液质联用快速测定中药样品中的化学药物

目的:建立快速测定中药样品中非法添加的化学药物的液相色谱-质谱联用分析方法。方法:采用串联质谱联用技术的多反应监测模式,对分属于降糖、降压、壮阳、减肥等类别的36种中药,进行其中可能含有的格列本脲、西布曲明等10种化学药物的定性、定量分析。结果:在10min色谱未完全分离的情况下,在36个样品中准确地检出了4个降糖类样品(含格列本脲)、1个壮阳类样品(含西地那非)、2个减肥类样品(含西布曲明)。结论:多反应监测(MRM)模式确保了定性分析结果的专属性和定量分析的灵敏度,建立的方法可用于多种不同样品中化学药物的检验。

液相色谱-质谱/质谱联用法测定人血浆中加兰他敏

目的:建立测定人血浆中加兰他敏浓度的液相色谱-质谱/质谱联用法,用于其人体血药浓度测定。方法:血浆样品经液-液萃取后,以甲醇-水-甲酸(65:35:1)为流动相,Zorbax SB-C_8柱(150mm×4.6mm,5μm)分离,采用大气压化学电离源,以选择反应监测方式进行正离子检测。内标为双氢吗啡酮,用于定量分析的离子反应分别为 m/z 288→m/z 213(加兰他敏)和 m/z 286→m/z 185(内标)。结果:血浆中加兰他敏最低定量限为0.5ng·mL^(-1),其线性范围为0.5～100ng·mL^(-1)。其高、中、低3个浓度的平均提取回收率为80.9%,方法回收率为100.5%,日内及日间 RSD 均<8%。结论:方法选择性强,灵敏度高,快速准确,可作为加兰他敏人体内药动学研究的手段。

LC-MS/MS法检测樱桃和土壤中抗灰霉病农药残留

建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)测定樱桃和土壤中啶菌噁唑、乙霉威、噻菌灵、嘧菌酯残留的分析方法。样品以乙腈溶液提取,经混合盐盐析,离心后膜过滤,以0.2%甲酸溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,通过电喷雾离子源正离子检测模式和多重反应监测模式测定,采用外标法定量分析。结果表明4种农药的进样质量浓度在0.0001~0.0100 mg/L范围内,其峰面积与质量浓度呈现良好的线性关系,r^(2)>0.993,且4种农药的检测限均优于7.34×10^(-5) mg/kg。分别在0.1,1,10μg/kg 3个浓度水平下做加标回收率验证,回收率在82.44%~104.54%之间,相对标准偏差均小于4.92%。该方法简单、快速、准确,适合用于樱桃和土壤中啶菌噁唑等农药残留的定性和定量检测。

氟咯草酮液相色谱质谱分析方法构建

本文采用QuEChERS前处理法,结合LC-MS/MS,开发氟咯草酮在马铃薯田间生态系统中的样品前处理和残留快速分析方法。样品用乙腈提取,用PSA净化,含有0.02%(v/v)乙酸的甲醇/水和5 mmol乙酸铵的组合作为流动相,Shim-pack XR-ODSII色谱柱分离,三重四级杆电喷雾多反应检测模式进行检测。结果表明,在0.01-1.00mg/L范围内,氟咯草酮溶剂标准曲线和基质标准曲线有良好的线性关系,R^(2)均大于0.9990。在0.01mg/kg、0.10mg/kg、1.00mg/kg的添加水平下,氟咯草酮在马铃薯各基质中日内平均回收率分别为79.1%-91.6%、80.1%-89.5%和80.7%-90.0%,相对标准偏差分别在0.9%-4.3%、0.9%-4.1%和1.5%-3.6%之间;日间平均回收率为78.7%-91.6%,相对标准偏差在0.7%-4.3%之间。此方法简便、快捷、灵敏度高,适用于氟咯草酮在马铃薯田间各种基质中的残留检测。

国产与进口托烷司琼胶囊的人体生物等效性

目的:评价国产和进口托烷司琼胶囊的生物等效性。方法:采用双周期两制剂交叉试验设计,用LC-MS/MS法对国产和进口托烷司琼胶囊在20名中国健康男性受试者中的血药浓度进行测定。药动学参数用ANOVA处理。结果:国产与进口托烷司琼胶囊的AUC0-→t分别为:(543.61±415.55),(547.04±455.59)μg·h·L-1;AUC0→∞分别为(573.30±439.11),(591.77±513.15)μg·h·L-1;cmax为分别(39.13±14.45),(37.44±14.30)μg·L-1;tmax分别为(1.61±0.71),(1.85±0.79)h;T1／2分别为(9.69±4.81),(9.77±5.51)h。国产托烷司琼胶囊的相对生物利用度为(106.47±24.07)％(n=20)。2组参数cmax,AUC0→t经对数转换后,行方差分析和双单侧t检验,均未见统计学意义。结论:托烷司琼国产的制剂与进口制剂具有生物等效性。

液相色谱-质谱联用法研究复方对乙酰氨基酚Ⅱ胶囊人体生物等效性

目的建立人体血浆中乙酰氨基酚、异丙安替比林和无水咖啡因的高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定方法,研究复方对乙酰氨基酚Ⅱ胶囊在健康志愿者体内的药代动力学行为,评价其生物利用度及生物等效性。方法按照随机双交叉试验设计,单剂量口服复方对乙酰氨基酚Ⅱ胶囊与复方对乙酰氨基酚片后,采用LC-MS/MS法测定血浆中药物浓度,建立血浆-药物浓度曲线,采用BAPP2.2药代动力学计算软件模拟房室模型并计算各有效成分的药代动力学参数,进行生物等效性评价。结果 3组分质量浓度线性范围均为0.04～10.0μg/mL(r>0.999),方法回收率(85%～115%)、精密度(低浓度RSD<20%,中、高浓度RSD<15%)和准确度(DIF<15%)均良好。结论样品分析方法快速、灵敏、专属性好,可用于复方对乙酰氨基酚Ⅱ胶囊生物等效性研究。统计学分析表明,受试制剂和参比制剂生物等效。

抗肿瘤药LS-177的药物动力学研究

目的建立一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),测定新药LS-177比格犬血浆质量浓度,并将此方法用于测定LS-177的口服生物利用度,为LS-177口服制剂的研究提供科学数据。方法利用双周期交叉实验方案,以比格犬为试验对象,选用液-液萃取的血浆处理方法,利用UPLC-MS/MS法对比格犬血样进行测定。结果 LS-177的血浆质量浓度分别在0.1~400和2~2 000μg·L-1内呈线性,方法精密度(RSD)和准确度(RE)分别小于10.38%和14.71%,LS-177的口服生物利用度为10.05%。结论建立的UPLC-MS/MS法可用于LS-177的药物动力学研究,LS-177口服生物利用度低。

宏蛋白质组学方法对清香大曲蛋白分析

目的:分离鉴定清香大曲的蛋白质组分,为大曲功能菌的确认及深入理解大曲功能提供科学的理论依据。方法:挑选具有典型感官特征的清香大曲,用乙酸-乙酸钠提取粗酶液,粗酶液经SDS-PAGE后,将电泳条带分段切胶回收处理后用LC-MS/MS进行蛋白鉴定。结果:共鉴定蛋白122种。从蛋白功能分,这些蛋白质有酶类69种(56.6%),其中EMP途径的酶有17种,糖类水解酶10种,蛋白酶13种,氧化还原酶类5种,乙醛脱氢酶5种,其他代谢途径酶19种。热击蛋白15种(占12.3%),蛋白表达及核酸复制相关蛋白16种(占13.1%),其他的蛋白22种(占18.0%)。结论:糖化酶是大曲的主要生化指标,通过对清香大曲蛋白质成分分析发现,产生糖化酶的微生物只有米根霉,由此确认米根霉为清香白酒的功能菌。实验只检测到酿酒酵母合成的乙醇-O-酰基转移酶,确认其为清香白酒酯化功能菌。大曲还含有大量的EMP途径酶类,说明大曲还有助于葡萄糖到丙酮酸的代谢。

Online SPE-LC-MS/MS法快速同时分析人血浆中5种CYP450酶探针药及6种代谢物

目的:建立人血浆中主要CYP450酶探针药及其特异代谢物的快速、准确定量分析方法,以开展药物-药物相互作用(DDI)的临床评价。方法:针对5种主要CYP450亚型,选择咖啡因(CYP1A2)、氯沙坦(CYP2C19)、奥美拉唑(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6,CYP3A4)和咪哒唑仑(CYP3A4)组成鸡尾酒探针药组合。建立一种online SPE-LC-MS/MS方法对给予探针药后的人血浆样本进行分析。血浆样品通过葡萄糖醛酸酶水解进行前处理,采用Spark HySphere-C18 HD(10 mm×2 mm,7μm)为固相萃取柱,Shiseido MGⅢ(2.0 mm×100 mm,5μm)为分析柱,柱温40℃。以含0.01%甲酸的甲醇-乙腈(1∶1)-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.35 mL·min^(-1)。在质谱ESI源、正离子扫描方式下检测5种探针药及相应的6种代谢产物的母离子-子离子对。结果:所建立的分析方法可在5 min完成11种待测成分的分析。对方法学的验证表明所建立的方法对血浆样品分析具有专属性,定量范围内线性良好,无基质效应影响。中和高浓度下待测成分的批内和批间样品的RSD为2.1%~14.2%,LLOQ浓度下为2.1%~15.4%,准确度在86.4%~107.2%范围内。样品在室温、长期冻存、反复冻融及样品架放置条件下稳定性良好。采用该方法对服用鸡尾酒探针药后的人血浆样本进行了分析,检测出的5种探针药及6种代谢物浓度均在定量区间内,其中右美沙芬代谢物3-甲氧基吗啡喃浓度最低,均低于2 ng·mL^(-1)。结论:所建立的Online SPE-LCMS/MS分析方法快速、灵敏、准确,可应用于采用鸡尾酒探针的临床DDI研究和代谢酶活性评估。

液相色谱-串联质谱法测定黄瓜中多菌灵含量的测量不确定度评定

目的评定用液相色谱-串联质谱法测定黄瓜中多菌灵含量的测量不确定度,找出影响的主要因素。方法依据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的方法和JJF 1135-2005《化学分析不确定度评定》中最小二乘法拟合标准曲线的实例建立测量模型,分析不确定度来源,评定各分量的不确定度,再计算合成标准不确定度、扩展不确定度。结果黄瓜中多菌灵含量报告为(0.001 23±0.000 22)mg/kg。结论拟合标准曲线方程计算试液含量环节和测量重复性是测量不确定度的主要来源,若改善这两个环节,可以提高检测的准确度和可靠性。

新型抗肿瘤药物LS-177在大鼠体内的排泄研究

目的研究LS-177在大鼠体内的排泄情况。方法建立快速、灵敏的UPLC-MS/MS分析方法测定单次灌胃给予50.0mg·kg^(-1)的LS-177混悬液后,LS-177原型药物自雄雌大鼠尿液、胆汁和粪便中的排泄量。结果大鼠灌胃给药后,尿液96 h内、胆汁24 h内的累积排泄百分率具有明显的雌雄差异(P<0.05),粪便96 h内的雌雄差异不明显(P>0.05)。结论原型药物在尿液、胆汁和粪便中总的回收量约占给药剂量的50%,其中主要是由粪便排出体外,推测LS-177口服吸收差是其生物利用度低的主要原因。

抗肿瘤新化合物LS-177在不同种属中血浆蛋白结合率的测定

目的:建立血浆中LS-177的分析方法,测定LS-177与大鼠、比格犬和人的血浆蛋白结合率。方法:采用平衡透析法模拟LS-177在体内与血浆蛋白的结合过程,采用UPLC-MS/MS方法对透析外液和内液中LS-177的含量进行测定,计算LS-177与大鼠、比格犬和人的血浆蛋白结合率。结果:LS-177低、中、高(25,50和100 ng·m L-1) 3个浓度的大鼠血浆蛋白结合率分别是(81. 2±5. 2)%,(77. 2±6. 2)%,(79. 8±5. 2)%;比格犬血浆蛋白结合率分别是(84. 2±2. 7)%,(82. 5±3. 1)%,(84. 1±3. 9)%;人血浆蛋白结合率分别是(84. 0±3. 4)%,(81. 7±4. 0)%,(80. 5±3. 4)%。结论:建立的LS-177蛋白结合率测定方法简便、稳定、可靠,LS-177血浆蛋白结合率不具有明显的浓度依赖性和种属差异。