引起细胞内ROS水平增加有关。

siRNA特异性沉默septin2基因抑制大肠癌LoVo细胞迁移

目的:检测新型骨架蛋白septin 2在不同转移能力的人结直肠癌细胞株中的表达水平,探究其在结直肠癌细胞迁移中的作用。方法:采用实时荧光定量RT-PCR及Western blotting检测septin 2基因及其蛋白在高转移潜能细胞株LoVo和低转移潜能癌细胞株HT-29、SW480、HCT-116中的表达;用siRNA干扰方法沉默高表达的septin 2基因,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效率,免疫荧光共聚焦实验观测干扰前后septin 2蛋白表达的变化,划痕实验检测干扰前后细胞的迁移能力。结果:septin 2在LoVo细胞的表达水平显著高于HT-29、SW480及HCT-116细胞(P<0.05)。沉默septin 2基因后,LoVo细胞septin 2 mRNA表达降低(P<0.05);septin 2与纤维状肌动蛋白(F-actin)存在共表达;F-actin表达减弱,应力纤维减少,片状伪足细而短;细胞迁移能力减弱。结论:septin 2基因在LoVo细胞高表达,干扰其表达能导致细胞骨架重构,从而降低细胞迁移能力。