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LRRC15影响A549细胞自噬的作用研究
1
作者
王棋文
贾燕玲
+1 位作者
李盼
余国营
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期398-407,共10页
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博...
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化和A549细胞损伤模型,检测了LRRC15的表达变化。转染siLRRC15后分别采用MTT、GFP-RFP-LC3双荧光标记系统和免疫印迹等方法检测了细胞活性和自噬的变化。结果表明:BLM处理后,小鼠肺组织和A549细胞中LRRC15表达显著上调;将设计和合成的siLRRC15转入A549细胞,LRRC15的表达极显著降低,可以部分恢复BLM引起的细胞损伤;BLM处理A549细胞后,LC3-Ⅱ和P62蛋白呈现上升的趋势;GFP-RFP-LC3双荧光标记检测发现,BLM处理后自噬体数量明显增多;进一步用siLRRC15处理A549细胞后发现,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、ATG5、ATG7的表达增加,P62蛋白表达下调,自噬流的强度增加。以上研究结果说明LRRC15是IPF中上皮细胞损伤的指示剂,可能通过调节自噬参与纤维化过程中的调节,本研究为进一步阐明IPF的机制提供了必要的理论依据。
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关键词
lrrc15
特发性肺纤维化
博来霉素
A549细胞
自噬
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职称材料
猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪树突状细胞活化的影响
2
作者
王怡
李丽竹
+1 位作者
肖世玉
周必英
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期675-681,共7页
目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen, ESA)富含亮氨酸重复序列结构域(Leucine-rich repeat containing 15, LRRC15)蛋白对仔猪树突状细胞(Dendritic cell, DC)成熟活化的影响。方法 收集正常仔猪DC体外诱导、培...
目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen, ESA)富含亮氨酸重复序列结构域(Leucine-rich repeat containing 15, LRRC15)蛋白对仔猪树突状细胞(Dendritic cell, DC)成熟活化的影响。方法 收集正常仔猪DC体外诱导、培养,获得成熟与未成熟DC(immature DC, imDC)。在正常仔猪未成熟DC中,分别加入LRRC15蛋白、ESA刺激,将LRRC15组作为实验组;同时建立ESA对照组、LPS阳性对照组、LRRC15+LPS阳性对照组、LPS+ESA阳性对照组和培养基阴性对照组。流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达量;ELISA检测DC细胞培养上清TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12的分泌水平。结果 与未刺激DC组相比,LRRC15蛋白组诱导DC表面标志物CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达均增加。在LPS存在情况下,LRRC15蛋白也能诱导CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子上调;ELISA检测结果显示,与1640培养基组、LPS组和ESA组相比,LRRC15蛋白组均诱导IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α分泌降低,LRRC15蛋白组与1640培养基组相比IL-6(t=7.529,P<0.05),IL-10(t=2.780,P<0.05),IL-12(t=4.673,P<0.05),TNF-α(t=2.894,P<0.05);LRRC15蛋白组与LPS组相比IL-6(t=26.663,P<0.05),IL-10(t=12.038,P<0.05),IL-12(t=27.594,P<0.05),TNF-α(t=29.540,P<0.05);LRRC15蛋白组与ESA组相比IL-6(t=6.343,P<0.05),IL-10(t=2.579,P<0.05),IL-12(t=8.102,P<0.05),TNF-α(t=3.890,P<0.05)。ESA组与1640培养基组相比能诱导IL-12分泌(t=3.430,P<0.05),其他细胞分子分泌水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 LRRC15蛋白能诱导DC成熟活化,并抑制DC相关细胞因子的分泌,但能否通过其他途径诱导Th细胞分化还需进一步分析。
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关键词
猪囊尾蚴
排泄分泌抗原
lrrc15
树突状细胞
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职称材料
Lrrc15在斑马鱼胚胎血管发育中的作用
3
作者
刘伟
葛晓娟
+1 位作者
刘东
陈昌盛
《交通医学》
2022年第5期441-445,共5页
目的:探究Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育中的表达及其在血管发育中的作用。方法:采用全胚胎原位杂交技术检测Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育过程中的时空表达谱,显微注射吗啉修饰的反义寡核苷酸(morpholino oligos,MO)至内皮细胞被特异标记...
目的:探究Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育中的表达及其在血管发育中的作用。方法:采用全胚胎原位杂交技术检测Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育过程中的时空表达谱,显微注射吗啉修饰的反义寡核苷酸(morpholino oligos,MO)至内皮细胞被特异标记的转基因斑马鱼中下调Lrrc15的表达,利用共聚焦显微成像技术观察和分析胚胎血管发育的变化。结果:在受精后19、24、36和48 h均检测到Lrrc15基因在斑马鱼尾静脉丛的表达,受精后24 h表达最高。下调Lrrc15的表达导致斑马鱼尾静脉丛发育缺陷。结论:Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育中主要参与调控尾静脉丛形成,该基因的缺陷可导致尾静脉丛发育异常,提示Lrrc15基因在血管发育尤其是血管新生中的重要性,可为今后肿瘤治疗提供潜在的靶点。
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关键词
lrrc15
血管发育
原位杂交
斑马鱼
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职称材料
猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响
4
作者
李丽竹
何威
周必英
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2023年第8期927-933,共7页
目的观察猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响方法用LRRC15蛋白刺激健康仔猪外周血PBMC和脾脏CD4^(+)T细胞,分析T细胞免疫应答水平:①在PHA处理下,以RPMI 1640、ESA、ConA为对照组,用LRRC15蛋白刺激PBMC,流式检测C...
目的观察猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响方法用LRRC15蛋白刺激健康仔猪外周血PBMC和脾脏CD4^(+)T细胞,分析T细胞免疫应答水平:①在PHA处理下,以RPMI 1640、ESA、ConA为对照组,用LRRC15蛋白刺激PBMC,流式检测CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞数量比例变化,以及CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞表达水平;②在有和无LPS存在下,用LRRC15蛋白刺激PBMC,ELISA检测培养上清中IL-10含量;③分别于加入LRRC15蛋白后24、48、72 h检测初始CD4^(+)Th细胞分化情况。分离仔猪脾脏CD4^(+)T细胞并与未成熟髓源性DC共培养,采用ELISA方法检测加入LRRC15蛋白24、48、72 h培养上清中的IL-4、IL-5、IL-10、IL-17、IFN-γ水平。结果LRRC15蛋白刺激PBMC后,CD4^(+)T淋巴细胞数量比例显著增加(P<0.05),并诱导CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg表达(均P<0.05),但不能诱导IL-10的分泌。LRRC15蛋白分别作用于CD4^(+)T细胞24、48、72 h,PBMC细胞IL-4、IL-17分泌水平显著降低(均P<0.05);LRRC15蛋白诱导24与48 h相比,PBMC细胞分泌IL-5水平升高(P<0.05);诱导72 h的IL-5水平与48 h时比较差异无统计学意义(P<0.05);LRRC15蛋白诱导IFN-γ水平升高(P<0.05),诱导24、48、72 h时的分泌水平差异无统计学意义(P>0.05);LRRC15蛋白于CD4^(+)T细胞24、48、72 h均不能诱导IL-10分泌(均P>0.05)。结论LRRC15蛋白可诱导仔猪PBMC中CD4^(+)/CD8^(+)T细胞免疫失衡,诱导Treg细胞表达,通过非依赖性IL-10途径发挥免疫抑制作用,并诱导早期Th1型免疫应答和后期Th1/Th2混合型免疫应答。
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关键词
猪囊尾蚴
排泄分泌抗原
lrrc15
蛋白
T细胞免疫应答
原文传递
题名
LRRC15影响A549细胞自噬的作用研究
1
作者
王棋文
贾燕玲
李盼
余国营
机构
河南师范大学生命科学学院
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第5期398-407,共10页
基金
河南省高等学校重点科研项目计划(编号:22A180018)
河南省科技攻关项目(编号:232102310067)
国家肺纤维化生物学学科创新引智基地(“111”计划)项目资助。
文摘
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化和A549细胞损伤模型,检测了LRRC15的表达变化。转染siLRRC15后分别采用MTT、GFP-RFP-LC3双荧光标记系统和免疫印迹等方法检测了细胞活性和自噬的变化。结果表明:BLM处理后,小鼠肺组织和A549细胞中LRRC15表达显著上调;将设计和合成的siLRRC15转入A549细胞,LRRC15的表达极显著降低,可以部分恢复BLM引起的细胞损伤;BLM处理A549细胞后,LC3-Ⅱ和P62蛋白呈现上升的趋势;GFP-RFP-LC3双荧光标记检测发现,BLM处理后自噬体数量明显增多;进一步用siLRRC15处理A549细胞后发现,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、ATG5、ATG7的表达增加,P62蛋白表达下调,自噬流的强度增加。以上研究结果说明LRRC15是IPF中上皮细胞损伤的指示剂,可能通过调节自噬参与纤维化过程中的调节,本研究为进一步阐明IPF的机制提供了必要的理论依据。
关键词
lrrc15
特发性肺纤维化
博来霉素
A549细胞
自噬
Keywords
lrrc15
idiopathic pulmonary fibrosis
bleomycin
A549 cells
autophagy
分类号
R563 [医药卫生—呼吸系统]
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职称材料
题名
猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪树突状细胞活化的影响
2
作者
王怡
李丽竹
肖世玉
周必英
机构
遵义医科大学第一临床学院
遵义医科大学寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期675-681,共7页
基金
国家自然科学基金(No.81960378)
贵州省大学生创新创业训练计划项目(No.S202210661167)
遵义医科大学大学生创新创业训练计划项目。
文摘
目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen, ESA)富含亮氨酸重复序列结构域(Leucine-rich repeat containing 15, LRRC15)蛋白对仔猪树突状细胞(Dendritic cell, DC)成熟活化的影响。方法 收集正常仔猪DC体外诱导、培养,获得成熟与未成熟DC(immature DC, imDC)。在正常仔猪未成熟DC中,分别加入LRRC15蛋白、ESA刺激,将LRRC15组作为实验组;同时建立ESA对照组、LPS阳性对照组、LRRC15+LPS阳性对照组、LPS+ESA阳性对照组和培养基阴性对照组。流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达量;ELISA检测DC细胞培养上清TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12的分泌水平。结果 与未刺激DC组相比,LRRC15蛋白组诱导DC表面标志物CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达均增加。在LPS存在情况下,LRRC15蛋白也能诱导CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子上调;ELISA检测结果显示,与1640培养基组、LPS组和ESA组相比,LRRC15蛋白组均诱导IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α分泌降低,LRRC15蛋白组与1640培养基组相比IL-6(t=7.529,P<0.05),IL-10(t=2.780,P<0.05),IL-12(t=4.673,P<0.05),TNF-α(t=2.894,P<0.05);LRRC15蛋白组与LPS组相比IL-6(t=26.663,P<0.05),IL-10(t=12.038,P<0.05),IL-12(t=27.594,P<0.05),TNF-α(t=29.540,P<0.05);LRRC15蛋白组与ESA组相比IL-6(t=6.343,P<0.05),IL-10(t=2.579,P<0.05),IL-12(t=8.102,P<0.05),TNF-α(t=3.890,P<0.05)。ESA组与1640培养基组相比能诱导IL-12分泌(t=3.430,P<0.05),其他细胞分子分泌水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 LRRC15蛋白能诱导DC成熟活化,并抑制DC相关细胞因子的分泌,但能否通过其他途径诱导Th细胞分化还需进一步分析。
关键词
猪囊尾蚴
排泄分泌抗原
lrrc15
树突状细胞
Keywords
Cysticercus cellulosae
excretory secretory antigen
lrrc15
dendritic cell
分类号
R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
Lrrc15在斑马鱼胚胎血管发育中的作用
3
作者
刘伟
葛晓娟
刘东
陈昌盛
机构
南通大学生命科学学院
出处
《交通医学》
2022年第5期441-445,共5页
基金
国家自然科学基金(82000458)
江苏省高等学校自然科学研究面上项目(20KJB180008)
南通市科技计划项目(JC2020023)。
文摘
目的:探究Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育中的表达及其在血管发育中的作用。方法:采用全胚胎原位杂交技术检测Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育过程中的时空表达谱,显微注射吗啉修饰的反义寡核苷酸(morpholino oligos,MO)至内皮细胞被特异标记的转基因斑马鱼中下调Lrrc15的表达,利用共聚焦显微成像技术观察和分析胚胎血管发育的变化。结果:在受精后19、24、36和48 h均检测到Lrrc15基因在斑马鱼尾静脉丛的表达,受精后24 h表达最高。下调Lrrc15的表达导致斑马鱼尾静脉丛发育缺陷。结论:Lrrc15基因在斑马鱼胚胎发育中主要参与调控尾静脉丛形成,该基因的缺陷可导致尾静脉丛发育异常,提示Lrrc15基因在血管发育尤其是血管新生中的重要性,可为今后肿瘤治疗提供潜在的靶点。
关键词
lrrc15
血管发育
原位杂交
斑马鱼
Keywords
lrrc15
vascular development
in situ hybridization
zebrafish
分类号
Q344.13 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响
4
作者
李丽竹
何威
周必英
机构
遵义医科大学寄生虫学教研室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2023年第8期927-933,共7页
基金
国家自然科学基金项目(No.81960378)
贵州省科技厅基础研究计划(黔科合基础-ZK[2023]一般516)。
文摘
目的观察猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响方法用LRRC15蛋白刺激健康仔猪外周血PBMC和脾脏CD4^(+)T细胞,分析T细胞免疫应答水平:①在PHA处理下,以RPMI 1640、ESA、ConA为对照组,用LRRC15蛋白刺激PBMC,流式检测CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞数量比例变化,以及CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞表达水平;②在有和无LPS存在下,用LRRC15蛋白刺激PBMC,ELISA检测培养上清中IL-10含量;③分别于加入LRRC15蛋白后24、48、72 h检测初始CD4^(+)Th细胞分化情况。分离仔猪脾脏CD4^(+)T细胞并与未成熟髓源性DC共培养,采用ELISA方法检测加入LRRC15蛋白24、48、72 h培养上清中的IL-4、IL-5、IL-10、IL-17、IFN-γ水平。结果LRRC15蛋白刺激PBMC后,CD4^(+)T淋巴细胞数量比例显著增加(P<0.05),并诱导CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg表达(均P<0.05),但不能诱导IL-10的分泌。LRRC15蛋白分别作用于CD4^(+)T细胞24、48、72 h,PBMC细胞IL-4、IL-17分泌水平显著降低(均P<0.05);LRRC15蛋白诱导24与48 h相比,PBMC细胞分泌IL-5水平升高(P<0.05);诱导72 h的IL-5水平与48 h时比较差异无统计学意义(P<0.05);LRRC15蛋白诱导IFN-γ水平升高(P<0.05),诱导24、48、72 h时的分泌水平差异无统计学意义(P>0.05);LRRC15蛋白于CD4^(+)T细胞24、48、72 h均不能诱导IL-10分泌(均P>0.05)。结论LRRC15蛋白可诱导仔猪PBMC中CD4^(+)/CD8^(+)T细胞免疫失衡,诱导Treg细胞表达,通过非依赖性IL-10途径发挥免疫抑制作用,并诱导早期Th1型免疫应答和后期Th1/Th2混合型免疫应答。
关键词
猪囊尾蚴
排泄分泌抗原
lrrc15
蛋白
T细胞免疫应答
Keywords
Cysticercus cellulosae
excretory secretory antigen
lrrc15
protein
T cell immune response
分类号
R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
LRRC15影响A549细胞自噬的作用研究
王棋文
贾燕玲
李盼
余国营
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
2
猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪树突状细胞活化的影响
王怡
李丽竹
肖世玉
周必英
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
3
Lrrc15在斑马鱼胚胎血管发育中的作用
刘伟
葛晓娟
刘东
陈昌盛
《交通医学》
2022
0
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职称材料
4
猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪T细胞免疫应答的影响
李丽竹
何威
周必英
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2023
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