可变剪接在LPS/TLR4信号通路的作用研究进展

全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）是指因感染或非感染性因素导致机体多种细胞因子及炎症介质失控性释放,可导致全身多个重大器官出现功能障碍,如急性肺损伤（ALI）、多器官功能障碍综合征（MODS）等。过度的炎症细胞因子的分泌无疑成为了预防和治疗SIRS的“中心环节”。

活血理肝汤通过LPS/TLR-4/NF-kB信号通路治疗NAFLD大鼠的机制探讨

目的 探讨活血理肝汤通过LPS/TLR-4/NF-kB信号通路防治NAFLD的机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和活血理肝汤组,每组10只。正常对照组给予普通饲料喂养;模型组和活血理肝汤组给予高脂饲料喂养。8周后经肝脏病理HE染色确认造模成功,活血理肝汤组按照8.5g/(kg·d)进行灌胃,正常对照组和模型组使用相同体积生理盐水灌胃,持续8周。全自动生化分析仪测定各组大鼠血清血脂、肝功水平,HE染色和油红O染色观察各组大鼠肝脏组织形态与脂质沉积情况;酶联免疫吸附法检测各组大鼠肝脏白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及血清、肝脏、盲肠内容物的脂多糖(LPS)水平。Western blot法和荧光定量PCR法分别检测各组大鼠肝脏组织NF-κB和TLR4的蛋白和mRNA表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著升高,高密度脂蛋白(HDL-C)水平显著降低(P<0.05);肝细胞内可见大量大小不等的脂肪空泡,肝窦狭窄或消失,脂质沉积明显;肝脏IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平以及血清、肝脏、盲肠内容物中LPS水平均显著升高(P<0.05);肝脏TLR4和NF-κB的蛋白和mRNA表达均增高(P<0.05)。与模型组比较,活血理肝汤组大鼠血清TC、TG、LDL-C和AST、ALT水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);肝细胞内脂肪空泡明显减少,肝窦狭窄有所缓解,脂质沉积情况有所改善;肝脏IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平和盲肠内容物、血清、肝脏LPS水平均显著降低(P<0.05);肝脏TLR4和NF-κB的蛋白和mRNA的表达均降低(P<0.05)。结论 活血理肝汤能够改善NAFLD大鼠血脂水平、减轻肝脏脂质沉积,降低炎症指标IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的水平,改善肝脏的内环境,并可能是通过LPS/TLR-4/NF-kB信号通路发挥NAFLD的保护作用。

脂肪乳通过LPS/TLR4通路对急性有机磷中毒肺损伤的治疗作用研究

目的探讨脂肪乳对急性有机磷中毒所致肺损伤的治疗效果及脂多糖(LPS)/Toll样受体4(TLR4)通路在治疗过程中发挥的作用。方法将50只大鼠随机分为A组(盐水对照组)、B组(脂肪乳对照组)、C组(标准治疗组)、D组(脂肪乳治疗组)、E组(LPS/TLR4拮抗剂组),给予90%敌敌畏(7 mg/kg)腹腔注射染毒。A组染毒后尾静脉注射生理盐水(5 mL/kg);B组染毒后尾静脉注射20%脂肪乳(5 mL/kg);C组染毒后予阿托品(10 mg/kg)和氯解磷定(40 mg/kg)肌肉注射;D组在C组的基础上尾静脉注射20%脂肪乳(5 mL/kg);E组在D组的基础上尾静脉注射LPS/TLR4拮抗剂(0.5 mg/kg)。染毒后4 h使用毛细导管眶下采血1 mL行全血胆碱酯酶检查;染毒后24 h内观察大鼠流涎、肌肉震颤等中毒表现和存活情况;染毒后24 h取肺组织,HE染色电镜下观察肺组织病理结构,利用荧光定量PCR技术检测肺组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)mRNA相对表达量,流式细胞术检测肺细胞悬液中LPS/TLR4表达。结果敌敌畏染毒后,A组中毒症状出现较早,并且实验大鼠均出现了流涎、肌束震颤、躁动等中毒症状。染毒后24 h,A组有3只大鼠存活,B组有4只大鼠存活,C组有5只大鼠存活,D组有7只大鼠存活,而E组存活9只,仅2只大鼠出现流涎。E组存活率、胆碱酯酶活性最高,而流涎率、肌束震颤评分最低,与其他4组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色电镜下肺组织病理结果显示,D组较A、B、C 3组炎症细胞浸润、红细胞渗出明显减轻,E组肺损伤最轻。染毒后24 h肺组织IL-6、NF-κB、TNF-α相对表达量,B组低于A组,D组低于A、B、C 3组,E组低于其他4组,差异有统计学意义(P<0.01)。染毒后24 h肺细胞悬液中LPS/TLR4表达,B组低于A组,D组低于A、B、C 3组,E组低于其他4组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论脂肪乳可以减轻急性有机磷中毒所致肺损伤,LPS/TLR4通路在治疗过程中发挥重要作用。

清郁和降汤对反流性食管炎模型大鼠食管组织LPS/TLR4/NF-κB通路及食管黏膜屏障的影响

目的 探讨清郁和降汤治疗反流性食管炎(RE)的可能作用机制。方法 60只雄性SD大鼠中随机选择10只为假手术组,另外50只采用“前胃结扎+外置幽门部分结扎术”建立反流性食管炎模型。将造模成功的40只大鼠随机分成模型组、清郁和降汤组、雷贝拉唑+莫沙比利组和中西药联用组,每组10只。造模后假手术组及模型组分别予蒸馏水1 ml/100 g灌胃,清郁和降汤组予浓度为1.58 g/ml的清郁和降汤灌胃,雷贝拉唑+莫沙比利组予浓度为0.21 mg/ml的雷贝拉唑钠肠溶胶囊溶液和浓度为0.16 mg/ml的枸橼酸莫沙比利分散片溶液灌胃,中西药联用组予清郁和降汤、雷贝拉唑钠肠溶胶囊、枸橼酸莫沙比利分散片灌胃,剂量同上。各组灌胃量均为1 ml/100 g,持续14天。观察大鼠食管组织的病理学改变;检测大鼠血清中及食管组织中脂多糖(LPS)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素8 (IL-8)含量;检测食管组织中Toll样受体4 (TLR4)、核转录因子κB (NF-κB) p65、封闭蛋白1 (Cldn1)、封闭蛋白4 (Cldn4)mRNA及蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠食管黏膜损伤严重,肉眼观察可见充血、糜烂或溃疡,镜下可见食管鳞状上皮增厚并伴有基底细胞增生,黏膜固有层乳头延伸,大量炎性细胞浸润;与模型组比较,各给药组食管黏膜损伤明显减轻。与假手术组比较,模型组大鼠血清及食管组织LPS、IL-1β、IL-6、IL-8表达升高(P<0.01),食管组织TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达升高,Cldn1、Cldn4 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠血清及食管组织LPS、IL-1β、IL-6、IL-8表达降低(P<0.01),食管组织TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达降低,Cldn1、Cldn4 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。与中西药联用组比较,清郁和降汤组、雷贝拉唑+莫沙比利组大鼠血清及食管组织LPS、IL-1β、IL-6、IL-8表达明显升高,TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显升高,Cldn1、Cldn4 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);与雷贝拉唑+莫沙比利组比较,清郁和降汤组大鼠血清LPS表达明显降低,食管组织IL-8表达及TLR4蛋白表达明显升高,Cldn4蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论 清郁和降汤能够减轻RE大鼠食管黏膜损伤,与雷贝拉唑+莫沙比利联用具有协同作用,其机制可能与抑制食管组织LPS/TLR4/NF-κB通路,减轻食管炎症,增强食管上皮屏障功能有关。

ABRO1基因敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞的永生化及其LPS/TLR4通路活化的检测

目的永生化ABRO1基因敲除(KO)小鼠骨髓来源的巨噬细胞系(BMDM),并确定缺失ABRO1对巨噬细胞LPS/TLR4通路活化的影响。方法用p CDH-SV40LT-puro慢病毒分别感染野生型(WT)及ABRO1 KO小鼠的BMDM,连续传代培养>50代,得到永生化细胞系。利用MTS法和Ed U掺入法检测细胞增殖,AnnexinⅤ/7-AAD双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。脂多糖(LPS)刺激细胞后,Western印迹法检测NF-κB及MAPK信号通路,并用流式微球阵列(CBA)检测细胞产生IL-6、TNF-α的水平。结果成功构建了ABRO1 WT和KO的永生化BMDM(i BMDM)。正常培养下,WT及KO i BMDM细胞增殖能力和细胞凋亡均无明显差异,但撤除血清后,KO i BMDM细胞凋亡明显高于WT。LPS刺激后,NF-κB、MAPK信号通路激活及IL-6、TNF-α的产生无明显差异。结论ABRO1缺失不影响LPS/TLR4信号通路。敲除ABRO1促进血清撤除诱导的i BMDM凋亡。

小柴胡汤联合针刺治疗痞证的临床效果

目的探讨小柴胡汤联合针刺治疗痞证的临床效果。方法选取2021年5月至2023年6月濮阳市中医医院60例痞证患者,随机分为两组,各30例。两组均接受常规治疗,于此基础上,对照组接受针刺治疗,观察组接受小柴胡汤联合针刺,均连续治疗4周。比较两组临床疗效、中医证候积分、胃肠激素[生长抑素(SS)、胃泌素(GAS)、胃动素(MOT)]、LPS/TLR4/NF-κB通路相关因子[内毒素(LPS)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)],并评估安全性。结果观察组临床总有效率高于对照组(P<0.05);治疗2周及4周,观察组主症、次症及总积分较对照组低(P<0.05);治疗2周及4周,观察组GAS、MOT较对照组高,SS较对照组低(P<0.05);治疗2周及4周,观察组LPS、TLR4、NF-κB水平较对照组低(P<0.05);治疗期间两组均未发生明显不良反应。结论小柴胡汤联合针刺可能通过调节LPS/TLR4/NF-κB通路缓解痞证临床症候,调节胃肠激素与功能,治疗效果显著,可改善生活质量。

旋覆代赭汤对反流性食管炎大鼠模型TLR4/NF-κB的影响

目的观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜与脂多糖(LPS)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、旋覆代赭汤组(简称中药组,9.89 g/kg)、西药(奥美拉唑+莫沙比利,2.58 mg/kg)组,每组15只。除正常对照组外大鼠采用“4.2 mm幽门夹+2/3胃底结扎术”制备酸碱混合反流RE大鼠模型。术后第7天予相应药物干预,持续干预14天。利用光学显微镜观察大鼠食管下段黏膜组织形态学变化;应用ELISA法检测定外周血中LPS含量;采用Western Blot法与RT-PCR法检测食管黏膜组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠食管黏膜镜下损伤最为严重,食管黏膜呈炎性改变,可见急慢性炎细胞浸润,病理积分和外周血中LPS含量升高(P<0.05),食管组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组、西药组病理积分和外周血中LPS含量降低(P<0.05),食管组织中TLR4、NF-κB蛋白和基因表达亦明显降低(P<0.05)。结论旋覆代赭汤能够减轻RE模型大鼠食管黏膜的损伤,抑制TLR4、NF-κB的表达,促进食管黏膜损伤的恢复。

大黄蛰虫丸对大鼠肝组织BAMBI表达的影响

目的观察大黄蛰虫丸对大鼠肝组织BAMBI表达以及相关通路的影响。方法采取清洁级Wistar大鼠,按随机数字表法将其分为正常对照组、肝纤维化模型组、大黄蛰虫丸高剂量组、大黄蛰虫丸中剂量组、大黄蛰虫丸低剂量组5组,用40%四氯化碳花生油混合液注射大鼠,建立肝纤维化动物模型,以正常组和模型组作对照,第4周末各组开始分别予以各治疗组灌胃给药(C、D、E组)、生理盐水(A、B组)。造模6周结束后通过荧光定量PCR法检测TLR4、MyD88、BAM-BI的基因相对表达水平;通过免疫组化染色,用半定量法评价各组肝组织TLR4、MyD88、BAMBI蛋白的表达水平;用Western Blot法检测组织中TLR4、MyD88、BAMBI蛋白的表达水平。结果与正常对照组、大黄蛰虫丸高剂量组、中剂量组及低剂量组相比,肝纤维化模型组TLR4、MyD88蛋白及基因的表达均升高,BAMBI蛋白及基因的表达明显下降,差异具有显著统计学意义(P均小于0. 001);与肝纤维化模型组相比,大黄蛰虫丸高剂量组、中剂量组及低剂量组TLR4、MyD88蛋白及基因的表达均下降,BAMBI蛋白及基因的表达升高,差异具有显著统计学意义(P均小于0. 001);大黄蛰虫丸低剂量组TLR4、MyD88、BAMBI蛋白及基因的表达接近正常组,可达到正常水平。结论大黄蛰虫丸可以在一定程度上抑制或逆转肝组织纤维化进程,其可能是通过对LPS-TLR4-MYD88通路产生阻断作用,进而上调BAMBI的表达。