干扰LncRNA LRRC75A-AS1抑制肺癌细胞发生发展研究

目的:探讨LncRNA LRRC75A-AS1/miR-22-3p对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其可能作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测肺癌组织与癌旁组织中LRRC75A-AS1、miR-22-3p的表达水平;体外培养人肺癌细胞A549,si-NC、si-LRRC75A-AS1、si-LRRC75A-AS1与anti-miR-NC、si-LRRC75A-AS1与miR-22-3p inhibitor转染入A549细胞;采用qRT-PCR法检测A549细胞中LRRC75A-AS1、miR-22-3p的表达水平;采用MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告实验检测LRRC75A-AS1与miR-22-3p的靶向关系;Western blotting法检测Cleaved-caspase3蛋白表达量。结果:与癌旁组织比较,肺癌组织中LRRC75A-AS1的表达水平[(1.01±0.13)vs(4.59±0.34)]升高(P<0.01),miR-22-3p的表达水平[(1.00±0.12)vs(0.28±0.04)]降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-LRRC75A-AS1组细胞存活率[100%vs(54.45±2.21)%]降低(P<0.01),克隆形成数[(121.00±5.10)个vs(58.67±2.49)个]减少(P<0.01),凋亡率[(8.42±0.34)%vs(25.59±0.80)%]升高(P<0.01),Cleaved-caspase3蛋白水平[(0.20±0.01)vs(0.68±0.05)]升高(P<0.01),划痕愈合率[(66.71±1.43)%vs(32.56±0.95)%]降低(P<0.01);双荧光素酶报告实验证实LRRC75A-AS1可充当miR-22-3p的竞争性内源RNA;与si-LRRC75A-AS1+anti-miR-NC组比较,si-LRRC75A-AS1+miR-22-3p inhibitor组细胞存活率[(54.61±2.28)%vs(88.75±3.22)%]升高(P<0.01),克隆形成数[(57.67±2.49)个vs(106.67±3.68)个]增多(P<0.01),凋亡率[(25.63±0.99)%vs(13.11±0.55)%]降低(P<0.01),划痕愈合率[(32.52±0.98)%vs(55.30±1.18)%]升高(P<0.01),Cleaved-caspase3蛋白水平[(0.67±0.06)vs(0.30±0.03)]降低(P<0.01)。结论:干扰LRRC75A-AS1表达可能通过上调miR-22-3p从而减弱肺癌细胞增殖、迁移及克隆形成能力,并能够诱导细胞凋亡。

LRRC75A-AS1-miR-376c-3p-ZEB2轴对小细胞肺癌恶性生物学行为的影响机制

目的探讨敲除富亮氨酸重复序列75A蛋白(LRRC75A-AS1)-miR-376c-3p-E盒结合锌指蛋白(ZEB)2调控轴影响NCI-H446细胞增殖、侵袭及凋亡参与小细胞肺癌(SCLC)病理机制。方法实验分组sh-miR-NC组(转染sh-miR-NC)、sh-LRRC75A-AS1组(转染sh-LRRC75A-AS1)、sh-miR-376c-3p组(转染sh-miR-376c-3p)、sh-ZEB1组(转染sh-ZEB1)、sh-LRRC75A-AS1+sh-miR-376c-3p+sh-ZEB1组(共转染sh-LRRC75A-AS1、sh-miR-376c-3p和sh-ZEB1);通过生信数据库探索LR-RC75A-AS1与SCLC的关联;采用组织芯片和FISH技术观察LRRC75A-AS1、miR-376c-3p及ZEB2在SCLC组织中阳性染色细胞所占百分比;Western印迹及双荧光素酶报告基因检验miR-376c-3p与LRRC75A-AS1或ZEB2调控关系;CCK8法Transwell、和Tunel分别检测sh-LRRC75A-AS1-sh-miR-376c-3p-sh-ZEB2轴对增殖、侵袭和凋亡的影响。结果LRRC75A-AS1和ZEB2在SCLC组织表达均升高,而miR-376c-3p表达降低(P<0.05);sh-LRRC75A-AS1能抑制sh-miR-376c-3p上调sh-ZEB2(P<0.05);Sh-LRRC75A-AS1-sh-miR-376c-3p-sh-ZEB2抑制NCI-H446细胞增殖、侵袭,且促进细胞凋亡(P<0.05)。结论sh-LRRC75A-AS1竞争性结合sh-miR-376c-3p上调sh-ZEB2能抑制SCLC细胞增殖能力和侵袭能力,且促进癌细胞凋亡。