藏药秦艽花黄酮提取物对LPS/ATP复合诱导巨噬细胞焦亡的影响

目的:探讨藏药秦艽花黄酮提取物对LPS/ATP复合诱导小鼠单核巨噬细胞焦亡的影响,为民族药物深度开发利用提供科学依据。方法:实验采用倒置荧光显微镜观察小鼠单核巨噬细胞形态,首先测定藏药秦艽花黄酮提取物对J774A.1小鼠单核巨噬细胞的最大无毒浓度,采用ELISA法检测细菌脂多糖、脂多糖+三磷酸腺苷、LPS+藏药秦艽花黄酮提取物(TC_(-2)、TC_(-1)、TC_(0))+三磷酸腺苷分别与小鼠单核巨噬细胞共培养,测定培养上清液中caspase-1、IL-1β、IL-18的水平及LDH的含量,同时探讨对cAMP-PKA信号通路的影响。结果:藏药秦艽花黄酮提取物对小鼠单核巨噬细胞最大无毒浓度为5.53 mg/mL,LPS致敏巨噬细胞,在ATP作用下,细胞焦亡率48.76%;不同浓度的藏药秦艽花黄酮处理致敏巨噬细胞后,在ATP作用下,细胞焦亡率分别为4.55%(TC_(0))、7.21%(TC_(-1))、21.30%(TC_(-2))且呈剂量依赖性。同时,有效降低小鼠单核巨噬细胞Caspase-1、IL-1β、IL-18及LDH细胞因子水平;同时,LPS+MDL1233+ATP、LPS+H89+ATP诱导体系细胞焦亡率分别为62.11%和64.52%,经藏药秦艽花黄酮提取物处理后的小鼠单核巨噬细胞焦亡率分别为6.39%、8.84%。结论:藏药秦艽花黄酮提取物通过cAMP-PKA信号通路影响cAMP、PKA活性,剂量依赖性地抑制LPS/ATP诱导小鼠单核巨噬细胞焦亡,对炎症小体NLRP3异常活化和细胞焦亡相关疾病具有潜在治疗价值。

内毒素诱导的TLR4信号转导通路研究进展

TLR4是内毒素(LPS)激活信号转导的受体。LPS首先与LPS结合蛋白(LBP)结合,再传递给CD14分子,形成LPS -LBP- CD14复合物,该复合物与TLR4 MD2相互作用,通过激活细胞内的信号通路而最终导致核因子- κB(NF- κB)、活化蛋白1(AP -1)等核转录因子的活化,从而诱导炎症细胞因子包括TNF- α、IL- 1、IL- 6、NO等的大量表达引发脓毒症。对TLR4的研究使我们可以从阻断TLR4信号通路中发挥毒性作用的环节来预防和治疗脓毒性休克。