LTB-2xSTN12S融合蛋白联合cGAMP和dmLT双佐剂对小鼠的免疫保护效果

目的在原核系统中表达肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)不耐热肠毒素B亚基(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)和耐热肠毒素(heat stable enterotoxin)突变体(STN12S)的融合蛋白,联合环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)和dmLT(double mutant heat-labile enterotoxin)佐剂初步评价其保护效果并进行免疫反应分析。方法构建表达质粒pET28α-LTB-2xSTN12S,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱纯化,将纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白联合dmLT和cGAMP佐剂(为抗原+dmLT+cGAMP组;同时设空白对照组、感染对照组、抗原组),均经皮下途径免疫BALB/c小鼠,免疫2针,间隔2周,末次免疫2周后滴鼻攻击ETEC-HN临床分离株(LT+/ST+),2周后称重,取眼眶静脉血及脾淋巴细胞进行体液和细胞免疫分析。结果重组质粒pET28-LTB-2xSTN12S基因测序正确,纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白相对分子质量约20000,纯度为93%,与霍乱毒素(cholera toxin,CT)和ST多抗均能发生特异反应。抗原+dmLT+cGAMP组小鼠诱导的免疫保护均高于感染对照组和抗原组(P均<0.05),诱导的针对LTB-2xSTN12S血清IgG抗体水平及针对LTB和ST抗原特异性IgG抗体水平均高于其他组(P均<0.05);脾淋巴细胞培养上清中抗LTB-2xSTN12SIgG抗体水平及针对LTB-2xSTN12SLTB抗原特异性IgG抗体水平均显著高于其他组(P均<0.01),诱导的脾淋巴细胞抗原特异性IL-4、IL-6、IL-17和IFNγ细胞因子分泌细胞数量均高于其他组(P均<0.05)。结论经原核表达系统成功表达并纯化了LTB-2xSTN12S融合蛋白,LTB和ST抗原性良好,联合cGAMP和dmLT佐剂对同时表达LT和ST临床分离株的攻击具有保护效果,并检测到显著的特异性体液和细胞免疫反应。