LRRC19识别肿瘤坏死因子α等炎症因子参与肾脏的免疫应答

研究一个已鉴定的富亮氨酸重复结构(LRR)蛋白家族成员LRRC19,确定其组织分布及在肾组织中的表达和定位,并对其功能进行初步研究.通过RT-PCR技术检测LRRC19 mRNA在小鼠各组织中的分布;利用特异性探针mRNA杂交技术对该基因在肾组织中的表达进行精确定位;免疫荧光实验分析该蛋白的亚细胞定位;通过分泌型碱性磷酸酶(Secreted Alkaline Phosphatase SEAP)检测技术,观察转染LRRC19后细胞中转录因子核因子(NuclearFactor NF)-κB和激活蛋白(Activator Protein AP)-1的活性改变,并探讨肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor TNF)α识别LRRC19对NF-κB信号通路的影响.RT-PCR和mRNA原位杂交实验结果显示,LRRC19 mRNA主要在肾组织中表达,并集中于肾小管上皮细胞,在脾和小肠组织中亦有表达;免疫荧光结果显示,FITC标记的LRRC19-V5融合蛋白位于细胞膜上,确定其为跨膜蛋白;LRRC19在细胞内异位表达可以不同程度的增强NF-κB和AP-1的活性,TNFα和IL-1β刺激后,NF-κB活性明显升高,TNFa刺激后表现尤为显著.作为存在于肾小管上皮细胞中的跨膜受体LRRC19,可通过识别病原体分子和致炎细胞因子,介导信号传导,启动相关细胞因子转录,调节肾组织的免疫防御作用.

跨膜蛋白受体在LRRC19调节机体先天免疫应答反应中的作用

目的确定已初步鉴定的富亮氨酸重复结构(LRR)蛋白家族成员LRRC19在脾细胞中的表达及定位,并对其功能进行初步研究。方法通过生物信息学技术预测LRRC19蛋白结构;mRNA原位杂交和RT-PCR检测LRRC19mRNA在小鼠脾组织以及不同脾细胞中的表达;以不同细菌刺激LRRC19转染的293T细胞,通过分泌性碱性磷酸酶(SEAP)检测技术观察细胞分泌的NF-κB活性的改变。结果LRRC19是一种跨膜蛋白,属于LRR蛋白家族成员,胞外区存在串联排列的4个LRR基序,有单一的跨膜结构域,胞内区有2个酪蛋白激酶2(CK2)磷酸化位点;mRNA原位杂交和RT-PCR结果显示,LRRC19mRNA在脾脏主要表达于B1淋巴细胞;体外实验证实,多种细菌均可使转染LRRC19的细胞NF-κB活性增强。结论LRRC19可能是一种跨膜受体,可识别不同的病原体保守分子,可能参与介导细胞信号转导,激活NF-κB信号途径,启动靶基因转录,调节先天免疫应答过程。