O型口蹄疫疫苗免疫牛抗体消长动态的LPB-ELISA检测

分别按一次免疫、首免后第15 d加强免疫和首免后第60 d加强免疫程序,对3组试验牛(每组牛20头)用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果,首免后第15 d加强免疫牛和第60 d加强免疫牛抗体水平较高,50%保护牛所占比例分别为56.3%和63.1%,完全受保护的牛所占比例分别为34.3%和29.5%。第60 d加强免疫牛的保护率要高于第15 d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明,首免后第60 d加强免疫是最理想的免疫程序。

口蹄疫O型LPB-ELISA免疫抗体高通量定性检测技术的建立

为提高偶蹄动物口蹄疫O型液相阻断酶联免疫吸附(LPB-ELISA)免疫抗体检测效率,优化动物疫情监测策略,提高动物疫病防控效能。结合基层一线对免疫质量评价实际需求及财力人力等因素,在该试验通用操作步骤基础上,特对操作步骤及96孔ELISA板检测样品布局进行了技术改进。改进后的1块ELISA板可检测样品80份,在检测通量上较试剂盒使用说明书标明1块ELISA板可检测样品10~20份增加到4~8倍,在ELISA板检测样品利用率上从10.42%~20.83%提高到83.33%,在检测费用、检测时效及人力成本上则可压缩4~8倍。同时,亦可减少试验废弃物产生量,有一定的社会效益及生态效益。改进后的口蹄疫O型LPB-ELISA免疫抗体高通量定性检测技术,适用于大样本情况下以免疫抗体合格率为指标的免疫质量评价工作,尤其对检测数量多、经费人员配置有限,且要求出结果快的基层一线,具有很好的现实操作性和借鉴性。

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度和中和抗体滴度相关性的比较研究

为了评价口蹄疫液相阻断LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度、中和抗体滴度的关系,本研究对野外采集的38份牛血清分别进行LPB-ELISA、正向间接血凝(IHA)和微量细胞中和试验(VNT),检测各份血清的LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度和中和抗体滴度,并进行相关性分析比较。结果表明LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度相关性极显著,相关系数r=0.489(P<0.01);LPB-ELISA抗体滴度和血凝抗体滴度相关系数仅为0.149,血凝抗体滴度和中和抗体滴度相关系数为0.179,相关性均不显著。本研究为利用LPB-ELISA方法进行口蹄疫血清学监测和普查提供了试验依据。

口蹄疫病毒抗体SPC-ELISA定性检测与LPB-ELISA定量检测方法的比较

为评估固相竞争ELISA(SPC-ELISA)定性检测与液相阻断ELISA(LPB-ELISA)定量检测口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)抗体的符合度和一致性,以2022年春季从规模猪场、牛场、羊场采集的300份血液样本为试验对象,分别应用SPC-ELISA定性和LPB-ELISA定量检测方法进行O、A型FMDV抗体检测,对检测结果应用统计软件GraphPad Prism 8中的χ~2检验进行差异显著性统计与分析,采用Kappa统计量分析两种ELISA检测方法的一致性。结果显示:SPC-ELISA检测两种抗体的阳性率总体均略高于LPBELISA,但差异不显著(P> 0.05)。两种方法检测O型FMDV抗体总符合率为94.81%,Kappa值为0.8;检测A型FMDV抗体总符合率为91.48%,Kappa值为0.7。结果表明,两种方法检测结果符合度高,且高度一致。因此,在FMDV抗体检测时可根据实际需要任意选择其中一种使用。本研究为技术人员在实际工作中科学选择检测方法提供了参考。

犊牛口蹄疫O型灭活苗两种不同免疫程序的免疫效果比较

为了研究犊牛口蹄疫O型灭活苗不同免疫程序的免疫效果，本试验采用2种免疫方案对犊牛进行口蹄疫O型灭活苗免疫，即免疫程序A在口蹄疫O型母源抗体和免疫抗体监测值接近临界值时进行免疫，免疫途径为肌肉注射，免疫剂量按疫苗说明书要求；免疫程序B的首免和二免时间比免疫程序A提前一周进行，方法同免疫程序A。免疫后不同时间采用液相阻断酶联免疫吸附试验（LPB-ELISA）检测血清口蹄疫0型抗体水平。结果表明：A组犊牛在90日龄进行首免，免疫后14天抗体水平达到有效保护水平，免疫后28天部分犊牛抗体水平下降到临界保护水平之下；首免后1个月（120日龄）进行加强免疫，二免后的免疫抗体水平对牛群的保护一直维持到免疫后120天；二免后4个月（240日龄）进行三免，免疫保护期持续4个月。但首免前和二免前抗体效价相对较低，接近临界值。B组犊牛的免疫抗体变化规律同免疫程序A，但产生高效价抗体的时间提前，整个免疫期抗体水平均处于较高水平，可提供有效保护。说明免疫程序B的免疫效果优于免疫程序A。

LPB—ELISA对新生牛血清中口蹄疫抗体的检测

口蹄疫是由于口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的一种急性、热性、高度接触性和可快速远距离传播的动物疫病,被国际畜疫局(OIE)列为A类传染病之首.为了掌握新生牛血清中口蹄疫抗体的情况,从而为口蹄疫疫苗企业提供不含该抗体的优质新生牛血清.本试验采用液相阻断酶联免疫(LPB-ELISA)方法对20个批号新生牛血清样品中口蹄疫O型和亚洲I型抗体进行了检测,其中O型病毒抗原对照平均D492nm值50%值(临界值)为0.432;亚洲I型病毒抗原对照平均D492nm值50%(临界值)为0.897;20个新生牛血清样品亚洲I型和O型的D492nm值均大于临界值,表明各样品均显阴性,来自没有感染口蹄疫病毒或没有接种疫苗的动物.

应用固相竞争ELISA、液相阻断ELISA和中和试验检测口蹄疫抗体的比较研究

为了评价建立的口蹄疫固相竞争酶联免疫吸附试验(solid phase competition ELISA,SPC-ELISA)方法与传统的中和试验(VNT)和液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA,LPB-ELISA)检测方法之间的关系,本研究对野外采集的不同种类的猪、牛和牦牛共94份血清样品分别进行O型口蹄疫病毒SPC-ELISA、LPB-ELISA和VNT检测,并分别比较3种方法的符合率和阳性检出率。结果表明,建立的O型口蹄疫病毒SPC-ELISA方法与VNT具有很好的符合率,达88.3%,其中,猪和牦牛血清符合率高达90%和89.5%,阳性检出率为91.2%比LPB-ELISA更符合VNT,因此建立的SPC-ELISA方法比LPB-ELISA方法更符合VNT。

仔猪口蹄疫母源抗体消长规律监测

在贵阳某规模化养猪场,随机选取20头仔猪,采用正向间接血凝试验(IHA)、液相阻断ELISA(LPB-ELISA)两种血清学方法,对O型口蹄疫母源抗体的消长规律进行监测和分析。结果表明,13日龄左右抗体效价最高,IHA、LPB-ELISA监测的抗体平均效价分别是2.76、2.74,母源抗体免疫合格率分别为90%、85%,在23日龄左右平均效价均为为2.45,母源抗体免疫合格率均为75%,大部分仔猪仍被母源抗体保护,随着日龄的增加,抗体效价呈明显的线性下降,到36日龄左右抗体平均效价分别是1.98、1.95,母源抗体免疫合格率均为55%,45%的仔猪抗体效价低于保护临界值。因此,36日龄确定为仔猪首次免疫时间。两种方法监测的结果无显著差异(P>0.05)。

口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA试验的测量不确定度评估

为探索一种较为合理的兽医实验室ELISA试验的测量不确定度评估模式,应用液相阻断ELISA试验方法,对口蹄疫O型抗体进行检测,依据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059.1—2012),分析试验的不确定来源并评定各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度。结果显示:最终cutoff临界值与样品判定浓度的OD_(450 mm)值的比值为1.390,U=0.221(k=2);测量不确定度的加入提升了测量结果的可信度,并有效降低了假阳性、假阴性出现的风险;分析不确定度各分量对测量结果的相对贡献,可以找出影响检测质量的主要因素,从而有利于实验室的质量控制和检测质量的提高。