LSM7抑制剂的药物虚拟筛选及验证其促乳腺癌细胞凋亡的作用

目的对LSM7抑制剂进行药物虚拟筛选并验证LSM7抑制剂是否促进乳腺癌细胞凋亡。方法下载并分析公共数据库中的乳腺癌的基因表达数据,通过生物信息学分析研究LSM7在乳腺癌中的表达情况,并以LSM7为靶点进行药物虚拟筛选,选出Valrubicin作为LSM7抑制剂,使用MTT方法确定Valrubicin浓度梯度,用不同浓度的Valrubicin处理细胞,采用流式细胞分析检测Valrubicin对乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡情况,使用蛋白印迹法验证Valrubicin对LSM7以及凋亡相关蛋白的P53、Bcl-2和Bax的表达水平的影响。结果LSM7在乳腺癌中显著过表达;虚拟药物筛选结果确定Valrubicin为LSM7抑制剂的潜在最佳药物,MTT结果显示Valrubicin对MCF-7细胞增殖抑制存在浓度及时间依赖性。流式细胞分析显示Valrubicin处理后MCF-7细胞的早期和晚期凋亡率均明显升高。蛋白印迹分析结果验证了Valrubicin通过下调LSM7、Bcl2的表达,上调P53、Bax的表达实现促乳腺癌细胞凋亡的作用。结论LSM7在乳腺癌中高表达,Valrubicin作为LSM7抑制剂能促进乳腺癌细胞凋亡。

宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

目的探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况。结果与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2%;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6%;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位。结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制。

LSm1-7复合体在病毒复制中作用的研究进展

LSm蛋白家族属于一类RNA结合蛋白,广泛存在于真核细胞生物、细菌、古菌和植物中。LSm是Sm样蛋白的缩写。1966年Sm抗原首先在系统性红斑狼疮患者中被发现,并因患者StephanieSmith而得名[1]。随后Sm蛋白复合体被发现,由SmB′/B（B和B′是异构体）、SmD1、SmD2、SmD3、SmE、SmF、SmG 7个蛋白组成,与4个snRNAs（U1、U2、U4和U5）结合形成snRNPs。