RNA干扰LOXL2基因对头颈部鳞状细胞癌凋亡及PD-L1表达的影响

目的:探讨抑制赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)基因表达对头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)增殖凋亡及PD-L1表达的影响研究。方法:通过Western blot检测人HNSCC细胞YCU-H891、YCU-N861和KB中LOXL2的蛋白表达。以Lipo-fectamineTM2000为载体,参照其说明将合成的LOXL2 siRNA转染KB细胞,转染48 h后,Western blot检测LOXL2、PD-L1、STAT3、p-STAT3、PCNA和Bax的蛋白表达; CCK8及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率。结果:LOXL2在YCU-H891、YCU-N861和KB中表达均升高。转染LOXL2 siRNA的KB细胞LOXL2的蛋白表达明显降低,与空白组和NC组比较差异均具有统计学意义(P<0. 05)。转染LOXL2 siRNA的KB细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,PD-L1、p-STAT3和PCNA的蛋白表达均明显降低,Bax的蛋白表达明显升高,与NC组比较,差异均具有统计学意义(P<0. 05)。结论:RNA干扰抑制LOXL2基因可降低HNSCC细胞活力和诱导凋亡,下调PD-L1表达,机制可能与抑制STAT3信号通路有关。

沉默LOXL2表达对卵巢癌SKOV3细胞生长及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨沉默LOXL2表达对卵巢癌SKOV3细胞活力、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:采用Western blot法检测不同卵巢癌细胞(SKOV3、A2780、8910、OVCAR3)和正常卵巢上皮细胞IOSE80中LOXL2蛋白相对表达量;将设计合成的LOXL2特异性siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞(干扰组),以转染阴性对照siRNA的细胞为阴性对照组(NC组),未转染细胞为空白对照组。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot法检测各组细胞中LOXL2、Wnt/β-catenin信号通路蛋白(β-catenin、Cyclin D1和Bax)表达。结果:卵巢癌SKOV3细胞中LOXL2蛋白表达最高(P<0.05);干扰LOXL2的表达后SKOV3细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,与空白对照组和NC组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组和NC组相比,干扰LOXL2的表达后细胞中β-catenin和Cyclin D1的表达水平降低(P<0.05),Bax的表达水平升高(P<0.05)。结论:沉默LOXL2表达可在体外抑制卵巢癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

siRNA干扰LOXL2基因在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的相关性研究

目的:对siRNA抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞LOXL2的表达进行研究,探讨LOXL2基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)增殖、凋亡、侵袭能力的影响及机制。方法:分离、培养瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞,使用qRT-PCR技术检测瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)与正常皮肤成纤维细胞(NFs)中LOXL2基因的表达。将si-NC,si-LOXL2基因转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,并将其分为3组,KFs组,LOXL2阴性对照组(si-NC),LOXL2抑制表达组(si-LOXL2)。转染48h后,Western blot技术检测转染效率,CCK-8法检测成纤维细胞的增殖情况,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测成纤维细胞的细胞凋亡情况,Transwell小室检测成纤维细胞的细胞侵袭情况。结果:LOXL2基因在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达显著高于正常皮肤软组织成纤维细胞(P<0.05)。三组瘢痕疙瘩成纤维细胞中LOXL2 mRNA和蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.05),si-LOXL2组低于其他两组(P<0.05)。三组细胞凋亡、增殖、迁移情况差异具有统计学意义(P<0.05),si-LOXL2组增殖减少,迁移率降低,凋亡增加(P<0.05)。结论:抑制LOXL2基因表达可影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭能力。