“手十二井穴”放血预处理对大鼠急性低氧肺组织损伤模型血气、HIF-1α及VEGF水平的影响

目的 观察“手十二井穴”放血预处理对大鼠急性低氧肺组织损伤模型血气相关指标、低氧诱导因子(HIF)-1α及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响,探讨“手十二井穴”放血预处理对急性低氧肺组织损伤的影响。方法 将72只雄性SD大鼠随机分为对照组8只、低氧(模型)组32只、井穴放血预处理(放血)组32只,模型组和放血组又分为6、24、48、72 h 4个时间段亚组,每组各8只。采用实验动物低氧模拟舱模拟15%O_(2)浓度,制备大鼠急性低氧肺组织损伤模型。放血组按“少商”“商阳”“中冲”“关冲”“少冲”“少泽”的顺序,每天1次,共5 d。用手持式血气分析仪检测肺动脉血气氧分压(PaO_(2))、血氧饱和度(SaO_(2))、酸碱度(pH)、二氧化碳分压(PaCO_(2))等相关指标,采用Western印迹法检测HIF-1α表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测VEGF含量。结果 与对照组比较,模型组各时间段PaO_(2)、SaO_(2)明显降低,HIF-1α和VEGF表达水平显著升高(P<0.01)。与同时间段模型组比较,放血组PaO_(2)和SaO_(2)均出现升高,PaO_(2)在6、48 h时有统计学意义,SaO_(2)值在6、24、48 h时有统计学意义(P<0.05,P<0.01),HIF-1α表达在各时段明显下调,VEGF含量在24、48、72 h时明显下降(P<0.05,P<0.01)。但放血组PaO_(2)各时间段和SaO_(2)(6、24 h)仍低于对照组,HIF-1α(6、48、72 h)和VEGF各时间段表达水平仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 “手十二井穴”放血预处理在一定时间和程度上可改善大鼠急性低氧(15%O_(2),85%N_(2))肺组织损伤模型的缺氧情况,其可能的作用与升高动脉血PaO_(2)、SaO_(2)及下调HIF-1α表达、降低VEGF含量有关,从而有利于模型大鼠适应急性低氧环境。

纤维胶凝素通过调控巨噬细胞M1极化加重脂多糖诱导的急性肺损伤

目的 本研究拟探究纤维胶凝素(ficolin,Fcn)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤中的作用及可能机制。方法 SPF级C57BL/6小鼠和相应ficolin基因敲除鼠分别按照实验要求分为6组:WT-磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)组、WT-LPS组、Fcna^(-/-)-PBS组、Fcna^(-/-)-LPS组、Fcnb^(-/-)-PBS组以及Fcnb^(-/-)-LPS组。LPS组用5 mg/kg LPS剂量滴鼻,2 d后建立急性肺损伤小鼠模型;取肺组织做苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H&E)染色观察肺病理损伤情况;流式细胞术检测肺中性粒细胞和巨噬细胞的比例变化;Western blotting检测肺组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达变化。体外分离培养野生型和ficolin敲除鼠骨髓来源的巨噬细胞,LPS刺激后检测细胞iNOS的表达变化及上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)的浓度。结果 LPS滴鼻法成功建立了急性肺损伤模型,肺中大量炎性细胞浸润,免疫病理损伤加重;肺中性粒细胞和间质巨噬细胞比例增高;经体内体外LPS刺激后,小鼠肺组织和骨髓来源巨噬细胞中iNOS表达升高,NO产生增多;敲除ficolin可显著减少肺间质巨噬细胞比例,降低iNOS的表达和NO的产生,改善LPS诱导的急性肺损伤。结论 Ficolin可通过促进巨噬细胞M1极化参与LPS介导的急性肺损伤,其可能是急性肺损伤治疗的潜在靶点。

葛根芩连汤对内毒素诱导的急性肺损伤小鼠的保护机制

目的探讨葛根芩连汤对内毒素(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法小鼠腹腔注射LPS(5 mg/kg)复制ALI动物模型。将小鼠随机分为空白对照组、LPS组、地塞米松组(2 mg/kg)、葛根芩连汤低剂量组(6.5 g/kg)、葛根芩连汤高剂量组(13 g/kg)。观察各组肺组织病理学改变,测量肺湿/干重比、丙二醛(MDA)、炎症因子白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量及肺组织中Toll样受体(TLR2)、TLR4与核因子(NF)-κB P65蛋白表达。结果葛根芩连汤可有效减轻LPS所致肺组织病理学变化,能降低肺泡灌洗液中炎症细胞的数目,能显著降低肺湿/干重比重并能降低减低TLR2、TLR4与NF-κB P65蛋白。结论葛根芩连汤可减轻LPS所致ALI,对LPS诱导的核因子有保护作用。

脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激

目的探讨脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯(DAS)通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。方法 30只雄性BALB/C小鼠平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+DAS组)和模型组(LPS组)。使用ELISA对肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α水平进行测定。测量BALF中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。对肺组织进行湿/干比(wetto dry ratio,W/D)测定。HE染色用于肺组织病理变化观察和肺组织损伤评分测量。RT-PCR被用于iNOS mRNA的测定。使用Western blot测定iNOS和β-肌动蛋白(β-actin)蛋白的表达。结果 LPS干预后小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平明显上升而SOD水平显著下降,W/D比值和肺组织损伤评分明显升高,iNOS mRNA和蛋白的表达明显增加。LPS+DAS组小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平、W/D比值、肺组织损伤评分、iNOS mRNA和蛋白的表达较LPS组小鼠明显下降;同时BALF中SOD水平较LPS组小鼠明显增加。结论 DAS可能是通过抑制iNOS表达减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。

姜黄素对急性肺损伤大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的：探讨姜黄素对内毒素（LPS）致急性肺损伤（ALI）模型大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响。方法：雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、急性肺损伤模型组及姜黄素治疗组。采用一次性气管内滴注内毒素4mg/kg制备急性肺损伤模型大鼠，治疗组于造模前15min腹腔注射姜黄素200mg／kg，于造模后3、6、12h及24h取肺组织，观察并比较各组肺组织形态学改变，并检测肺湿/干重比、肺含水量和肺组织中NO的含量，realtime PCR及免疫印迹法检测iNOS和eNOS的mRNA和蛋白表达。结果：模型组大鼠肺湿/干重比、肺组织含水量及NO含量均较对照组明显升高，iNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著上调，而eNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著下调。与模型组相比，姜黄素治疗组肺湿/干重比、肺含水量、NO含量均明显降低，iNOS的mRNA和蛋白表达量明显下调，eNOS的mRNA和蛋白表达量明显上调。结论：姜黄素可下调内毒素致急性肺损伤模型大鼠肺组织iNOS表达,并上调eNOS表达。

乌司他丁加甲基泼尼松龙对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤肺微血管通透性的保护

目的:探讨联合应用乌司他丁和甲基泼尼松龙对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)肺微血管通透性的保护作用。方法:舌下静脉注射LPS(5mg/kg)建立大鼠ALI模型;将120只Wistar大鼠,随机分成5组:正常组(10mL/kg)、LPS组(10mL/kg)、甲基泼尼松龙组(20mg/kg)、乌司他丁组(10万U/kg)、联合治疗组[甲基泼尼松龙+乌司他丁组(15mg/kg+10万U/kg)],给药后于2、6、12、24h分批处死大鼠。对比观察给药2、6、12、24h后肺微血管通透性、肺含水量变化。结果:与正常组比较,LPS组、甲基泼尼松龙组、乌司他丁组和联合治疗组各时间点的肺微血管通透性、肺含水量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);甲基泼尼松龙组、乌司他丁组、联合治疗组与LPS组比较肺微血管通透性及肺含水量,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组与甲基泼尼松龙组、乌司他丁组比较肺微血管通透性及肺含水量,在6h、12h时间点差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乌司他丁和甲基泼尼松龙均可降低LPS所致ALI大鼠肺微血管通透性和肺含水量,但二者联合使用治疗效果更好。

急性肺损伤患者诱导性多能干细胞系的建立

目的利用急性肺损伤患者皮肤成纤维细胞构建诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)系。方法采用慢病毒介导逆转录的方法,将含有Oct4、Sox2、Klf4和Nanog四个因子的混合慢病毒转染人皮肤成纤维细胞,诱导出胚胎干细胞样克隆。根据人胚胎干细胞的特性,利用AP染色、实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术、免疫荧光、畸胎瘤形成实验对获得的iPS细胞进行鉴定。结果获得的iPS细胞镜下观察呈典型的ES样克隆状生长,圆形或椭圆形,与饲养层细胞分界清楚;AP染色阳性,RT-PCR及免疫荧光检测iPS细胞高表达人胚胎干细胞标志性基因及蛋白,移植到免疫缺陷鼠体内能够形成向三胚层分化的畸胎瘤。结论成功建立了急性肺损伤患者iPS细胞系,可为急性肺损伤的发病机制研究和临床药物筛选提供良好的细胞模型。

自体来源诱导性多能干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤

背景:干细胞治疗急性肺损伤的研究主要集中在胚胎干细胞和间充质干细胞,有关自体来源诱导性多能干细胞的研究鲜有报道。目的:探讨自体皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞尾静脉移植治疗大鼠急性肺损伤的可能性。方法:将24只提取皮肤组织制备诱导性多能干细胞的SD大鼠(北京维通利华实验动物有限公司提供)随机分为3组,对照组腹腔注射生理盐水,模型组和实验组腹腔注射脂多糖制备急性肺损伤模型,造模24 h后,对照组和模型组尾静脉注射PBS,实验组尾静脉注射诱导性多能干细胞悬液。治疗7 d后,观察肺组织形态学、肺组织湿/干质量比、病理损伤程度评分、血清白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平变化。结果与结论:(1)治疗7d后,实验组肺组织损伤明显改善、肺间质水肿减轻、肺泡间隔变薄、毛细血管充血减轻、炎性细胞浸润减少、部分肺泡内的渗出物减少;(2)治疗7 d后,模型组和实验组肺组织湿/干质量比、病理损伤评分明显高于对照组(P <0.01),实验组肺组织湿/干质量比、病理损伤评分明显低于模型组,差异有显著性意义(P <0.01);(3)治疗7 d后,模型组和实验组血清白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显高于对照组(P<0.01),实验组血清白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显低于模型组,差异均有显著性意义(P <0.01);(4)实验结果表明,自体皮肤成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞移植可有效减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤,降低血清炎性因子水平。

脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶的变化及意义

目的:观察脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化特点及其意义。方法:24只雄性SD大鼠随机分为脓毒症组和对照组,脓毒症组按5 mg/kg体重腹腔注射脂多糖(LPS),对照组给予等量生理盐水,于注射后2 h、6 h经腹主动脉采血、处死,比较动脉血气分析、ELISA法检测的肺组织iNOS、白介素-6(IL-6)含量、右下肺肺组织病理切片计算的病理学肺损伤积分。结果:与对照组比较,脓毒症组大鼠氧合指数显著下降、肺组织iNOS、IL-6含量、病理学肺损伤积分均显著增加,P<0.01。结论:脓毒症大鼠肺iNOS的过度表达增加了炎症因子的释放、增加肺血管通透性,加重肺损伤。

内质网应激诱导剂Salubrinal在大鼠急性肺损伤的作用机制的研究

急性肺损伤是有各种诱因（严重感染、脓毒症、外伤、休克、有害气体吸入等）导致的急性以及进行性的缺氧性呼吸衰竭。其临床表现为起病急,常规吸氧后低氧血症难以纠正,双肺可闻及湿啰音等。目前临床上主要以对症治疗、呼吸支持和液体疗法为主（[1]）。但是也有通过糖皮质激素、前列腺素E1、环氧化酶抑制剂进行治疗。

脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺泡灌洗液明胶酶活性的变化

目的 :探讨明胶酶在脂多糖 (LPS)诱导的急性肺损伤 (ALI)中的作用。方法 :以LPS静脉注射建立ALI模型。将 32只大鼠随机分为正常组及LPS静脉注射后 2、4及 6h组。检测肺通透指数 (LPI)、PaO2 /FiO2 和组织病理学评分 ,以评估肺损伤严重程度。采用明胶酶谱法测量明胶酶活性。以免疫组织化学法观察肺组织IV型胶原。结果 :LPS静脉注射后 ,4及 6h组肺通透指数显著高于正常组 (P <0 .0 1) ,组织病理学呈ALI改变 ;LPS作用 2h时MMP 2 (明胶酶A)活性较正常组升高 (P <0 .0 1) ,并持续至 6h ;MMP 9(明胶酶B)在正常组几乎检测不到 ,而在 2h组发现其活性 ,在 4及 6h组进一步显著升高 (P <0 .0 1)。相关分析表明 ,MMP 9活性与PaO2 /FiO2 、LPI、肺组织病理学评分显著相关 (r分别为 - 0 .6 9、0 .80、0 .71,均P <0 .0 5 )。MMP 2与肺组织病理学评分相关 (r=0 .5 0 ,P <0 .0 5 )。IV型胶原染色显示LPS导致基底膜的破坏。结论 :胶原酶 (MMP 2 ,MMP 9) ,可通过破坏基底膜而参与内毒素诱导急性肺损伤的病理过程。

牛磺胆酸钠诱导猪急性重症胰腺炎后肺损伤的病理特征

目的 :观察猪急性重症胰腺炎 (ASP)性肺损伤的病理改变。方法 :猪 12头 ,体重 11～ 12kg ,随机分为胰腺炎组 (n =6)和对照组 (n =6)。在麻醉状态下 ,进腹向胰总管内注入 1mL/kg 5%牛磺胆酸钠混合液 (每毫升内含 80 0 0～ 10 0 0 0BAEE单位胰蛋白酶 ,pH 7 6)诱导ASP。以 0 9%NaCl磷酸盐缓冲液取代 5%牛磺胆酸钠混合液即为对照组。 72h后推注 10 %KCl 2 0mL ,处死后立即进胸腹取胰肺组织 (多点取材且位置相对固定 ) ,用 10 %福尔马林磷酸缓冲液 (pH 7 4)固定 ,常规石蜡切片 ,HE染色。结果 :ASP组胰腺表现为广泛出血、坏死、大量炎性细胞浸润 ,并伴有较严重的血流动力学紊乱、生化异常及其他器官功能损害 ,符合ASP。肺组织水肿明显 ,部分发生实性变 (色泽似肝 )、部分呈代偿性肺气肿 ,偶见灶性或片状出血 ,大量炎性细胞浸润 ,有微脓栓形成 ,炎性区肺泡结构破坏 ,气管黏膜上皮细胞呈肿胀、变性、坏死 ,纤毛粘连、脱落。结论 :ASP后肺损伤呈早期弥漫性肺泡损伤 ,是探讨和研究ASP后急性肺损伤病理生理机制和防治对策的。

芩连翘皮方保护内毒素诱导急性肺损伤小鼠的作用机制

目的:研究芩连翘皮方保护内毒素诱导急性肺损伤小鼠的作用机制。方法:选取实验小鼠腹腔注射内毒素5mg/kg,复制急性肺损伤动物模型。将小鼠随机分为空白对照组、内毒素注射组、地塞米松组和芩连翘皮方组,分析各组小鼠的变化情况。结果:芩连翘皮方能够有效减轻内毒素诱导的肺组织病理学变化,快速降低小鼠肺泡灌洗液中炎症细胞的数目,降低肺湿/干比重,降低丙二醛水平,降低p38丝裂原激活蛋白激酶与核转录因子-κBP65蛋白,提升超氧化物歧化酶水平。结论:使用芩连翘皮方能够有效减轻内毒素所引起的急性肺损伤,对于内毒素所引起的急性肺损伤有较强的保护作用。

维甲酸对脂多糖诱导急性肺损伤防治作用的实验研究

急性肺损伤（ALI）是指机体遭受严重感染、创伤、辐射、休克等以后，出现的以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤导致肺通透性增加、进而导致大量蛋白和炎症细胞因子渗出为病理特征的一种肺部炎症，是急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的早期阶段。以呼吸困难、难治性低氧血症和非心源性肺水肿为临床特征。

金纳多对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的保护作用机制研究

急性肺损伤（ALI）是指严重感染、创伤、休克等打击后，出现以肺泡毛细血管损伤导致肺水肿和肺不张为病理特征的一种肺部炎症与通透性增加的综合征。虽然对其治疗有一些新的突破，但其发病机制尚未完全阐明，发病率和病死率依然居高不下。

急性肺损伤动物模型建立方法的研究进展

急性肺损伤是一种具有高发病率和高死亡率的临床呼吸综合征,其发病机制复杂,治疗手段有限,给社会造成了严重的经济负担。动物模型能在个体水平、器官水平、细胞水平上反映疾病的发病机制及预防治疗方法的有效性和局限性。本文对急性肺损伤动物模型的构建方法进行了综述,以期为急性肺损伤动物模型的构建提供参考,便于科研工作者根据自身的实验需要,选择相应的实验方法构建急性肺损伤动物模型,进而研究不同因素导致的急性肺损伤的发病机制和预防治疗方法。

盐酸氨溴索对急性肺损伤大鼠血浆一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶含量的影响

目的 探讨盐酸氨溴索对急性肺损伤大鼠血浆NO，iNOS含量的影响。方法 将20只大鼠分成对照组（A组）、ALI模型组（B组）、ALI加常规剂量盐酸氨溴索治疗组（C组）、ALI加大剂量盐酸氨溴索治疗组（D组）。A组采用生理盐水尾静脉注射，其余3组均采用尾静脉注射油酸的方式制作急性肺损伤大鼠模型，C、D组在注射油酸后，经腹腔注射不同剂量的盐酸氨溴索，A、B组腹腔内注射生理盐水，4h后．观察各组小鼠的呼吸次数和紫绀情况，同时取血，测量血浆中NO、iNOS的含量。结果 A、B、C、D四组的血浆NO含量的均值分别为：（0．500±0．057）μmol／L、（1．092±0．211）μmol／L、（0．752±0．164）μmol／L、（0．710±0．118）μmol／L。iNOS的含量分别为（0．754±0．047）μmol/L、（1．252±0．425）U/mgprot，（0．638±0．073）U/mgprot，（0．588±0．059）U/mgprot。结论 （1）盐酸氨溴索可以降低急性肺损伤大鼠的血浆NO和iNOS的含量；（2）常规治疗量和大剂量的盐酸氨溴索的作用效果相同。

氢气饱和生理盐水对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨氢气饱和生理盐水对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用。方法将90只雄性BABL/c小鼠随机分为空白(Sham)组、肺损伤(ALI)组、肺损伤氢气饱和生理盐水干预(ALI+HRS)组,每组30只。ALI组和ALI+HRS组通过腹腔注射LPS制作肺损伤模型,ALI+HRS组在LPS注射1 h后,腹腔注射氢气饱和生理盐水,每组分别取12只小鼠,观察各组小鼠7 d生存情况。在损伤后3、5、7 d,每组处死3只小鼠,观察肺组织病理变化,检测肺组织中iNOS和Arg-1的表达变化。结果与Sham组相比,ALI组生存率降低;与ALI组相比,ALI+HRS组生存率明显升高;H-E染色显示,与ALI组相比,ALI+HRS组肺组织炎性细胞浸润明显减少;qPCR检测显示,相比于ALI组,ALI+HRS组iNOS的表达量下降,Arg-1表达上升;免疫荧光染色的结果与qPCR相一致。结论对于LPS诱导的小鼠肺损伤,腹腔注射饱和氢气生理盐水能够抑制促炎因子iNOS的表达并促进抑炎因子Arg-1的表达,从而减轻内毒素诱导的小鼠肺损伤。

内毒素诱导急性肺损伤大鼠肺泡灌洗液明胶酶活性的变化

目的 探讨明胶酶在内毒素诱导急性肺损伤中的作用。方法 将大鼠随机分为正常对照组及脂多糖(LPS)静注后 2、4、6 h组(L2 h、L4 h 和 L6 h 组)。以 LPS 静脉注射建立急性肺损伤(ALI)模型。检测肺损伤指标、肺泡灌洗液中7S蛋白含量及明胶酶活性。以免疫组织化学法观察肺组织Ⅳ型胶原。结果L2 h组7S蛋白含量显著高于对照组(P<0. 05),L4 h和 L6 h组进一步显著升高。7S蛋白含量与肺通透指数、肺湿/干重比、肺血管通透性显著相关(r分别为 0 .80、0 .61、0 .78,P<0. 05)。L2 h组明胶酶 A(MMP 2)活性较对照组显著性升高(P< 0 .01),并持续至 6 h;明胶酶 B(MMP- 9)在对照组几乎检测不到,在 L2 h组发现其活性,在 L4 h和 L6 h组并进一步显著性升高(P<0. 01)。Ⅳ型胶原染色显示,LPS导致了基底膜的破坏。结论 明胶酶可通过破坏基底膜而参与内毒素诱导急性肺损伤的病理过程。

低氧诱导下急性肺损伤的HIF-1α与VEGF相关性探析

急性肺损伤(ALI)是各种原因导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,造成肺水肿和急性低氧性呼吸功能不全。在急性低氧条件下,肺血管收缩、肺动脉压力升高、肺泡水肿和塌陷,导致肺内分流显著增加,进而诱发低氧血症,造成肺血管痉挛及肺微小血栓,共同诱导肺动脉高压的形成。在低氧诱导下,肺组织的低氧诱导因子(HIF-1α)与血清的血管内皮生长因子(VEGF)表达量发生相应改变,这可能是导致ALI形成的原因之一,现就有关低氧诱导下ALI、HIF-1α与VEGF研究现状进行综述。