LP17对大鼠肠巨噬细胞超微结构的影响

目的:通过观察LP17对体外培养的大鼠肠巨噬细胞超微结构的影响,探讨LP17对激活的肠巨噬细胞的作用机制,寻找对肠黏膜屏障功能障碍的可能治疗方法。方法:体外分离、培养大鼠肠巨噬细胞分为对照组[未加脂多糖(LPS)和LP17处理],及实验组[包括LPS组(用LPS处理)和LPS+LP17组(用LPS及LP17处理)]。给药浓度为LPS 1 mg/L,LP17 0.1 mg/L,培养6 h后用0.25%胰酶消化收集细胞。Tecnai 12透射电镜观察实验组及对照组大鼠肠巨噬细胞的超微结构变化。结果:经药物处理后,电镜下观察,对照组为正常巨噬细胞,实验组中LPS组巨噬细胞内出现大量溶酶体,LPS+LP17组巨噬细胞出现凋亡小体。结论:LP17能促使被激活的巨噬细胞凋亡。

LP17多肽对小鼠肠缺血再灌注损伤影响

目的：探讨LP17多肽对小鼠肠缺血再灌注（ IIR）损伤影响。方法将36只小鼠按数字表法随机分为假手术组（ S组）、IIR组（ I/R组）、IIR＋LP17对照肽治疗组（ C1组）、IIR＋LP17治疗组（ C2组）,每组9只。肠系膜上动脉夹闭20 min制作小鼠IIR模型,于再灌注前5 min将药物注入小鼠腹腔,24 h后处死小鼠,检测血清中可溶性髓样细胞触发受体-1（ sTREM-1）和肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）的浓度,观察肠黏膜损伤程度,免疫组化法检测肝脏细胞的核因子-κB（ NF-κB）的表达情况。结果血清sTREM-1、血清TNF-α和肝脏细胞NF-κB在I/R组和C1组升高,分别为（1686.34±55.98）pg/ml、（121.81±8.01） pg/ml、（3.36±0.62）表达和（1643.73±65.45） pg/ml、（119.88±8.05）pg/ml、（3.21±0.94）分；在C2组降低,分别为（944.58±39.75）pg/ml、（65.92±4.91）pg/ml和（0.92±0.55）分,与I/R组和C1组比较,差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。光镜下S组小鼠小肠黏膜基本正常；I/R组和C1组绒毛破坏较重,绒毛坏死明显,黏膜下水肿、炎性细胞浸润更加明显,肠壁各层均变薄；C2组肠绒毛损伤明显减轻,其肠黏膜损伤评分与其他各组比较,差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。结论 LP17多肽通过调节TREM-1的信号转导通路,减轻NF-κB和TNF-α过度激活所致炎症反应,减轻IIR引起的肠黏膜及远隔脏器的损伤。

髓系细胞触发受体1的信号传导在小鼠内毒素性急性肺损伤中的研究

目的通过特异性激活或阻断髓系细胞触发受体1(TREM-1),观察其在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的信号传导通路。方法小鼠随机分为生理盐水对照组、ALI组、单抗组和LP17组。腹腔注射脂多糖(LPS)复制小鼠ALI模型。ALI造模2 h后,单抗组小鼠腹腔注射抗TREM-1mAb(250μg/kg),LP17组尾静脉注射LP17人工合成肽(3.5 mg/kg)。采用免疫组化法测定各组6、12、24、48 h肺组织中核转录因子κB(NF-κB)活性的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各时点血清及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、可溶性TREM-1(sTREM-1)和TREM-1的含量;观察各组各时点肺组织形态学改变,比较肺组织病理Smith评分。结果在造模后予以抗TREM-1mAb特异性激活TREM-1,可显著提高48 h时间点NF-κB在肺组织中的表达,导致肺组织及血清中促炎因子大量生成,肺组织病理Smith评分上升。在造模后予以LP17人工合成肽特异性阻断TREM-1则可导致肺组织NF-κB活性程度下调,下调促炎因子,同时小幅度上调抗炎因子,使肺组织病理Smith评分下降。结论 TREM-1表达可通过NF-κB激活途径促进炎症因子的生成,启动炎症反应,导致ALI的肺部病理改变。

髓系细胞触发受体-1对大鼠肠巨噬细胞凋亡的影响

目的 探讨髓系细胞触发受体-1 （triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）的表达对大鼠肠巨噬细胞凋亡的影响.方法 体外培养肠巨噬细胞,实验3分组,每组6孔：对照组、LPS组及LPS＋LP17组.加入药物LPS（1 mg/L）和LP17 （0.1 mg/L）,培养6h后用TUNEL试剂盒及流式细胞仪对大鼠肠巨噬细胞凋亡进行检测,利用SPSS 18.0软件进行统计分析.结果 细胞生长状态良好,分布均匀,细胞活力约为80％～85％,CD14免疫荧光鉴定证实为肠巨噬细胞.经药物处理后,TUNEL检测细胞凋亡情况：LPS组（44.33±7.74）％较对照组（19.17±6.01）％明显增多（P=0.000）,LPS＋ LP17组（28.33±6.53）％的凋亡细胞比LPS组（44.33±7.74）％明显减少（P =0.004）,对照组（19.17 ±6.01）与LPS＋ LP17组（28.33±6.53）％的凋亡细胞差异无统计学意义（P =0.050）.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况：LPS组（16.47±1.66）％较对照组（7.70±1.52）％明显增多（P=0.000）,LPS＋LP17组（11.47±3.12）％的凋亡细胞比LPS组（16.47±1.66）％明显减少（P=0.018）,对照组（7.70±1.52）％与LPS＋ LP17组（11.47±3.12）％的凋亡细胞差异无统计学意义（P =0.061）.结论 LP17能抑制肠巨噬细胞TREM-1的表达,减少肠巨噬细胞凋亡.

大鼠重症急性胰腺炎肺损伤时髓系细胞触发受体-1的表达

目的探讨重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）引起急性肺损伤（acute lung injury，ALI）时髓系细胞触发受体一1（triggering receptor-1 on myeloid cells，TREM-1）以及相关炎症因子的表达。方法雄性SD大鼠24只，随机（随机数字法）分为SO组（假手术组）、SAP组和SAP＋LP17组（LP17为人工合成的TREM-1多肽），每组8只，采用逆行胰胆管技术制备SAP大鼠模型。于造模后12h提取胰腺及左肺组织，苏木精-伊红（HE）染色观察胰腺和肺组织的病理形态学变化；免疫组织化学法采用巨噬细胞特异性抗体CD68检测巨噬细胞浸润情况；通过荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR法）检测肺组织TREM-1、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA的表达量。计量资料采用均数4-标准差（^-x±s）表示，采用SPSS17．0统计软件进行单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果HE染色结果显示，SAP组胰腺及肺组织损伤程度均较SO组及SAP＋LP17组增高，其病理评分均较SO组及SAP＋LP17组高（P〈0．05）；免疫组化染色结果显示，SAP组肺组织巨噬细胞较SO组浸润明显；SAP组肺组织TREM-1 mRNA的表达水平较SO组及SAP＋LP17组均显著增高（P〈0．01或P〈0．05），IL-1β和TNF-α mRNA表达水平亦较SO组及SAP＋LP17组显著增高（P〈0．01或P〈0．05）。结论TREM-1在SAP急性肺损伤中表达显著增高，可能是SAP引起ALI机制中的一个重要炎症调节介质。LP17可以有效降低TREM-1的表达，减少炎症因子的释放，从而有利于减轻SAP引起的ALI。