骨碎补总黄酮上调骨质疏松症模型大鼠Wnt/LRP-5/β-catenin通路表达的研究

目的 验证骨质疏松症模型大鼠与假手术大鼠Wnt/LRP-5/β-catenin信号通路相关基因表达是否存在差异,观察骨碎补总黄酮给药干预对骨质疏松症模型大鼠该通路基因表达的影响。方法 取40只3月龄的健康雌性SD大鼠,随机分为假手术组(SHAM组)、骨质疏松症模型组(OVX组)、骨质疏松模型+骨碎补总黄酮灌胃组(OVX+OTF组)、骨质疏松症模型+雌激素灌胃组(OVX+USP组),每组各10只。除SHAM组外,各组均通过卵巢切除术进行骨质疏松症造模,SHAM组进行假手术。常规饲养10周后采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)验证造模,成功后开始药物干预。OVX+OTF组给予108 mg/(kg·d)剂量的骨碎补总黄酮进行灌胃;OVX+USP组给予0.1 mg/(kg·d)剂量的结合雌激素溶液灌胃;OVX组及SHAM组给予适量生理盐水灌胃,每日一次,给药2个月后以脱颈法处死各组大鼠。采用RT-PCR法检测骨质疏松症模型大鼠与SHAM组大鼠之间Wnt/LRP5/β-catenin信号通路相关基因表达差异;采用免疫组化法观察骨碎补总黄酮灌胃干预对骨质疏松症模型大鼠Wnt/LRP5/β-catenin信号通路表达的影响。结果 与SHAM组相比,骨质疏松症模型大鼠的Wnt3α、LRP-5及β-catenin、Runx2 mRNA表达均显著降低(P<0.01);与OVX组相比,OVX+OTF组及OVX+USP组大鼠的Wnt1、LRP-5及β-catenin、Runx2的蛋白表达均呈显著上升趋势(P<0.01)。结论 骨质疏松症模型大鼠的Wnt3α、LRP-5、β-catenin基因表达均显著下调,骨碎补总黄酮可能通过提高OVX大鼠胫骨中Wnt/LRP-5/β-catenin通路中关键蛋白表达发挥抗骨质疏松作用。

老年COPD患者并发骨质疏松与LRP5基因多态性的相关性研究

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者并发骨质疏松与低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)的相关性。方法回顾性分析2017年3月至2020年3月宜宾市第二人民医院收治的380例老年COPD患者临床资料。根据是否伴有骨质疏松将患者分为观察组(伴骨质疏松,n=208)和对照1组(无骨质疏松,n=172)。另收集同期老年非COPD骨质疏松患者作为对照2组(单纯骨质疏松的非COPD患者,n=84),老年体检健康者作为对照3组(n=84)。对4组的血液DNA进行遗传分析,分析患者LRP5的tagSNP基因型。采用Logistic回归分析患者在不同模式下SNP的OR值,评价COPD患者在发病时LRP5与骨骼并发症的相关性。结果根据隐性、显性、共显性等遗传模式下SNP的检验值,rs671494、rs312016、rs638051及rs901823为符合条件的SNP因素。Logistic回归分析结果显示,携带C/C基因型的COPD患者及LRP5基因的rs901823、rs671494基因型与患者罹患骨质疏松的相关程度最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LRP5基因中的rs901823、rs671494与COPD患者并发骨质疏松相关,有助于判断骨质疏松发生风险。

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响

目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2?h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P<0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P<0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P<0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。

LRP-5在不同分化程度胃癌组织中的表达及其意义

通过检测低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)在不同分化程度胃癌中的表达差异及其与胃癌患者临床病理资料之间的关系,探讨LRP-5在胃癌发病过程中的作用.采用实时荧光定量PCR及免疫组化的方法,对比分析了26例高分化、35例中分化、48例低分化胃癌及15例正常胃组织中LRP-5基因在转录和翻译水平的表达情况.实时荧光定量PCR和免疫组化结果均显示:LRP-5在中分化胃癌、低分化胃癌组织中的表达量高于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05),在高分化胃癌组织中与正常胃组织之间比较无明显差别(P>0.05).结合临床资料分析表明,LRP-5蛋白在伴有淋巴结转移的胃癌组织中表达高于淋巴结未转移胃癌组织(P<0.05),与胃癌患者年龄、性别因素无关.提示LRP-5与胃癌的发生、发展、转移和恶性程度相关,可作为胃癌的诊断、分级和预后的判断依据.

斑贞1号、川芎嗪和5-氟尿嘧啶联合对人胃癌细胞肺耐药蛋白基因表达影响

目的探讨斑贞1号、川芎嗪(TMP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与LRP表达的相关性。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在单纯5-FU和5-FU联合斑贞1号及TMP处理组肺耐药蛋白(LRP)mRNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,LRPmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组LRP mRNA表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论斑贞1号、TMP和5-FU联合逆转SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与LRP基因相关,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。

安徽地区绝经后妇女低密度脂蛋白受体相关蛋白5基因多态性与骨密度的关系

目的研究安徽地区绝经后妇女低密度脂蛋白受体相关蛋白5基因(LRP5)Q89R和A1330V多态性位点与骨密度的关系。方法采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测安徽地区247名绝经后妇女LRP5基因Q89R和A1330V多态性位点的基因型,双能X线骨密度仪测定腰椎和股骨的骨密度。结果本研究人群中,LRP5基因Q89R和A1330V多态性呈连锁不平衡(χ2=24.48,P<0.01)。Q89R位点QR组的股骨颈、Wards三角和大转子区骨密度明显低于QQ组,A1330V位点AV/VV组的股骨颈骨密度明显低于AA组。在调整年龄、身高、体重、BMI以及绝经年限这些影响因素后,Q89R多态位点与股骨颈和大转子区骨密度显著相关(P<0.05),而A1330V多态性位点则与各位点的骨密度均无相关性。结论LRP5基因Q89R多态性位点可能对绝经后妇女骨密度有影响,提示LRP5基因是影响骨密度的候选基因之一。

“肾脑相济”电针疗法对围绝经期抑郁症大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的：观察电针对围绝经期抑郁症大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨电针治疗抑郁的作用机制。方法：将雌性SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、药物组和电针组,每组12只;除空白组外,其余大鼠采用双侧卵巢切除术和慢性不可预见刺激性应激法制备围绝经期抑郁症大鼠模型,用悬尾实验评价大鼠的行为学改变,测量海马组织中雌二醇（E2）和去甲肾上腺素（NE）的含量,分析围绝经期抑郁情况。药物组采用盐酸氯米帕明灌胃,电针组采用电针治疗“百会”、“三阴交”和“肾俞”。采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测大鼠海马组织中Dickkopf-1（DKK1）、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（LRP-5）和低密度脂蛋白受体相关蛋白-6（LRP-6）的表达情况,分析其表达与围绝经期抑郁的相关性。结果：模型组大鼠海马组织E2和NE含量降低,悬尾不动时间明显增加,与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;模型组海马组织DKK1蛋白表达下降,LRP-5和LRP-6蛋白表达升高。经过28 d治疗,药物组和电针组E2和NE含量升高,DKK1表达升高,LRP-5和LRP-6表达下降,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：电针治疗通过调节海马中DKK1、LRP-5和LRP-6蛋白的表达影响Wnt/β-catenin信号通路,促进海马神经细胞的修复,减少细胞调亡,起到抗抑郁作用。

Dickkopf-1、LRP-5和LRP-6基因在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的探讨Dickkopf-1(DKK-1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5(LRP-5)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-6(LRP-6)在卵巢上皮性癌中的表达和临床意义。方法2002年1月至2008年4月在中国医科大学附属盛京医院采用RT-PCR的方法检测56例卵巢上皮性癌、35例卵巢上皮性良性肿瘤和12例正常卵巢组织中DKK-1mRNA、LRP-5mRNA和LRP-6mRNA的表达情况,分析3种基因与各临床病理参数的关系及其在癌组织中的表达相关性。结果DKK-1mRNA,LRP-5mRNA和LRP-6mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达强度分别为0.90±0.32,0.71±0.27,0.80±0.28;明显高于卵巢上皮性良性肿瘤组织0.58±0.23,0.58±0.29,0.54±0.22和正常卵巢组织0.36±0.29,0.40±0.25,0.32±0.27(P均<0.0001)。DKK-1mRNA、LRP-5mRNA和LRP-6mRNA表达强度与临床分期(P=0.003～0.020)和病理分级(P=0.000～0.028)密切相关。DKK-1mRNA与LRP-5mRNA和LRP-6mRNA在卵巢上皮性癌中的表达强度存在统计学相关性(r=0.341,P<0.0001;r=0.815,P<0.0001)。结论DKK-1、LRP-5和LRP-6mRNA在卵巢上皮性癌中表达增强,其表达强度存在相关联系。DKK-1、LRP-5和LRP-6在卵巢上皮性癌的发生、发展过程中起重要作用。

益骨汤含药血清通过经典Wnt信号通路促进成骨细胞增殖分化的研究

目的:在经典wnt信号通路抑制剂大鼠Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的干预下,观察益骨汤含药血清对成骨细胞的经典Wnt信号通路的影响,探究益骨汤治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症提供实验依据。方法:将40只雌性SD大鼠随机分成2组,益骨汤水提液组和空白对照组,连续灌胃10天,获取含药血清。从乳鼠颅盖骨中分离培养成骨细胞,实验分为4组,即A组(益骨汤含药血清组)、B组(DKK1组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清组)、D组(空白血清对照组)。进行细胞增殖MTT检测、碱性磷酸酶活性检测,RT-PCR检测经典Wnt/β-catenin通路中β-链蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、DKK1基因的表达情况。结果:根据MTT法动态观察各组成骨细胞增殖,发现成骨细胞增殖呈规律性:48 h至72 h成骨细胞呈对数增长期,96 h后细胞增殖逐渐受到抑制。同一时间点与B组比较,A、C、D各组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。同一时间点与D组比较,A组成骨细胞的增殖和ALP活性显著较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,A、C、D组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与D组比较,A组β-catenin mRNA、LRP-5 mRNA、TCF mRNA的表达均明显升高,DKK1 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益骨汤含药血清可能是通过抑制DKK1的高表达,从而上调经典Wnt/β-catenin信号中β-catenin、LRP-5、TCF基因的表达,达到促进成骨细胞增殖,起到抗骨质疏松作用。

人参皂苷Rg3对大肠癌细胞系Lovo/5-Fu侵袭性及耐药影响的相关研究

目的探讨Rg3抑制大肠癌高侵袭细胞系Lovo/5-Fu的侵袭能力和逆转化疗耐药的机制。方法应用MTT法、穿膜实验、细胞膜流动性实验、Western blot等检测方法,检测不同浓度Rg3原液对Lovo/5-Fu逆转耐药的机制、细胞膜流动性的影响、细胞侵袭和转移能力及对转移和耐药相关蛋白nm23、caspase-8、LRP表达的影响。结果 Rg3作用后,Lovo/5-Fu细胞对氟尿嘧啶类的耐药性下降(P<0.05),细胞膜的流动性减低(P<0.05),细胞的穿膜能力减低(P<0.05),Rg3作用后caspase-8及nm23的表达明显上调,耐药相关蛋白LRP的表达无明显改变。结论 Rg3通过上调nm23的表达抑制了Lovo/5-Fu细胞的侵袭和转移能力,降低细胞膜的流动性而逆转耐药与上调caspase-8的表达相关。