可变剪接在LPS/TLR4信号通路的作用研究进展

全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）是指因感染或非感染性因素导致机体多种细胞因子及炎症介质失控性释放,可导致全身多个重大器官出现功能障碍,如急性肺损伤（ALI）、多器官功能障碍综合征（MODS）等。过度的炎症细胞因子的分泌无疑成为了预防和治疗SIRS的“中心环节”。

益母生化散对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎血清激素和TLR4/NF-κB信号通路相关因子的影响

试验旨在探究益母生化散对子宫内膜炎模型小鼠血清激素水平和Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路相关因子表达水平的影响。选取日龄、体型、体重相近的雌性小鼠40只,随机分为4组,每组10个重复,每个重复1只。对照组小鼠子宫灌注20μL生理盐水,模型组子宫灌注25μL脂多糖(LPS,1 g/L),药物组灌胃2.0 g/kg益母生化散,治疗组子宫灌注25μL LPS+2.0 g/kg益母生化散灌胃,连续灌胃3 d,2次/d。利用放射免疫分析法检测血清中雌二醇(E2)、孕酮(Pg)、促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)含量,ELISA方法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,RT-PCR方法检测TLR4/NF-κB信号通路相关因子Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κBp65)、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表达。结果显示:与对照组相比,模型组血清E2、LH和FSH含量明显降低,而Pg含量升高,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的分泌量及其mRNA基因表达量明显升高,TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA的表达明显上调;与模型组相比,治疗组血清E2、LH和FSH含量明显升高,Pg含量降低,IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的分泌量及其mRNA基因表达明显降低,TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA的表达量明显下调。研究表明,益母生化散通过调节激素含量和抑制TLR4/NF-κB信号通路相关因子水平的变化,对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎起到缓解作用。

甘草酸二铵通过TLR4/NF-κB信号通路负调控LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应

目的:评价甘草酸二铵(DG)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨其改善神经炎症的潜在机制。方法:采用LPS诱导BV2小胶质细胞损伤模型,给予20、60μmol/L DG处理。MTS检测细胞活力;Griess检测细胞NO分泌水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平。RT-qPCR检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平;Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、IκB-α和p-IκB-α蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS处理的BV2小胶质细胞活力明显降低(P<0.05),NO分泌显著增加(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平显著升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与LPS组相比,不同浓度DG干预的BV2小胶质细胞活力明显升高(P<0.05),NO分泌明显减少(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平明显降低(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:DG可有效减轻LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

瑞马唑仑调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的:探究瑞马唑仑(REM)调节高迁移率族蛋白(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法:体外培养人肺泡上皮细胞HPAEpiC,将其分为7组,对照(Control)组(正常培养)、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+pcDNA3.1组(10 mg/L LPS+转染pcDNA3.1质粒)、LPS+pcDNA3.1-HMGB1组(10 mg/L LPS+转染pcDNA3.1-HMGB1质粒)、LPS+REM组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM)、LPS+REM+pcDNA3.1组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM+转染pcDNA3.1质粒)、LPS+REM+pcDNA3.1-HMGB1组(10 mg/L LPS+150μg/mL REM+转染pcDNA3.1-HMGB1质粒),扫描电镜下观察各组HPAEpiC细胞形态变化;CCK-8法检测各组HPAEpiC细胞存活率;检测各组HPAEpiC细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量及白细胞介素(IL)-1β、IL-18炎性因子水平;Western blotting检测各组HPAEpiC细胞核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、cleaved N-terminal gasdermin D-N(GSDMD-N)焦亡相关蛋白及TLR4、NF-κB蛋白表达水平;qRT-PCR检测各组HPAEpiC细胞HMGB1 mRNA表达水平。结果:与Control组比较,LPS组HPAEpiC细胞可见明显焦亡特征,细胞肿胀甚至破裂,在质膜上产生较大的气泡,细胞存活率减少,LDH释放量,NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达,IL-1β、IL-18水平,HMGB1 mRNA及TLR4、核NF-κB蛋白表达增加;与LPS组比较,LPS+pcDNA3.1-HMGB1组上述现象加重,LPS+REM组上述现象好转;与LPS+REM组比较,LPS+REM+pcDNA3.1-HMGB1组HPAEpiC细胞上述现象加重(P<0.05~P<0.01)。结论:REM能够减轻LPS诱导的炎症反应,抑制HPAEpiC细胞焦亡,可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。

LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析

本试验通过0.1和1μg·mL-1浓度的LPS诱导处理猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),分别在2、4、6h时利用实时荧光定量PCR方法检测TLR4及其信号通路相关基因(CD14、MyD88、TNF-α、IL-1β和IFN-α)mRNA水平相对表达量,初步探讨猪小肠上皮细胞受到产肠毒素大肠杆菌侵扰发生炎症反应的相关分子反应机理。结果发现,两种浓度的LPS均使得所检测的TLR4及其信号通路相关基因表达量上调,诱导后4~6h的表达量急速上升,且高浓度的LPS诱导处理后各基因表达量上调倍数明显高于低浓度LPS诱导时各基因表达量上调倍数,高浓度的LPS对机体肠道的刺激引起了更为强烈的免疫反应,使正常机体更快地产生炎症反应。由此推测,大肠杆菌侵染猪肠道后将释放LPS,TLR4作为LPS的受体,受LPS诱导其表达量上调,进而引起TLR4信号途径的信号传递,传递过程中由于MyD88的依赖机制,MyD88表达量上调相对稳定,再经过级联免疫放大效应,大量的促炎细胞因子释放,导致炎症及腹泻水肿病的产生。

金英黄归汤对LPS介导乳腺上皮细胞TLR4信号通路中相关因子的影响

为了评价金英黄归汤抗LPS致炎的作用机制,作者采用ELISA法检测金英黄归汤对细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-8的影响,采用qPCR法研究药物对TLR4通路中IL-1受体相关激酶-1(IRAK-1)、肿瘤坏死因子受体6(TRAF-6)、转化生长因子激活激酶(TAK-1)、NF-κB诱导激酶(NIK)、抑制性NF-κB(IκB)mRNA的转录影响。结果显示,金英黄归汤低剂量组(39.1μg·mL-1)、中剂量组(391μg·mL-1)、高剂量组(3 910μg·mL-1)能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少LPS介导的TNF-α和IL-8分泌;能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少LPS介导的IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、IκB、NIK mRNA的转录。结果提示,金英黄归汤通过抑制小鼠MECs的TLR4/NF-κB信号通路中IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/NIK途径的活化来控制炎性因子的释放而发挥抗炎作用,而不是通过IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/IκB途径实现的,这可能是金英黄归汤的抗炎机制。

TGA与LPS竞争抑制妊娠期糖尿病孕妇外周血单核细胞TLR4经典信号通路

目的 研究半乳糖醛酸（TGA）与内毒素（LPS）同时刺激妊娠期糖尿病孕妇外周血单核细胞及其对LPS-Toll样受体4（TLR-4）-核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的抑制作用。方法 选取妊娠期糖尿病孕妇30例,抽取外周静脉血15ml,分离出单核细胞,分别加入LPS、TGA、TGA（0~1.0mg/ml）联合LPS刺激并培养,Westernblot法检测TLR4及NF-κBp65蛋白表达量,ELISA法检测培养液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1（IL-1）、白介素-10（IL-10）水平。结果单独LPS或TGA刺激,其下游TLR4、NF-κBp65蛋白表达量及TNF-α、IL-1、IL-10水平均较未处理组高,差异有统计学意义（P〈0.05）;同时加入TGA及LPS刺激,其TLR4、NF-κBp65蛋白表达量及TNF-α、IL-1、IL-10水平均较单独LPS或TGA刺激低,但较未处理组高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;各组TLR4与NF-κBp65蛋白表达量之间呈正相关性（P〈0.01）。结论 TGA与LPS可竞争抑制LPS-TLR4-NF-κB信号通路,对妊娠期糖尿病的预防及治疗起到指导作用。

TLR4-P38MAPK信号通路在LPS诱导BV2细胞中的表达及意义

目的观察LPS诱导小胶质细胞后信号通路Toll样受体4(TLR4)-p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达及意义。方法体外培养BV2小胶质细胞,分为对照组、LPS诱导组(LPS刺激12h及24h)及SB203580干预组(LPS+SB203580诱导12h及24h),应用ELISA法检测各组TNF-α、IL-6水平,RT-PCR法检测各组TLR4mRNA和p38MAPK mRNA的表达变化。结果 LPS诱导组细胞分泌TNF-α、IL-6水平显著提高,诱导24h后细胞上清液含量分别为(513.67±14.05)pg/mg和(396.84±15.41)pg/mg。给予SB203580抑制剂后TLR4mRNA和p38MAPK mRNA表达明显减弱,细胞分泌TNF-α、IL-6含量表达与感染组比较也明显降低。结论 LPS刺激小胶质细胞可引起TLR4-p38MAPK信号通路的活化并释放炎性细胞因子,而SB203580则对其有明显的抑制作用,证明TLR4-p38MAPK信号通路与小胶质细胞的炎性活化密切相关。

温针灸对兔膝骨性关节炎模型滑膜组织中TLR4/NF-κB信号通路诱导下滑膜修复作用机制的实验研究

目的通过观察温针灸对兔右膝骨性关节炎模型关节软骨滑膜组织中TLR4、NF-κB表达量的影响,探讨温针灸治疗膝骨性关节炎的机制。方法随机将40只兔分为空白组、模型组、双氯芬酸钠组、温针灸组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制作膝骨性关节炎模型,于造模成功后第3 d开始进行干预治疗。空白组不做任何处理,常规饲养;模型组不治疗,每天以石膏固定1次,时间15 min。温针灸组给予患侧鹤顶、后三里、内外膝眼、阳陵泉5个穴位行温针灸治疗,15 min/1次,1次/d。双氯芬酸钠组将药品研末、溶解在纯净水中,并以15 mg/kg体重的浓度灌胃。6 d为1个疗程,观察2个疗程,治疗结束后取材。通过HE染色法观察各组膝关节软骨的病理变化,并进行Mankin′s评分;采用ELISA法检测各组兔膝关节滑膜组织中NF-κB、TLR4的表达水平。结果与空白组兔比较,各组兔膝关节Mankin′s评分、NF-κB、TLR4的含量均增高(P<0.05),与模型组兔相比,温针灸组和双氯芬酸钠组兔膝关节Mankin′s评分和NF-κB、TLR4的含量均有所下降(P<0.05)。结论温针灸可改善兔膝关节软骨退行性变,减轻炎症反应,其机制可能与改善兔膝关节软骨形态,降低滑膜组织中NF-κB、TLR4的表达量相关。

LPS诱导的奶牛子宫内膜细胞TLR4信号传导通路研究概况

子宫内膜炎是奶牛产后细菌感染子宫而引起的产科疾病,严重影响奶牛业的健康发展。革兰阴性细菌中的大肠埃希菌是引起奶牛子宫内膜炎的主要致病菌,细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性细菌细胞壁的重要组成成分,也是近年研究奶牛子宫内膜炎发病机制的重要诱导物。论文综述了LPS、Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)及炎性因子,初步剖析了LPS诱导的炎症反应信号传导通路TLR4信号通路,为奶牛子宫内膜炎的研究提供参考。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉性心脏病小鼠心肌保护作用

目的 研究基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)小鼠心肌保护作用。方法 50只6周的雄性SD小鼠中取10只作正常对照组,其余小鼠给予高脂饮食建立CHD模型。采用随机数字表法将40只模型小鼠分为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组各10只。黄连解毒汤低、中、高剂量组每日分别以10、20、40 g/kg剂量进行灌胃,每日1次,持续6周;正常组、模型组每日给予等量蒸馏水灌胃。干预后采用生化法检测各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平,酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、内皮素水平;采用苏木精-伊红染色法观察小鼠心肌细胞病理形态,蛋白质印迹法检测心肌组织中TLR4、NF-κB、NLRP3的表达。比较各组小鼠血脂、心肌组织中抗氧化相关指标和TLR4、NF-κB、NLRP3的表达。结果 模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组血脂水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低剂量组与模型组血脂水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤中、高剂量组总胆固醇、甘油三酯、LDL水平均低于模型组,HDL水平高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组心肌组织中SOD水平均低于对照组,丙二醛、内皮素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组SOD水平均高于模型组,丙二醛、内皮素水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组心肌纤维排列整齐,横纹清晰且细胞完整,无细胞肿胀、炎症浸润等;模型组心肌纤维排列紊乱,结构发生异常,有严重细胞肿胀、炎症浸润;黄连解毒汤低、中、高剂量组未见心肌纤维断裂,黄连解毒汤中、高剂量组细胞肿胀和炎症浸润情况优于黄连解毒汤低剂量组,黄连解毒汤高剂量组优于黄连解毒汤中剂量组。模型组、黄连解毒汤中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。且黄连解毒汤各剂量组中以上指标变化呈剂量依赖性。结论 黄连解毒汤能降低CHD小鼠血脂水平,保护心肌细胞,其能够通过下调组织TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达以调节血脂水平并改善心肌功能,且黄连解毒汤的效果随着剂量的增加而增强。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠LPS及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用及对LPS及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、化浊解毒活血通络方低(TCM-L)、中(TCM-M)、高(TCM-H)剂量组,每组12只。Longa法结合既往研究经验制备永久性大脑中动脉梗塞大鼠模型。化浊解毒活血通络方低、中、高剂量组大鼠灌胃给予6.25、12.5、25 g/kg化浊解毒活血通络方,假手术与模型组灌胃给予2 ml生理盐水,给药后72 h检测大鼠神经功能缺失情况;HE染色观察脑、肠组织病理改变;TUNEL检测脑组织凋亡;TTC染色观察脑梗死面积;鲎试剂检测血清LPS浓度;ELISA检测血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达;Western blot检测脑组织TLR4、NF-κB、肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达;RT-PCR检测脑组织MyD88、IRAK、TRAF6 mRNA表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺失加重,脑梗死面积增大,脑组织细胞凋亡增加,血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达升高(P<0.05),血清LPS表达升高(P<0.05),肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达降低,脑组织TLR4、NF-κB、MyD88、IRAK、TRAF6蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,化浊解毒活血通络方各组大鼠神经功能缺失减轻,脑梗死面积减小,脑组织细胞凋亡减少,血清DAO、脑组织IL-1β、TNF-α表达降低(P<0.05),血清LPS表达降低(P<0.05),肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达升高,脑组织TLR4、NF-κB、MyD88、IRAK、TRAF6蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),TCM-H组最为显著,血清LPS表达下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可改善CIRI,其机制可能与降低LPS含量、保护肠道屏障、调控TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应有关。

片仔癀通过抑制TLR4/MAPK信号通路减轻LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症损伤研究

目的:研究片仔癀(PZH)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞神经炎症损伤的保护作用及机制。方法:将BV2小胶质细胞培养于含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的RPMI-1640完全培养基中,并置于5%CO2,37℃培养箱中常规培养。将BV2小胶质细胞以5×104个/mL的密度接种于96孔板,LPS(100 ng/mL)诱导BV2小胶质细胞炎症反应,同时分别用不同浓度PZH(0.05、0.10、0.15 mg/mL)干预12 h,加入MTT并于4 h后检测其490 nm处吸光度。将BV2小胶质细胞以5×104个/mL的浓密度接种于24孔板,LPS(100 ng/mL)诱导BV2小胶质细胞炎症反应,分别用不同浓度PZH(0.05、0.10和0.15 mg/mL)干预12 h,收集上清并使用ELISA法测定细胞上清中IL-6的水平。将BV2小胶质细胞以1.6×105个/mL的密度接种于6孔板,LPS(100 ng/mL)诱导BV2小胶质细胞炎症反应,同时分别用不同浓度PZH(0.05、0.10、0.15 mg/mL)干预12 h,使用TRIzol试剂提取总RNA,逆转录制备cDNA,然后采用RT-qPCR法检测BV2小胶质细胞中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平。将BV2小胶质细胞以1.6×105个/mL的密度接种于6孔板,LPS(100 ng/mL)诱导BV2小胶质细胞炎症反应,同时分别用不同浓度PZH(0.05、0.10、0.15 mg/mL)干预12 h,加入RIPA蛋白裂解液提取蛋白质,然后采用Western blot法检测BV2小胶质细胞中TLR4、ERK1/2、p-ERK1/2、p38、p-p38、JNK、p-JNK、COX-2和iNOS蛋白表达水平。结果:①MTT实验结果显示,与正常对照组比较,不同浓度PZH和LPS各自单独干预或者两者共同干预对BV2小胶质细胞活力均无明显影响(P>0.05)。②ELISA结果显示,与正常对照组比较,模型组IL-6分泌水平明显上升(P<0.001);与模型组比较,不同浓度PZH可显著降低IL-6分泌水平(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。③RT-qPCR结果显示,与正常对照组比较,模型组IL-1β(P<0.001)、IL-6(P<0.001)和TNF-α(P<0.01)转录水平明显上升;与模型组比较,不同浓度PZH可明显降低IL-1β(P<0.05,P<0.01,P<0.001)、IL-6(P>0.05,P<0.01,P<0.001)和TNF-α(P<0.01,P<0.01,P<0.001)转录水平。④Western blot结果显示,不同浓度PZH能显著抑制LPS诱导的TLR4/MAPK信号通路的激活,减少TLR4(P>0.05,P<0.05,P<0.05)、p-ERK1/2(P>0.05,P<0.05,P<0.01)、p-p38(P<0.05,P<0.01,P<0.01)、COX-2(P<0.01,P<0.01,P<0.001)和iNOS(P<0.01,P<0.01,P<0.01)蛋白表达水平,但对p-JNK蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:片仔癀可明显改善LPS诱导的神经炎症损伤,其作用可能与抑制TLR4/MAPK信号通路激活相关。

α-倒捻子素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导IEC-6细胞的炎症

旨在证明α-倒捻子素可以缓解脂多糖(LPS)诱导的IEC-6细胞的炎症并揭示其机制。笔者在体外培养的IEC-6细胞中构建LPS诱导的炎症模型,并通过流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、定量PCR(Q-PCR)、蛋白印迹(Western blot)的方法检测α-倒捻子素对LPS诱导的炎症是否有缓解作用。结果表明,5μmol·L-1的α-倒捻子素预处理可以显著降低LPS诱导的前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在IEC-6细胞中的分泌,以及环氧合酶2(COX-2)、IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P<0.05)。通过对炎症相关信号通路NF-κB的探究可见,α-倒捻子素能显著抑制Toll样受体4(TLR4)mRNA和NF-κB相关蛋白磷酸化IκBα(pIκBα)和磷酸化p65(pp65)的激活(P<0.05)。综上所述,α-倒捻子素可以通过TLR4/NF-κB信号通路来抑制LPS诱导的IEC-6细胞的炎症,并且可能是治疗炎症疾病的潜在选择。

冬凌草甲素调节HMGB1/TLR4信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用

目的探讨冬凌草甲素调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对急性牙髓炎大鼠的改善作用。方法将SD大鼠分为冬凌草甲素高剂量组(20 mg/kg)、冬凌草甲素低剂量组(10 mg/kg)、冬凌草甲素高剂量+rHMGB1组(20 mg/kg冬凌草甲素+8μg/kg rHMGB1)、模型组、对照组,每组10只。记录大鼠面部梳理时间以评估疼痛行为学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-8、IL-10、趋化因子(CX3CL1)、血红素加氧酶-1(HO-1)水平;检测牙髓组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠牙髓组织病理学改变;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达;Western blotting检测HMGB1、TLR4、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果与模型组相比,冬凌草甲素低、高剂量组大鼠面部梳理时间、血清IL-1β、TNF-α、IL-8、CX3CL1、HO-1水平、牙髓组织MDA含量、HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA表达、HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达降低,血清IL-10水平、牙髓组织SOD活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);重组蛋白rHMGB1可部分逆转冬凌草甲素对急性牙髓炎大鼠的改善作用(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过抑制HMGB1/TLR4信号通路降低急性牙髓炎大鼠炎症反应、氧化应激,抑制组织细胞凋亡,减轻牙髓组织损伤,缓解牙髓炎。

葶苈子水提液通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对LPS吸入性肺损伤新生大鼠的影响

[目的]探究葶苈子水提液对脂多糖(LPS)吸入性肺炎新生大鼠的影响。[方法]腹腔注射LPS制备吸入性肺损伤大鼠模型,将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、葶苈子水提液5 g/kg组、葶苈子水提液10 g/kg组、葶苈子水提液20 g/kg组和地塞米松0.002 g/kg组。干湿法检测肺组织干湿质量比值;苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织病理损伤;酶联免疫吸附(ELISA)法检测氧化应激标记物:超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)p65蛋白表达水平。[结果]与对照组比较,模型组大鼠肺干湿质量比值升高,SOD、GSH含量降低,MDA含量升高,IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高,HMGB1、TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB p65与核转录因子-κB(NF-κB)p65比值升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,葶苈子水提液10、20 g/kg组和地塞米松0.002 g/kg组肺干湿质量比值降低,肺组织病理损伤程度明显改善,SOD、GSH含量升高,MDA含量降低,IL-6、IL-1β和TNF-α水平降低,HMGB1、TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB p65与NF-κB p65比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]葶苈子水提液能改善LPS诱导的吸入性肺损伤大鼠模型病理损伤,抑制炎症因子的释放,改善氧化应激,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的活化。

BMSCs通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症反应

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响。方法32只SPF级KM小鼠,4周龄,随机分为4组:对照组,LPS组,地塞米松(DEX)治疗组(LPS+DEX),BMSCs移植组(LPS+BMSCs);后3组经气管穿刺法注入LPS建立小鼠ALI模型,建模24 h后经尾静脉一次性注射移植同源BMSCs,同时,LPS+DEX组经尾静脉注射DEX,连续3 d;细胞移植后第4天或DEX注射完毕后24 h,记录小鼠存活数量,检测小鼠肺功能,测肺W/D重量比;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞,检测血清炎性细胞因子,观察肺组织病理学变化;经绿色荧光蛋白标记染色观察BMSCs在肺组织中的归巢;用RT-PCR及Western blot分别检测肺组织TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关基因和蛋白质表达(TLR4、MyD88和NF-κB)。结果与对照组相比,LPS组小鼠肺功能降低,肺W/D重量比、血清中炎症因子、BALF中炎性细胞数量明显增加,肺组织损伤严重;与LPS组比较,LPS+DEX组、LPS+BMSCs组小鼠存活数量增高,肺功能改善,肺组织损伤减轻,肺W/D重量比、血清炎性细胞因子、BALF中炎性细胞数量明显下降,TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关基因和蛋白表达降低。结论同源BMSCs移植可以有效缓解LPS诱导的急性肺损伤,其机制可能与调控TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,减轻炎症反应有关,该研究为BMSCs同源移植治疗ALI提供了实验依据。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨复方银翘合剂缓解哮喘小鼠炎症反应的作用研究

目的:研究复方银翘合剂对哮喘小鼠的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将72只小鼠随机分为6组,正常组、模型组、复方银翘合剂低、中、高剂量组和阳性药物组,每组12只。采用卵清蛋白诱导小鼠哮喘模型,观察小鼠一般症状并检测IgE浓度。收集小鼠肺泡灌洗液并染色计数,HE染色观察小鼠肺组织病理变化。ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13的水平。Western blot法检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均显著增多(P<0.05),巨噬细胞显著减少(P<0.05),肺组织中支气管管壁增厚,炎性细胞浸润,TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平均显著提高(P<0.05),TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,复方银翘合剂中、高剂量组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均显著减少(P<0.05),巨噬细胞显著增多(P<0.05),TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平均显著降低(P<0.05),TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。复方银翘合剂各剂量组比较结果显示,高剂量组的上述变化最明显。结论:复方银翘合剂可缓解哮喘小鼠症状,减轻肺组织病理变化和炎症水平,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

紫草素通过TLR4/NF-κB信号通路抑制由LPS诱导的人牙髓细胞炎症研究

目的:探讨紫草素对脂多糖(LPS)诱导的人牙髓细胞(HDPCs)细胞炎症的影响。方法:用MTT法检测不同浓度紫草素和LPS对HDPCs的细胞毒性;给药24 h后,通过MTT法检测细胞存活率;用ELISA法测定细胞液中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10水平;通过Western blot法检测TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达情况。结果:紫草素可以抑制由LPS引起的细胞存活率的改变;与模型组相比,紫草素组中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,IL-10水平显著升高;并且TLR4和p-NF-κB蛋白表达显著降低。结论:紫草素可以缓解LPS引起HDPCs细胞炎症,并且能够抑制TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达。

TLR4/NF-κB信号通路在介导睡眠剥夺诱导膜迷路积水中的作用研究

目的探讨TLR4/NF-κB信号通路在介导睡眠剥夺诱导膜迷路积水中的作用。方法选取30只健康SD大鼠,分为空白对照组、大平台对照组、睡眠剥夺2周组、睡眠剥夺3周组、睡眠剥夺4周组,每组6只。睡眠剥夺组大鼠选用改良多平台睡眠剥夺法进行造模,大平台对照组在小平台上放置网格所制大平台,空白对照组不做处理。实验前后对各组大鼠进行旷场实验评估行为学,行听性脑干反应(ABR)检测评估听力水平;ABR检测结束后腹主动脉取血,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清中TNF-α、MCP-1的水平;解剖耳蜗,HE染色行中阶横截面积(SM)/(中阶+前庭阶横截面积)(SM+SV)比值评价膜迷路积水情况;通过免疫组化染色检测耳蜗中IL-1β、TNF-α、MCP-1、TLR4、NF-κB P65的表达,观察实验后不同睡眠剥夺时间大鼠听力水平、膜迷路积水程度及TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及下游炎症因子表达水平变化规律,分析大鼠听力水平、膜迷路积水程度与TLR4/NF-κB信号通路的相关性。结果睡眠剥夺组大鼠ABR波II反应阈升高,较空白对照组及大平台对照组均有统计学意义(P<0.01);形态学观察:空白对照组及大平台对照组积水率为0,睡眠剥夺2周组积水率为16.67%,睡眠剥夺3周组积水率为25%,睡眠剥夺4周组积水率为25%;睡眠剥夺组大鼠血清中TNF-α、MCP-1浓度均高于空白对照组及大平台对照组,其中睡眠剥夺4周组TNF-α、MCP-1浓度较空白对照组及大平台对照组均具有统计学意义;睡眠剥夺组大鼠耳蜗螺旋神经节、螺旋器、血管纹螺旋韧带IL-1β、TNF-α、MCP-1、TLR4、NF-κB P65表达均高于空白对照组及大平台对照组。结论睡眠剥夺可能通过TLR4/NF-κB信号通路对内耳产生影响从而诱导膜迷路积水。