LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞HNE1生长增殖的抑制作用研究

LPLUNC1在正常的鼻咽组织及人胚鼻咽组织中高表达,而在71%的鼻咽癌中表达下调或缺失,是与鼻咽癌的发生发展密切相关的新基因.通过研究LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞系HNE1的影响,进一步确定其与鼻咽癌发生发展的关系.将LPLUNC1基因全长cDNA克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,通过脂质体介导稳定转染入LPLUNC1低表达鼻咽癌细胞系HNE1中,通过RT-PCR及RNA印迹筛选LPLUNC1高表达的细胞株,并利用细胞生长曲线、MTT、BrdU掺入、流式细胞仪检测、软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤等实验,研究了LPLUNC1对鼻咽癌细胞系HNE1细胞生长、增殖的影响.结果发现,稳定转染LPLUNC1的HNE1细胞的生长速度明显减慢,在MTT与BrdU掺入实验发现LPLUNC1可明显地抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且通过流式细胞仪检测也发现,LPLUNC1基因可明显延缓HNE1细胞的细胞周期进程,使G0/G1期细胞增多而S期细胞相对减少.进一步通过软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验发现,LPLUNC1稳定转染后的HNE1细胞集落形成率与集落的大小均小于空白载体细胞,同时能明显地抑制HNE1细胞的体外成瘤.结果表明,LPLUNC1基因能明显抑制鼻咽癌细胞HNE1的生长增殖,是鼻咽癌发生发展中的重要候选抑瘤基因之一.

LPLUNC1对上呼吸道抗感染防御机制的影响

目的:拟以LPLUNC1作为上呼吸道抗感染的候选分子,探讨其在宿主细胞内抗感染防御的作用机制。方法:应用GST蛋白纯化法获取LPLUNC1融合蛋白,并采用微量肉汤稀释法测定LPLUNC1蛋白对革兰阴性菌绿脓杆菌细菌集落形成的影响;通过体外脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)结合实验、细胞凋亡测定法探讨LPLUNC1体外结合绿脓杆菌LPS成分的能力和诱导靶细胞发生细胞凋亡的程度,并通过ELISA、Western blot印记实验分析了解LPLUNC1-LPS的结合对小鼠RAW 264.7靶细胞膜CD14受体以及胞内细胞因子TNF-α表达的影响。结果:LPLUNC1没有明显的直接抑制革兰阴性菌的特性,也不具备明显的直接杀伤革兰阴性菌的功能,但它可与革兰阴性菌LPS成分特异结合,对LPS有高度敏感性。LPLUNC1与LPS结合后可抑制CD14受体和TNF-α的表达。结论:LPLUNC1通过高度结合革兰阴性菌LPS成分,阻抑CD14介导的信号转导途径,抑制细胞内TNF-α等细胞因子的表达,引发宿主上呼吸道抗感染防御。

40例胃粘膜及胃癌组织的LPLUNC1表达分析

目的:探讨LPLUNC1蛋白在胃癌及正常胃粘膜中的表达。方法:免疫组化检测40例胃癌及对应癌旁组织LPLUNC1的表达及其分布特点,分析LPLUNC1在胃癌及对应癌旁组织的表达差异。结果:LPLUNC1表达于胃粘膜上皮和胃底腺,在胃癌中表达明显下调或缺失,LPLUNC1在正常胃粘膜组织中的表达率为92.5%(37/40),且均呈现强阳性表达,胃癌中LPLUNC1的表达率为40%(16/40),表达强度也不一致。结论:LPLUNC1在胃癌组织中表达下调或缺失,而在正常胃粘膜及粘膜腺体中出现表达,两者在表达率和表达强度上存在显著差异(P<0.001),提示LPLUNC1的表达下调或缺失与胃癌的发生存在一定的关系。