左旋紫草素抑制NF-κB信号通路保护LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤

目的探讨左旋紫草素(L-Shikonin,L-SK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞的体外抗炎作用及其对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用。方法体内实验采用LPS/D-GalN建立小鼠急性肝损伤模型,考察存活率和各组小鼠的肝脾指数变化,测定血清中AST、ALT、AKP与肝组织匀浆中的NO含量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,HE染色观察各组小鼠肝组织病理切片。体外实验采用MTT法检测细胞存活率、Griess法检测NO含量、RT-PCR和Western blot检测分别考察L-SK对LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子的mRNA和相关通路蛋白表达水平的影响。结果体内实验结果表明,L-SK可明显改善急性肝损伤小鼠的肝脾指数,血清中AST、ALT和AKP水平明显下降,肝匀浆中的NO和MDA含量明显下降,SOD活性提高,能明显改善小鼠肝组织病理性损伤。体外实验结果表明,L-SK能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中的INOS、COX2、IFN-β以及促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA表达,并且明显抑制INOS、COX2蛋白表达以及NF-κB信号通路蛋白表达。结论L-SK在LPS诱导的RAW264.7细胞的体外炎症中具有良好的抗炎作用,通过抑制NF-κB信号通路中的磷酸化p65以及IKKα/β的蛋白表达,从而发挥体外抗炎作用,同时L-SK对小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗炎作用相关。

紫丁香苷对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用研究

旨在探究紫丁香苷(syringin,SY)对脂多糖(LPS)联合D-半乳糖胺盐酸盐(D-GalN)、(LPS/D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其潜在机制。将40只昆明鼠随机分为4组,分别为正常对照组(NC)、LPS/D-GalN模型(LD)组、SY低剂量(LSY+LD)组、SY高剂量(HSY+LD)组,每组10只。LSY+LD组、HSY+LD组采用腹腔注射方式给予SY(25、50 mg/kg),NC组和LD组分别腹腔注射等量的生理盐水,连续3 d,在第3天预防性给药1 h后,腹腔注射LPS/D-GalN建立急性药物肝损伤模型。造模6 h后,试验小鼠眼静脉取血,处死小鼠;检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;检测肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)的水平,观察肝脏氧化应激的水平;制作肝组织切片,采用苏木精伊红(HE)观察肝脏的组织变化;利用免疫组化观察激活的核转录因子p65(NF-κBp65)入核状态;ELISA法检肝匀浆IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的水平。结果表明:与NC组相比,LD组AST、ALT的水平显著增高(P<0.01),肝血管严重出血,肝脏大面积实质性坏死,胞核碎裂、崩解,肝脏中SOD、GSH、CAT水平显著降低(P<0.05),NF-κBp65核转移率提高,肝脏中IL-6,IL-1β、TNF-α炎性因子水平显著升高(P<0.01);SY组可显著降低小鼠血清中AST、ALT的活性(P<0.05),肝组织病理变化明显减轻,肝脏SOD、CAT的活性与GSH的水平提高(P<0.05);NF-κBp65核转移发生抑制;IL-6,IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结果表明SY(25、50 mg/kg)对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝脏损伤具有保护作用且具有剂量依赖性,其作用机制与SY可提高抗氧化酶活性,抑制炎性因子的产生有关。

LP-PLA2、HCY、D-D与低年龄段急性心肌梗死发病风险的相关性

目的 分析脂蛋白磷脂酶A2 (LP-PLA2)、同型半胱氨酸(Hcy)和D-二聚体(D-D)与低年龄段急性心肌梗死(AMI)发病风险的相关性。方法 选取2020年1月至2023年1月于郑州大学医院及郑州大学第一附属医院就诊的312例稳定型冠心病患者,根据6个月内AMI发病情况,分为AMI组(n=86)和无AMI组(n=226)。入院时和入院1个月后,采用循环酶法检测Hcy,采用干式荧光免疫法检验LP-PLA2,采用胶乳增强免疫透射比浊法检测D-D,采用Logistics回归模型分析低年龄段AMI发病的危险因素,采用Spearman相关性分析LP-PLA2、HCY、D-D水平与AMI发病的相关性。结果 AMI组和无AMI组性别、吸烟史、高血脂史间比较差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、高血压史、饮酒史、家族史、糖尿病史和NYHA分级等资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。入院时和1个月后,AMI组血清LP-PLA2、Hcy和D-D水平均明显高于无AMI组,差异有统计学意义(入院时:t=7.291、4.672、6.696,P<0.001;1个月后:t=16.783、8.974、11.360,P<0.001)。入院LP-PLA2>175μg/L、入院Hcy>15μmol/L、入院D-D>0.5 mg/L,1个月LP-PLA2>175μg/L、1个月Hcy>15μmol/L、1个月D-D>0.5 mg/L为影响低年龄段AMI发病风险的独立危险因素(P<0.05)。低年龄段AMI发病风险与入院时血清LP-PLA2、HCY、D-D水平均呈正相关(r=0.826,0.775,0.724,P<0.05)。结论 冠心病患者入院时LP-PLA2、Hcy和D-D水平与AMI发病有相关性,三指标是低年龄段AMI发病风险的独立危险因素。

血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)、25(OH)D水平与老年冠心病患者病情严重程度及心功能分级的相关性

目的:观察血浆同型半胱氨酸(Hcy)、D-二聚体、脂蛋白a[Lp(a)]及25羟维生素D[25(OH)D]水平与老年冠心病患者病情严重程度及心功能分级的相关性。方法:选取2021年2月至2022年2月该院收治的100例老年冠心病患者进行横断面研究,设为冠心病组。另选取同期100名健康体检者进行横断面研究,设为健康组。比较两组血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)及25(OH)D水平;比较冠心病组不同病情严重程度、不同心功能分级患者的血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)及25(OH)D水平;采用Spearman相关性分析,分析血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)及25(OH)D水平与冠心病患者病情程度、心功能分级的相关性。结果:冠心病组血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)水平均高于健康组,血浆25(OH)D水平低于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度冠心病患者血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)水平高于中度和轻度患者,且中度患者高于轻度患者;重度冠心病患者血浆25(OH)D水平低于中度和轻度患者,且中度患者低于轻度患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级Ⅳ级冠心病患者血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)水平高于Ⅲ级、Ⅱ级患者,且Ⅲ级患者高于Ⅱ级患者;NYHA心功能分级Ⅳ级冠心病患者血浆25(OH)D水平低于Ⅲ级、Ⅱ级患者,且Ⅲ级患者低于Ⅱ级患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)水平与冠心病患者病情严重程度、心功能分级均呈正相关(r>0,P<0.05);血浆25(OH)D水平与冠心病患者病情严重程度、心功能分级均呈负相关(r<0,P<0.05)。结论:血浆Hcy、D-二聚体、Lp(a)水平与老年冠心病患者病情严重程度、心功能分级均呈正相关,血浆25(OH)D水平与老年冠心病患者病情严重程度、心功能分级均呈负相关。

LPS／D-GalN 诱导小鼠急性肝损伤模型的建立

目的建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)诱导小鼠急性肝损伤模型。方法 40只雌性C57BL/6小鼠用于观察8种不同LPS与D-GalN剂量配比联合刺激后小鼠存活时间,以确定模型建立的最佳剂量。使用腹腔注射最佳剂量染毒32只雌性C57BL/6小鼠,分别在0、1、4、8 h处死,每组8只,0 h注射相同剂量生理盐水作为对照。观察染毒后小鼠肝组织病理损伤,检测血清中ALT及炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α表达水平变化。结果通过观察小鼠存活时间,确定腹腔注射最佳染毒剂量为LPS(2.5 mg/kg)/D-GalN(0.3 g/kg);小鼠染毒后肝组织呈进程性病变,最终发展为肝脏弥漫性坏死,肝细胞核崩解。与对照组相比,血清ALT显著升高(P<0.001),IL-6、MCP-1、TNF-α均在1 h后达到最高水平(P<0.001),然后持续下降。结论成功建立LPS/D-GaIN诱导小鼠急性肝损伤模型,为探索急性肝损伤的致病机制以及药物干预治疗提供有效的动物模型。

沙棘多糖提取物对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其对TLR4,SOCS3表达的调控

目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200 mg/kg沙棘多糖溶液连续灌胃14 d。通过腹腔注射LPS(10μg/kg)和DGal N(700 mg/kg)建立急性肝损伤模型,阳性药物组在建模前腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)。建模4 h后采集血清和肝脏组织,检测血清ALT和AST水平,HE染色观察沙棘多糖提取物对肝损伤的影响。Western blot检测TLR4,SOCS3的表达情况。结果:沙棘多糖提取物显著降低了LPS/D-Gal N诱导的小鼠血清中ALT和AST水平(P<0.01,P<0.05);HE染色观察显示,沙棘多糖明显减轻了肝细胞损伤和炎性细胞浸润。Western blot检测表明,沙棘多糖提取物抑制了LPS/D-Gal N诱导的TLR4的表达,但是对SOCS3的表达影响不明显。结论:沙棘多糖提取物有效抑制了LPS/D-Gal N诱导的肝损伤,这种保护作用可能是通过抑制TLR4的表达来发挥作用的,而非通过调控SOCS3来实现的。

LPS/D-GaLN诱导大鼠急性肝损伤动物模型的建立

目的建立脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GaLN)诱导大鼠急性肝损伤动物模型。方法将32只SD大鼠随机分为四组,腹腔注射不同剂量的LPS及300mg/kg的D-GaLN后观察大鼠的存活状态及存活时间,筛选最佳造模LPS剂量。确定最佳剂量后,另选40只SD大鼠随机分为8、24、48、72h模型组及对照组,模型组腹腔注射最佳剂量LPS/D-GaLN后,分别在造模8、24、48、72h处死,对照组给予同等剂量生理盐水腹腔注射。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化,观察肝组织病理变化。结果通过观察大鼠存活时间,结合肝组织病理表现,确定LPS(30μg/kg)/D-GaLN(300mg/kg)为最佳造模剂量;观察到造模后大鼠血清ALT、AST及TNF-α、IL-6水平显著升高,在24h达到高峰,之后逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理表现为肝细胞肿胀变性,出现片状坏死、融合坏死、炎症细胞浸润等表现。结论成功建立了LPS/D-GaLN诱导大鼠急性内毒素肝损伤动物模型,有利于保肝药物疗效的观察和机制的深入研究。

MNQ的一种衍生物对LPS体外诱导的牛卵巢卵泡颗粒细胞炎性损伤的保护作用

旨在采用凤仙花(Impatiens balsamina L)提取物2-甲氧基-1,4-萘醌(MNQ)的衍生物D_(19)消除体外暴露于脂多糖(LPS)中牛卵巢卵泡颗粒细胞(GCs)的炎症反应,并缓减由LPS引起的卵泡GCs功能性紊乱。本研究采集性成熟且健康的荷斯坦牛卵巢组织,分离并培养卵泡GCs。MTT法测定D_(19)和LPS对卵泡GCs存活率的影响。试验分为3组:对照组、LPS处理组和D_(19)联合LPS处理组,每组3个重复。qRT-PCR测定炎性因子和类固醇合成相关基因的相对表达量。TEM观察D_(19)对细胞炎性损伤的保护作用。ELISA检测培养液上清中雌二醇(E_(2))和孕酮(P_(4))的含量。结果表明,D_(19)对卵泡GCs作用12 h的最大安全浓度为64μmol·L^(-1)。LPS浓度为10μg·mL^(-1)时,作用12 h对卵泡GCs存活率影响不大,但炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的相对表达量显著升高(P<0.01),D_(19)+L组与LPS组比较炎性因子的相对表达量却显著降低(P<0.01)。通过TEM观察表明D_(19)对LPS引起的细胞器结构性损伤具有保护作用。ELISA结果表明,LPS处理后培养液中E_(2)和P_(4)的含量显著降低(P<0.01),qRT-PCR检测到类固醇合成相关基因CYP19A1、CYP11A1、3β-HSD和STAR的相对表达量也显著降低(P<0.01)。但D_(19)联合LPS处理后,E_(2)和P_(4)分泌量以及类固醇合成相关基因的相对表达量均比LPS组显著升高(P<0.01)。本研究证明MNQ的衍生物D_(19)具有消除LPS体外诱导卵泡GCs炎症反应的功能,并能一定程度缓减LPS导致的卵泡GCs功能性紊乱。

LPS/D-GalN诱发NF-κB转基因小鼠急性致死性肝损伤模型的建立

目的以NF-κB转基因BALB/c小鼠建立一个LPS/D-GalN诱发的急性致死性肝损伤模型。方法采取腹腔注射高剂量的LPS/D-GalN建立急性致死性肝损伤小鼠模型,观察模型小鼠的促炎症细胞因子水平和NF-κB的活性改变,以及肝脏功能和病理改变情况。结果模型组小鼠生存时间为8～10 h,模型建立后小鼠血清TNF-α、IL-6和MCP-1水平显著升高,在2～4h达到高峰;肝脏外观出现瘀血和出血,肝脏小叶被严重破坏,肝细胞严重坏死和出血;血清ALT/AST水平在模型诱发后持续迅速上升;整体成像显示NF-κB的活性在4～6 h达到高峰。正常对照组小鼠以上指标无显著变化。结论成功建立LPS/D-GalN诱发的NF-κB转基因小鼠的急性致死性肝损伤模型。

脂多糖/氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型的建立和评价

目的建立脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型.方法体外培养小鼠原代肝细胞,待其稳定贴壁生长后,加入(0.1、0.5、1、5)ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)和5 mg/mL D-GalN进行处理,全自动生化分析仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性反映肝细胞损伤.诱导骨髓来源巨噬细胞成熟,通过1μg/mL LPS刺激巨噬细胞产生TNF-α;巨噬细胞培养上清联合5 mg/mL D-GalN或50 ng/mL放线菌素D(ActD)处理原代肝细胞24 h,检测ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.原代肝细胞和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)共培养,LPS联合D-GalN或ActD对共培养体系处理24h,检测共培养细胞上清ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.结果TNF-α和D-GalN联合处理原代肝细胞,细胞培养上清ALT活性升高,表明肝细胞发生损伤.LPS刺激BMDM表达TNF-α明显增加,BMDM上清联合D-GalN能引起肝细胞培养上清ALT活性升高和肝细胞皱缩、破碎.肝细胞和BMDM共培养体系中,LPS联合D-GalN能够引起肝细胞损伤;但LPS联合ActD不能引起肝细胞损伤,显微镜观察发现巨噬细胞大量变圆、皱缩,提示巨噬细胞早于肝细胞发生死亡.结论LPS/D-GalN能在体外诱导肝细胞损伤;在利用BMDM和原代肝细胞共培养体系评价损伤效应时,应当用D-GalN而不是ActD作为转录抑制剂.

ATF4在CCl4和LPS/D-GalN介导小鼠肝损伤中的保护作用

目的利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究。方法建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-Gal N急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其mRNA水平。采用CRISPR-Cas9技术敲低ATF4后,分析检测两种模型中小鼠血清AST和ALT水平。为进一步探明ATF4的作用,采用内质网应激诱导剂衣霉素处理小鼠,Western blot检测小鼠肝、肺组织中ATF4、磷酸化-eIF2α、总eIF2α和Bip的蛋白水平。RT-PCR检测肝脏XBP1 mRNA的剪接形式(活性形式)和未剪接形式(非活性形式)。结果小鼠肝脏中的ATF4蛋白与其他组织相比异常增高。衣霉素能诱导小鼠体内内质网应激反应(如e IF 2α磷酸化),却引起小鼠肝脏中ATF4蛋白降低。在CCl4慢性肝损伤模型和LPS/D-GalN急性肝损伤小鼠模型中,肝脏ATF4蛋白明显降低。CRISPR-Cas9敲低肝脏ATF4后,两种小鼠模型中的血清AST和ALT进一步升高。结论 ATF4在小鼠肝损伤中起保护作用。

小柴胡汤对D-GalN/LPS诱导的虎龙杂交石斑鱼肝细胞损伤的保护作用

为探讨小柴胡汤对虎龙杂交石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)化学性肝细胞损伤的免疫功能影响,用D-氨基半乳糖(D-GalN,20 mmol·L^(–1))和脂多糖(LPS,1μg·mL^(–1))作用肝细胞24 h构建虎龙杂交石斑鱼肝细胞损伤模型,用不同质量浓度的小柴胡汤(100、200和400μg·mL^(–1))对肝细胞进行前处理[D-氨基半乳糖联合脂多糖(DGalN/LPS)损伤前加药],通过CCK-8法检测肝细胞活力,HE染色观察肝细胞形态,收集细胞上清液检测炎症因子INFγ、COX-2和PGE2的含量,以及细胞沉淀中凋亡和免疫相关基因的表达。结果表明,小柴胡汤可以提高肝细胞的成活率,不同程度地抑制D-GalN/LPS损伤引起的肝细胞培养上清液中INF-γ活性以及COX-2和PGE2含量的升高,降低细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞凋亡率,对肝细胞结构具有明显的保护作用;同时显著抑制凋亡相关基因caspase-3、caspase-9和P53的上调,促进免疫相关基因TLR3的上调。数据统计分析显示,添加200μg·mL^(–1)小柴胡汤组的抑制效果最明显。综合以上结果,小柴胡汤对虎龙杂交石斑鱼化学性肝损伤有一定的保护作用,可预防肝脏疾病的发生和发展,为鱼类保肝药物研究提供了新的见解。

D-GalN/LPS诱导大鼠急性肝衰竭中髓过氧化物酶和 Nrf2/HO-1信号通路的变化

目的 探讨D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)诱导急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路的变化及ALF的发生机制。方法 SD大鼠随机分为对照组和ALF组。ALF组:将D-GalN 800 mg/kg和LPS 8μg/只同时腹腔注射,于注射后6、12和24 h检测血清总胆红素(TBiL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。ELISA法检测血清MPO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,比色法测定MPO活性,RT-PCR检测肝组织Nrf2和HO-1的mRNA水平,Western blot法检测肝组织MPO、Nrf2和HO-1蛋白水平。结果 与对照组比较,ALF组血清MPO水平于造模后6 h升高,12 h为最高,24 h开始下降(23.33±2.06 vs.33.00±3.16,65.75±7.02,53.92±5.63,P<0.05);血清TNF-α(11.30±3.26 vs.102.17±14.80,83.33±11.22,64.25±9.29,P<0.01)和IL-6(10.83±2.92 vs.89.25±10.86,77.33±8.02,65.58±7.31,P<0.01)于造模后6 h升高最明显,12 h后逐渐下降,差异均有统计学意义。ALF组6、12、24 h肝组织MPO活性高于对照组,差异均有统计学意义(15.5±1.51,28.08±4.65,22.92±1.93 vs.12.17±1.27,P<0.05);ALF组肝组织6、12、24 h Nrf2 mRNA(1.59±0.13,3.65±0.11,2.35±0.11 vs.1.04±1.01,P<0.01)和HO-1 mRNA(2.44±0.19,4.77±0.18,3.82±0.17 vs.1.12±0.06,P<0.01)水平高于对照组,差异均有统计学意义。ALF组肝组织MPO(4.10±0.70,9.77±1.15,7.23±0.40 vs.2.07±0.42,P<0.01)、Nrf2(4.03±0.80,9.03±0.50,6.07±0.47 vs.2.63±0.38,P<0.01)和HO-1(1.73±0.21,5.17±0.51,3.03±0.32 vs.0.97±0.21,P<0.01)蛋白表达于12 h达最高值,ALF组各时间点与对照组比较均差异有统计学意义。结论 MPO可能通过氧化应激和炎症反应影响Nrf2/HO-1信号通路,在ALF中发挥重要作用。

中药干预LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的研究进展

急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)病情危重,病死率高,内科综合治疗疗效尚不满意,肝移植受限于肝源供给不足难以广泛开展。中药治疗可减轻肝脏损伤,延缓病情发展,降低病死率。基于动物模型积极筛选有效中药并阐述其作用机制具有重要意义。D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine, D-GalN)可以引起肝细胞大量坏死,而脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)可以模拟肝细胞大量死亡后的机体免疫应答,LPS联合D-GalN诱导建立的ALF模型更符合临床实际。因此,基于LPS/D-GalN构建的ALF模型,归纳总结可有效干预ALF的常见中药及其有效活性成分,并详细阐述其作用机制,以期对中药有效性评价、试验思路及临床合理应用提供参考。

Con A、α-Galcer与LPS/D-Gal N诱导免疫性肝损伤小鼠NKT细胞功能改变的比较研究

目的:通过比较三种免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞功能改变情况,寻找一种在病理生理机制上更接近临床特点的免疫性肝损伤动物模型。方法:40只小鼠随机分为空白对照组、Con A模型组、α-Galcer模型组、LPS/D-Gal N模型组,每组10只。Con A模型组尾静脉注射ConA溶液(18 mg/kg),α-Galcer模型组腹腔注射α-Galcer溶液(40μg/kg),LPS/D-Gal N模型组腹腔注射LPS溶液(10μg/kg)和D-Gal N溶液(700 mg/kg)。造模完成后8 h,检测小鼠血清转氨酶ALT、AST水平,计算肝指数,采用HE染色法观察肝组织病理改变情况,流式细胞仪分析肝组织NKT细胞含量,Western blot法检测肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,各模型组小鼠血清ALT、AST水平均显著升高(P<0.01),肝指数增加(P<0.01或P<0.05),肝组织病理损伤明显,NKT细胞含量显著增加(P<0.01或P<0.05),TNF-α、IFN-γ、IL-6表达均明显上调(P<0.01);各模型组之间比较,α-Galcer模型组血清ALT、AST含量显著低于Con A组(P<0.05),病理损伤也相对较轻,LPS/D-Gal N模型组NKT细胞含量明显低于其余两组(P<0.05)。结论:Con A、α-Galcer和LPS/D-Gal N诱导的免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞明显激活,介导炎症紊乱;其中,以Con A诱导的动物模型肝脏病理损伤及免疫紊乱最为明显,更符合疾病临床特点,可作为免疫性肝损伤的首选模型。

麦冬皂苷D预处理对LPS介导的人肺上皮Beas-2B细胞炎性及氧化损伤的抑制作用

目的探讨麦冬皂苷D预处理对脂多糖(LPS)介导的人肺上皮Beas-2B细胞炎性反应及氧化应激的作用。方法将人肺上皮Beas-2B细胞分为4组:对照组、LPS组、麦冬皂苷D+LPS组(简称OPD+LPS)和阳性对照组(简称DXMS+LPS)。CCK8法检测细胞增殖活性;ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素6 (interleukin 6,IL-6)浓度;流式检测细胞活性氧(ROS)水平;比色法检测细胞内MDA浓度及髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)活性;qRT-PCR检测细胞中IL-6、IL-10和IL-17 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中核转录因子κB p65(NF-κB p65)及p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与对照组比较,LPS组Beas-2B细胞的SOD和T-AOC活性、IL-10 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),而MDA浓度、MPO活性、IL-6和IL-17 mRNA表达以及NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与LPS组比较,OPD+LPS组Beas-2B细胞的SOD和T-AOC活性、IL-10 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),而MDA浓度、MPO活性、IL-6和IL-17 mRNA表达以及NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论麦冬皂苷D预处理,可缓解LPS介导人肺上皮Beas-2B细胞的炎性反应与氧化应激。

姜状三七皂苷R1对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤的保护作用研究

目的:姜状三七皂苷R1对急性肝损伤的干预作用及其作用机制。方法:通过腹腔注射10μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN建立急性肝损伤小鼠模型,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化;生化法检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;小动物活体成像观察2-DG和PEG在小鼠体内的荧光强度;流式细胞术检测肝细胞的活性氧和凋亡水平。结果:与模型组比较,各剂量姜状三七皂苷R1可改善急性肝损伤小鼠肝脏病理损伤;降低小鼠血清ALT、AST水平和小鼠体内2-DG和PEG的荧光强度(P<0.01);降低肝细胞活性氧水平、血清MDA含量和小鼠肝脏组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的水平(P<0.01,P<0.05);提高SOD和GSH-Px水平(P<0.05,P<0.01)。结论:姜状三七皂苷R1介导氧化应激和炎症来发挥抗急性肝损伤的作用。

LPS/D-gal诱导小鼠急性肝炎模型及mTOR信号的变化

目的探索LPS/D-gal诱导的急性肝炎中mTOR信号的变化。方法LPS/D-gal通过腹腔注射ICR雌性小鼠诱导急性肝炎模型。观察记录24h内的存活率或在注射后6h收集血清和肝脏组织样本,进行相关的分析。结果LPS/D-gal注射24h内引起小鼠急性死亡。注射后6h,引起血清中转氨酶水平明显升高。肝脏组织炎性因子Tnfa和Il6表达水平上调。HE染色显示明显的炎症细胞浸润,研究结果表明LPS/D-gal可诱导ICR小鼠成为急性肝炎动物模型。此外,肝脏组织免疫印迹分析发现,mTOR和NF-κB信号通路被激活,凋亡相关蛋白Caspase-3的活性增加,凋亡特征性的DNA片段化也显著增强。然而mTOR信号的抑制剂雷帕霉素并不能控制LPS/D-gal引起的肝脏凋亡和提高存活率。结论mTOR信号在LPS/D-gal诱导的急性肝炎的致病机制中可能发挥多重作用。

血清25(OH)D、Lp(a)和CTnI水平对慢性阻塞性肺疾病急性加重患者合并冠心病患者早期诊断的临床研究

目的探讨血清25羟基维生素D[25(OH)D]、脂蛋白(a)[Lp(a)]和肌钙蛋白I(CTnI)对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)合并冠心病(CHD)患者早期诊断的临床研究。方法本文统计了二组病例和正常对照组的性别、年龄、病程、体重指数(BMI)、吸烟和饮酒情况。化学发光免疫分析和化学法测定了218例AECOPD合并CHD、136例AECOPD患者和100例正常对照组血清25(OH)D、Lp(a)和CTnI水平,并进行了对比性分析。计算稳态型IR指数(HOMA-IR),受试者工作特征(ROC)曲线评估AECOPD合并CHD患者早期诊断的临床价值。结果218例AECOPD合并CHD和136例AECOPD的发生发展与BMI、吸烟和饮酒密切相关。AECOPD合并CHD和AECOPD患者血清25(OH)D水平较之100例正常对照组明显降低(P均<0.01);血清Lp(a)和CTnI水平明显增高(P均<0.01);AECOPD合并CHD较之AECOPD患者血清25(OH)D水平亦明显降低(P<0.01);血清Lp(a)和CTnI水平亦明显增高(P<0.01);AECOPD合并CHD和AECOPD HOMA-IR水平均明显增高(P均<0.01)。ROC曲线显示:血清25(OH)D、Lp(a)和CTnI水平的临界值分别为20.96ng/mL、295.78mg/dL和0.050 ng/mL,AUC分别为0.771、0.813和0.752,敏感度分别为78.6%、82.4%和76.3%,特异度分别为82.3%、88.5%和79.6%。结论AECOPD的发生发展与BMI、吸烟、饮酒和HOMA-IR密切相关。血清25(OH)D、Lp(a)和CTnI是AECOPD合并CHD早期诊断的有价值指标。

调心方对LPS诱导的PC12细胞株毒性和Aβ生成的作用

目的 :观察调心方对由LPS诱导的PC12细胞毒性和Aβ生成的改善作用。 方法 :用LPS处理PC12细胞 (神经源性细胞株 )造成细胞损伤和Aβ生成增加的模型。以MTT测定和逆转录 聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法及免疫细胞化学方法观察细胞的生存率和APP、CPP3 2的表达及细胞内Aβ生成的变化。 结果 :LPS处理PC12细胞 ,细胞生存率下降约 2 5 % ,APP、CPP3 2的表达和细胞内Aβ生成增加 ,而调心方的含药血清能提高细胞模型的生存率 ,降低APP、CPP3 2的表达和细胞内Aβ生成。 结论 :一定剂量的LPS能造成理想的细胞损伤和Aβ生成增加的模型 ,其机制可能与CPP3 2的双重作用有关 ,即参与APP的水解 ,造成Aβ生成增加和引起细胞的死亡或凋亡。调心方对LPS造成的细胞毒性具有一定的保护作用 ,并减少Aβ生成。