重组质粒载体pCMV-LRIG2转染BIU-87细胞株的效应研究

目的研究携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2对膀胱癌细胞株BIU-87生物学行为的影响。方法用脂质体介导的基因转染技术,将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染至膀胱癌细胞株BIU-87,用G418筛选出抗性克隆后,Western blot检测转染前后LRIG2和EGFR蛋白表达水平变化,MTT法绘制转染前后细胞生长曲线,Transwell法检测转染前后细胞侵袭力,同质黏附实验观察转染前后细胞黏附能力。结果转染pCMV-LRIG2组LRIG2蛋白表达水平显著高于未转染组和空载体转染组;转染pCMV-LRIG2组细胞生长速度较未转染组和空载体转染组明显减慢,侵袭力显著低于未转染组和空载体转染组,而黏附能力显著高于未转染组和空载体转染组。结论LRIG2有类似于抑癌基因的作用,通过对EFG-EGFR信号转导途径发挥负反馈抑制作用,从而抑制BIU87细胞的生长、侵袭和转移。

LRIG2蛋白表达与人垂体腺瘤侵袭性的研究

目的探索研究LRIG2蛋白表达水平与人垂体腺瘤侵袭性的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测159例垂体标本(8例正常人垂体标本,151例人垂体腺瘤标本)中LRIG2和MMP-9的表达水平,并进行相关性分析。结果 LRIG2在正常人垂体中无阳性反应,LRIG2蛋白表达水平在侵袭性垂体腺瘤比非侵袭性垂体腺瘤显著增高(P<0.001),且LRIG2蛋白与MMP-9的表达水平呈正相关(r=0.698,P<00.001)。结论 LRIG2可能作为一个新的垂体腺瘤侵袭性预测指标,检测LRIG2表达水平可指导临床评价垂体腺瘤的侵袭性及制定个体化治疗方案。

LRIG2基因在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:了解LRIG2基因及其产物在膀胱癌中的表达情况及其与肿瘤分级分期的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应和Western-blot技术检测了38例膀胱癌组织和16例正常膀胱黏膜组织中LRIG2mRNA和蛋白的表达情况。结果:膀胱癌组织中LRIG2mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常膀胱黏膜组织;且分级和分期越高,LRIG2mRNA和蛋白的表达水平越低。结论:LRIG2基因有可能是一种新的抑癌基因,其缺失或表达水平下调会导致肿瘤细胞生长分化,提示其有可能成为肿瘤基因治疗的又一靶点。

LRIG2基因在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞株生物学行为的影响

目的了解LRIG2基因在膀胱肿瘤和正常膀胱组织中的表达及其与膀胱肿瘤分级、分期之间的关系。并将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染膀胱癌细胞株BIU-87,观察对其生物学行为的影响。方法利用半定量RT-PCR技术检测38例膀胱肿瘤组织和16例正常膀胱黏膜组织内LRIG2基因mRNA表达情况。用脂质体介导的基因转染技术,将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染至膀胱癌细胞株BIU-87,检测转染前后细胞生长力、侵袭力及黏附能力的改变。结果肿瘤组织内LRIG2mRNA的表达水平显著低于正常膀胱组织,且与肿瘤的分级、分期呈负相关。转染pCMV-LRIG2组细胞生长速度较未转染组和空载体转染组明显减慢,侵袭力显著低于未转染组和空载体转染组,而黏附能力显著高于未转染组和空载体转染组。结论 LRIG2有类似于抑癌基因的作用,通过对EFG-EGFR信号转导途径发挥负反馈抑制作用,从而抑制BIU-87细胞的生长、侵袭和转移。

miR-196b通过LRIG2调控宫颈癌细胞增殖和凋亡生物学特性的分子机制

目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski和正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-196b和LRIG2 mRNA的表达水平;将宫颈癌SiHa细胞分为miR-con组(转染miR-con)、miR-196b组(转染miR-196b mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-196b组(转染miR-196b inhibitor)、miR-196b+si-con组(共转染miR-196b和si-con)、miR-196b+si-LRIG2组(共转染miR-196b和si-LRIG2)、miR-con+WT-LRIG2组(共转染miR-con和WT-LRIG2)、miR-con+MUT-LRIG2组(共转染miR-con和MUT-LRIG2)、miR-196b+WT-LRIG2组(共转染miR-196b和WT-LRIG2)、miR-196b+MUT-LRIG2组(共转染miR-196b和MUT-LRIG2)。采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测荧光活性。结果:相较于正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski中miR-196b的表达水平显著升高,LRIG2的表达水平显著降低(P<0.05);干扰miR-196b可抑制SiHa细胞增殖促进细胞凋亡;抑制Bcl-2、CDK4和Cyclin D1蛋白的表达,促进Bax、Caspase-3蛋白的表达。miR-196b靶向调控LRIG2的表达。抑制LRIG2表达能逆转干扰miR-196b对SiHa细胞的抑制增殖、促进凋亡的作用以及对AKT信号通路中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达的抑制作用。结论:miR-196b可抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与LRIG2及AKT信号通路有关,将可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶点。

LRIG2基因表达与垂体腺瘤侵袭性的关系

目的探讨富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样多肽2(LRIG2)基因在垂体腺瘤中的表达及其与肿瘤侵袭性的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测临床手术切除的23例侵袭性(13例)和非侵袭性(10例)垂体腺瘤标本中,LRIG2基因在mRNA表达水平上的差异。结果RT-PCR显示在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中mRNA表达的阳性率均为100%。在表达强度上,LRIG2在侵袭性垂体腺瘤中mRNA表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤(P<0.05)。结论LRIG2可能与垂体腺瘤的侵袭性密切相关。

LRIG2基因全长及胞外段抑制胶质瘤细胞系U87凋亡的机制

目的研究富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因全长及胞外段抑制胶质瘤细胞系U87凋亡的机制。方法将LRIG2全长(LRIG2),LRIG2胞外段(LRIG2ecto)及空白对照(Con)慢病毒表达载体分别感染U87,筛选获得稳定细胞株;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞线粒体膜电位;Western blotting检测凋亡相关蛋白及信号通路蛋白表达。结果 LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞凋亡率分别为2.86%±0.30%和4.04%±0.59%,明显低于对照组5.90%±0.45%(P<0.05);其线粒体膜电位分别是对照组的(2.77±0.25)倍和(2.33±0.17)倍,较对照组明显升高(P<0.01);其凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值分别是对照组的(1.45±0.09)倍和(1.35±0.08)倍,较对照组明显升高(P<0.01);其表皮生长因子受体(EGFR),磷酸化EGFR(P-EGFR)及其下游的磷酸化蛋白激酶B(p Akt)均较对照组明显增加。结论 LRIG2基因全长及胞外段均可激活EGFR信号通路,抑制胶质瘤细胞凋亡。

LRIG2基因短发夹RNA表达载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

目的构建针对富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,建立稳定转染的细胞株,观察其对目的基因表达的影响。方法根据GenBank中LRIG2基因序列设计2条RNA干扰序列,命名LRIG2-shRNA1、LRIG2-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照。据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil2载体,转化扩增后进行序列测定。用不同浓度的G418作用于GL15细胞,得到G418对于GL15细胞的筛选浓度。3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑单克隆后扩增获得稳定株。逆转录RT-PCR和Western印迹法分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG2的表达。结果3种重组表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-LRIG2-shRNA2和pGenesil 2-negative shRNA)经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确。G418对于GL15细胞的筛选浓度为600μg/ml,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG2-shRNA2组细胞LRIG2 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-negative shRNA组。结论成功构建了针对LRIG2基因的shRNA表达载体(pGenesil2-LRIG2-shRNA2),转染细胞后可抑制LRIG2基因表达,为研究LRIG2基因的功能提供了基础。

LRIG2基因全长及胞外段对胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因全长及胞外段对脑胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响。方法将LRIG2全长,LRIG2胞外段(LRIG2ecto)及空白质粒(对照)经慢病毒法分别转染胶质瘤细胞系U251细胞,筛选稳定细胞株,实时PCR及免疫印迹法检测mRNA及蛋白表达,细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期及细胞凋亡。结果两转染组Flag标签蛋白表达成功;两转染组LRIG2全长及LRIG2ectomRNA表达较对照组明显升高(P<0.01);两转染组细胞增殖率均明显高于对照组(P<0.01);两转染组S期与G2/M期细胞数之和(即细胞增殖指数)均明显高于对照组(P<0.01),而细胞凋亡率均明显低于对照组(P<0.05)。结论 LRIG2基因全长及LRIG2ecto促进胶质瘤细胞增殖,并将细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞凋亡。

干扰LRIG2通过调控PDGFRβ信号通路抑制人胶质母细胞瘤细胞增殖

目的探讨干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因表达对人胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制。方法构建LRIG2干扰(LRIG2sh)及对照(scr)慢病毒载体质粒并感染U87细胞,筛选获得稳定细胞株; CCK8检测细胞增殖及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期;裸鼠皮下成瘤实验检测在体成瘤能力; Western Blotting检测信号通路蛋白表达。结果 LRIG2干扰组中LRIG2 mRNA水平及蛋白表达水平均明显低于对照组,免疫荧光示干扰组中PDGFRβ荧光强度明显弱于对照组。PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组细胞增殖率明显低于对照组(P <0. 05),且呈浓度和时间依赖性。PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组中软琼脂克隆形成能力明显低于对照组,G0/G1期细胞数百分比明显高于对照组,S期及G2/M期细胞数百分比明显低于对照组(P<0. 01)。LRIG2干扰组裸鼠皮下成瘤体积和重量明显小于对照组(P <0. 01)。PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组中p PDGFRβ及其下游p Akt、p Stat3表达水平明显低于对照组,且LRIG2干扰后PDGFRβ抑制剂对其信号通路的抑制水平明显减弱。结论 LRIG2下调通过抑制PDGFRβ信号通路抑制胶质母细胞瘤细胞离体和在体增殖,LRIG2有望成为胶质细胞瘤治疗的新靶点。

川芎挥发油通过LRIG2调控EGFR/VEGF-A通路对胶质瘤血管生成的影响

目的:探究川芎挥发油(LCH)通过富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域2(LRIG2)调控表皮生长因子受体(EGFR)/血管内皮生长因子A(VEGF-A)通路对胶质瘤血管生成的影响。方法:体外培养人恶性胶质瘤U87 MG细胞,分别采用低(L-LCH)、高(H-LCH)剂量LCH进行处理,检测LCH对U87 MG细胞恶性生物学行为(CCK-8检测增殖能力,Transwell实验检测迁移、侵袭能力)及血管生成(三维培养实验)的影响;体外培养U87 MG细胞及正常人星形胶质细胞(HA1800细胞),Western blot检测LRIG2、EGFR、VEGF-A在两者中的表达情况及L-LCH、H-LCH对LRIG2、EGFR、VEGF-A表达的影响;向U87 MG细胞转染LRIG2过表达[LRIG2(+)]质粒,检测U87 MG细胞LRIG2、EGFR、VEGF-A表达变化,以及恶性生物学行为与血管生成情况;U87 MG细胞在H-LCH处理的同时亦给予转染LRIG2(+)质粒处理,观察其恶性生物学行为与血管生成情况。结果:L-LCH、H-LCH处理后U87 MG细胞增殖率,迁移、侵袭细胞数及小管数量均减少(P<0.05);U87 MG细胞LRIG2、EGFR、 VEGF-A蛋白表达较之HA1800细胞均增加(P<0.05);L-LCH、H-LCH处理后U87 MG细胞LRIG2、EGFR、VEGF-A蛋白表达均减少(P<0.05);增加转染LRIG2(+)质粒处理可部分逆转H-LCH对U87 MG细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响。结论:LCH能抑制U87 MG细胞恶性生物学行为及血管生成,可能通过下调LRIG2表达,进而下调EGFR、VEGF-A表达而实现。

LRIG2在小鼠胃肠道中的分布特点及其意义

目的观察富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)在小鼠胃肠道中分布特点,并探讨LRIG2在胃肠动力调控以及胃肠道肿瘤发生中所起的作用。方法采用Western blotting检测LRIG2蛋白在成年小鼠胃、小肠、结肠中的表达水平,免疫荧光法检测LRIG2在胃肠道黏膜层、黏膜下层、肌层的分布特点,以及LRIG2在Cajal间质细(interstitial cells of Cajal)、PDGFRɑ阳性细胞或肠内胶质细胞的表达情况。结果 LRIG2蛋白在胃、小肠、结肠均有表达,而且表达水平三者差异有统计学意义(P<0.05);其中结肠最高,小肠次之,胃最低。肠道切片免疫荧光染色结果提示,LRIG2阳性细胞主要分布于胃、小肠、结肠肌间神经丛;LRIG2阳性细胞在小肠黏膜下层也有分布。肠道全层铺片免疫荧光染色结果提示,LRIG2阳性细胞广泛分布于肌间神经丛中,细胞呈卵圆形,并团簇状紧密排列。肠内胶质细胞并不表达LRIG2,但是包绕于LRIG2阳性细胞周围。LRIG2在Cajal间质细胞以及PDGFRα阳性细胞上也均不表达,但是LRIG2阳性细胞和二者紧密相邻。结论LRIG2在胃肠道中分布广泛,并且和胃肠动力以及胃肠道细胞增殖的调控密切相关。LRIG2可能是研究胃肠动力紊乱性疾病以及肠道肿瘤的发病机制的一个新靶点。

LRIG2蛋白在人催乳素腺瘤细胞中的表达研究

目的:明确LRIG2蛋白在人催乳素腺瘤细胞中的表达与定位。方法:采用免疫细胞化学方法检测LRIG2蛋白在人催乳素腺瘤原代细胞中表达情况,人胶质瘤细胞系U87细胞设为阳性对照。结果:LRIG2蛋白在原代培养的人催乳素腺瘤细胞中高表达(86.6±2.15)%,与其在U87细胞中表达率无明显统计学差异;同时免疫细胞化学结果提示LRIG2蛋白在人催乳素腺瘤细胞中定位于胞浆,也与其在U87细胞中表达一致。结论:LRIG2蛋白在人催乳素腺瘤细胞中高表达,定位于胞浆,提示其可能在垂体腺瘤发生、发展过程中发挥作用,为进一步研究垂体腺瘤发生机制奠定基础。

LRIG1基因与肿瘤的关系

LRIGI是新近发现的抑癌基因，是LRIGs家族成员（LRIGl、LRIG2和LRIG3）之一，在哺乳动物体内广泛存在。它编码的产物为一类跨膜糖蛋白：在其胞外段含有多个亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域（tandemleucine—richrepeatsandimmunoglobulin—likedomains，LRIG）。目前对其家族研究较为透彻的是LRIG1，研究表明其与多种恶性肿瘤密切相关，现就近几年LRIG1与肿瘤之间关系的研究予以综述。

Association of Expression of Leucine-rich Repeats and Immunoglobulin-like Domains 2 Gene with Invasiveness of Pituitary Adenoma

The Leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-2（LRIG2） gene expression in pituitary adenoma and its correlation with tumor invasiveness were studied.The expression of LRIG2 mRNA and protein in human pituitary adenoma obtained surgically was detected by RT-PCR（39 cases） and immunohistochemical staining（30 cases）.It was found that LRIG2 was mostly localized at the nucleus of the pituitary adenoma cells.Its expression was significantly higher in the invasive cases than in the non-invasive cases.LRIG2 protein was positive in 14 cases out of 21 cases of invasive adenoma,but only 2 cases were positive in 9 cases of non-invasive adenoma.The positive expression rate of LRIG2 mRNA was 91.3% in invasive cases（total 23 cases） and 62.5% in non-invasive cases（total 16 cases）,respectively.LRIG2 gene is overexpressed in invasive pituitary adenoma.It may play an important role in pituitary adenoma invasiveness and further studies are necessary to elucidate the mechanism under this phenomenon.

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白基因家族和肿瘤关系研究进展

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白（LRIG）基因家族含有3个成员：LRIG1、LRIG2及LRIG3[1].目前对该家族成员LRIG1的研究较多,对LRIG2、3的研究也逐渐受到关注.LRIG1被认为是一个抑癌基因,LRIG3也可能具有抑癌基因的功能,LRIG2作用则相反,可能是一种促癌基因.现就LRIG基因家族的发现,功能,其与人类肿瘤关系及作用机制的研究进展综述如下.

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白在成年大鼠脑组织的表达及其意义

多亮氧酸重复区免疫球蛋白样蛋白（LRIGs）是一类细胞表面跨膜蛋白，包括LRIGI、LRIG2、LRIG3，其胞外段均含多亮氨酸重复区（LRR）和免疫球蛋白样区（Ig）。

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制

目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法用携带U6启动子和LRIG2特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil2-LRIG2-shRNA（siRNA）及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-scramble—shRNA（set）转染胶质瘤细胞系GL15、G418（600mg/L）筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westemblot法检测LRIG2和表皮生长因子受体（EGFR）表达的改变。噻唑蓝（MTT）比色法检测稳定转染对照组和实验组细胞的增殖，流式细胞仪检测对照组和实验组细胞的细胞周期改变。结果实验组细胞LRIG2mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了68．6％和62．3％，EGFR蛋白水平下降了32．6％。MTT结果显示实验组细胞增殖率低于对照组。细胞周期分析表明对照组G0／G1期为（26．72±2．10）％，实验组为（36．58±3．29）％（P〈0．05），LRIG2表达下调后GL15细胞细胞周期部分阻滞在G0／G1期。结论GL15细胞经RNA干扰基因表达后，LRIG2mRNA和蛋白水平明显降低，同时EGFR蛋白水平下降，从而抑制细胞增殖和使细胞周期阻滞在G0／G1期。LRIG2可通过EGFR信号系统影响胶质瘤细胞的生长。