Ascl2 RNA干扰对结肠癌LS174T细胞EMT相关microRNA表达的影响

目的探讨转录因子Ascl2对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)相关的微小RNA(microRNA)的影响。方法对结肠癌LS174T细胞进行Ascl2的RNA干扰质粒转染,对照质粒shRNA-control/EGFP和干扰质粒shRNA-Ascl2/EGFP转染LS174T细胞,经G418筛选建立了稳定转染的细胞系,并分别命名为shRNA-Ctr/LS174T和shRNA-Ascl2/LS174T细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR)和蛋白印迹(Western-blot)实验确定干扰效果后,采用Transwell小室侵袭实验观察Ascl2干扰对细胞侵袭能力的影响,再进一步行microRNA芯片筛选与EMT相关的microRNA并行real-time PCR验证。结果干扰后细胞中Ascl2的mRNA和蛋白质表达均明显减少(P<0.01)。Ascl2干扰后LS174T细胞的侵袭能力明显下降(P<0.01)。microRNA芯片筛选出与EMT相关的microRNA-200家族(包括microRNA-200b、microRNA-200a、microRNA-429、microRNA-200c、microRNA-141)在Ascl2干扰后均出现2倍以上的上调(P<0.01)。结论 Ascl2可能通过转录调节microR-200家族,进而调控EMT从而影响结肠癌的浸润转移。

Doxycycline抑制大肠癌LS174T细胞侵袭的体外实验研究

目的:观察多西环素(Doxycycline)在体外对LS174T侵袭能力的抑制作用,并尝试探讨该抑制作用的分子机制。方法:1)MTT法观察Doxycycline对LS174T细胞粘附力的影响;Transwell小室法检测不同浓度Doxycycline对细胞侵袭和运动能力的抑制作用;2)RT-PCR法检测不同浓度Doxycycline作用48h后,MMP2的mRNA表达情况,同时明胶酶谱法检测MMP2分泌。结果:1)Doxycycline能够以剂量依赖方式抑制大肠癌LS174T细胞的体外运动和侵袭能力,但不影响其粘附能力;2)Doxycycline能够抑制LS174T细胞MMP2的mRNA表达。结论:Doxycycline在体外能够有效地抑制大肠癌LS174T细胞的侵袭、转移,其中MMP2是抑制大肠癌细胞LS174T的一个有效靶点。

醋酸甲羟孕酮对人结肠癌LS174T细胞体内生长抑制的作用

目的检测醋酸甲羟孕酮(MPA)对人结肠癌细胞LS174T移植瘤生长的抑制作用并初步分析其机制。方法建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为3组,每组10只,对照组:静脉注射或以同等容量的生理盐水灌胃;处理组分为MPA治疗组和MPA+5-Fu治疗组,MPA治疗组:每只每次灌胃MPA30mg/kg;MPA+5-Fu治疗组:每只每次静脉注射5-Fu30mg/kg;每只每次MPA30mg/kg灌胃,MPA灌胃每周5次,5-Fu静脉注射每周3次,共用3周。5周后处死动物,切除瘤灶、称瘤重、测瘤体积、计算抑瘤率;标本用流式细胞仪分析移植瘤细胞周期、凋亡率和细胞表面Fas/FasL表达;免疫组织化学SABC法检测移植瘤组织Fas/Fas-L表达。结果对照组、MPA治疗组、MPA+5-Fu合用组肿瘤体积分别为(1.65±0.68)cm3、(0.78±0.31)cm3、(0.23±0.12)cm3;抑瘤率分别为0、52.7%、86.1%。流式细胞仪分析细胞周期,移植瘤LS174T细胞经MPA处理后阻止G1期细胞向S期的进程,S期和G2/M期细胞相对减少,MPA+5-Fu合用组作用更明显。对照组、MPA治疗组、MPA+5-Fu合用组细胞凋亡率分别为3.6%、13.7%、28.6%,MPA作用后移植瘤LS174T细胞表面Fas和FasL表达显著增强。结论MPA对人结肠癌移植瘤LS174T细胞生长具有显著的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能与MPA使LS174T细胞停滞于G1期及细胞表面Fas和FasL表达上调有关。

藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响

目的:观察藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响。方法:用不同浓度藤龙补中汤处理人结肠癌细胞LS174T和人结肠上皮细胞CRL-1790。用细胞计数检测试剂盒检测细胞增殖,平板法检测细胞克隆形成数目并计算抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,比色法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9的活性。结果:与对照组比较,藤龙补中汤对人结肠上皮细胞CRL-1790增殖无明显影响;1mg/mL藤龙补中汤作用72h,2mg/mL藤龙补中汤作用48、72h,5～20mg/mL藤龙补中汤作用24～72h均可显著抑制LS174T细胞增殖;1～20mg/mL藤龙补中汤可显著抑制LS174T细胞克隆形成;5～20mg/mL藤龙补中汤可诱导LS174T细胞凋亡,使LS174T细胞阻滞在G0/G1期,增强LS174T细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9活性。结论:藤龙补中汤可抑制结肠癌LS174T细胞增殖,阻滞LS174T细胞于G0/G1期,促进LS174T细胞凋亡;藤龙补中汤促LS174T细胞凋亡作用可能与增加caspase-3、caspase-8、caspase-9活性相关。

大麻提取物对人结肠癌细胞LS174T体内外抑制及诱导凋亡作用

目的:研究大麻提取物在体内外对人结肠癌细胞LS174T的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:体外培养结肠癌细胞,加以不同浓度(500,250,125,62.5,31.25μg/mL)的大麻提取物培养72 h,用MTT法检测大麻提取物对结肠癌细胞抗增殖的作用;用DNA末端原位标记染(TUNEL)法检测大麻提取物对结肠癌细胞的诱导凋亡作用;建立结肠癌小鼠模型,将实验动物随机分为五组:空白对照组、阳性药物组、低剂量组(25 mg/kg)、中剂量组(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg),每组5只小鼠,2周后处死动物测定肿瘤的重量和体积。结果:不同浓度的大麻提取物处理细胞72 h后,结肠癌细胞的抑制率分别为(93.12±2.66)%(、74.56±4.62)%(、62.37±3.77)%(、36.84±6.24)%(、19.16±4.24)%,各组间抑制率相比,差异有统计学意义(P<0.05);用TUNEL法可检测到典型的结肠癌细胞凋亡形态;在结肠癌小鼠模型上给药组肿瘤生长被抑制,其肿瘤体积、重量均较对照组减小,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:大麻提取物在体内外具有抑制结肠癌细胞LS174T增殖及诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。

不同母乳低聚糖对肠道LS174T杯状细胞黏蛋白分泌相关基因表达的影响

目的分析不同母乳低聚糖对肠道LS174T杯状细胞黏蛋白分泌相关基因表达的影响。方法以人肠道LS174T细胞为研究对象,将2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)、3’-唾液酸乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL)和低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)3种低聚糖和乳糖对细胞的作用时间分成24 h组和48 h组,分别在细胞稳态和细胞炎症状态下,以黏蛋白2(mucin 2,MUC2)及其相关基因[三叶因子-3(trefoil factor 3,TFF3)、抵抗素样蛋白B(recombinant resistinlike beta,RETNLB)、碳水化合物磺基转移酶5(carbohydrate sulfotransferase 5,CHST5)、半乳糖-3-O-磺基转移酶2(galactose-3-O-sulfotransferase 2,GAL3ST2)]的表达水平为评价指标,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)试验确定影响肠道LS174T杯状细胞黏蛋白分泌相关基因表达的母乳低聚糖。结果在正常状态下,GOS作用后,MUC2及黏蛋白分泌相关基因表达量无显著变化(P>0.05);作用48 h时,3’-SL可显著提高RETNLB基因表达量(P<0.05);在炎症状态下,2’-FL和GOS可极显著促进MUC2、CHST5和TFF3的表达(P<0.01),表明在炎症状态下,2’-FL和GOS可促进杯状细胞分泌黏蛋白。结论在细胞炎症状态下,2’-FL和GOS可提高肠道LS174T杯状细胞黏蛋白分泌相关基因的表达量。

Inhibitory effects of docetaxel on expression of VEGF, bFGF and MMPs of LS174T cell

AIM: To study the effects of non-cytotoxJc concentrations of docetaxel on some important angiogenic factors of LS174T Cells.METHODS: The non-cytotoxic concentration of docetaxel and the activity of gelatinase were determined with MTT and gelatin zymography respectively, the expression of VEGF (vascular endothelial growth factor), bFGF (basic fibroblast growth factor), MMP (matrix metalloproteinase) 2 and MMP 9 was investigated with RT-PCR and Western blot.RESULTS: The maximum non-cytotoxic concentration of docetaxel on LS174T Cells was 1.0 ng/ml. Compared with the solvent control group, 0.1, 0.5, 1.0 ng/ml of docetaxel could downregulate the expression of VEGF, bFGF, MMP 2and MMP 9 and suppress the activity of gelatinase.CONCLUSION: Our study suggests that the non-cytotoxic concentrations of docetaxel have strong antiangiogenic activity on LS174T Cells, which suggests docetaxel may be a promising antiangiogenic agent.

人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型及其血中CK20 mRNA表达的研究

目的 :建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,应用于结肠癌肝转移的防治研究。方法 :BAL B/ C裸鼠 12只 ,腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌低分化腺癌细胞悬液( L S174 t) 0 .1m l,含细胞数 1× 10 6 个 ,切除脾脏 ,喂养 2 0天后 ,建立人结肠癌裸鼠肝转移模型。随后 ,心脏采血检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,处死裸鼠观察腹腔内肿瘤生长和肝转移癌灶数目及大小 ,作病理组织学检查。采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)法 ,检测裸鼠血中 CK2 0 m RNA表达。结果 :12只裸鼠均建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,无1只死亡。初期活跃如常体形无改变 ,10天后裸鼠出现消瘦、精神差 ,摄食量减少。裸鼠尸解肝脏表面均有灰白色转移癌结节形成 ,其它脏器未发现转移癌灶。病理组织学示肝转移癌灶具有人结肠癌低分化腺癌特征。血中 CK2 0 m RNA均阳性表达。结论 :经脾脏注入 L S174 t细胞悬液可建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,裸鼠血中 CK2 0 m RNA阳性表达 ,证实血中存在着结肠癌细胞 ,是形成肝转移灶的条件。

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的 探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系,对人脐血管内皮细胞ECV30 4的选择性杀伤作用。方法 将质粒pAdEasy -KDR- CDglyTK在2 93细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV30 4细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5 - 氟胞嘧啶(5 -fuorocytosine ,5 -FC)和/或丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV) ,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果 所得病毒对两种细胞细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加;表达KDR的ECV30 4细胞对前药的具有较高的敏感性,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0 . 0 1) ;融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0 . 0 1) ;且观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测治疗后ECV30 4细胞G1期比率增多及S期细胞减少(P均<0 . 0 1) ,同时,电镜下可见ECV30 4有凋亡和坏死改变。结论 KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞。

槲皮素对结肠癌细胞侵袭和畸胎瘤衍生生长因子-1表达的影响

槲皮素（quercetin）是一种天然的黄酮类化合物，广泛分布于蔬菜、水果及常见中草药中。已有研究发现，槲皮素可抑制多种肿瘤细胞的增殖，是颇具应用前景的抗癌药物之一，但机制尚不清楚。本研究采用槲皮素处理结肠癌LS174T细胞。观察其对癌细胞锚着不依赖性增殖、侵袭和畸胎瘤衍生生长因子1（teratocarcinoma—derived growth factor-1，TDGF-1）基因表达的影响，以探讨其抗癌机制。

促肾上腺皮质激素释放因子对肠道杯状细胞分泌产物的影响

目的探讨促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)对肠道杯状细胞分泌产物的影响。方法首先用不同浓度的CRF作用于LS174T细胞以确定最佳作用浓度;用10^(-10)mol/L的CRF作用于LS174T细胞,利用Real-time q PCR、Western blotting、免疫荧光染色和ELISA技术对肠道杯状细胞分泌产物的表达量进行检测。结果 Realtime q PCR结果显示,与PBS对照组相比,CRF作用6 h后,黏蛋白2(M UC2),岩藻糖基转移酶-2(FUT2)和三叶因子-3(TFF3)的mRNA表达量均下降(P<0.05)。细胞免疫荧光和ELISA的结果显示,CRF作用6 h后,MUC2的蛋白表达量降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,CRF作用24 h后,FUT2和TFF3的蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论 CRF可以通过改变LS174T细胞分泌产物的表达,从而破坏肠黏膜屏障功能。