余甘子提取物对非酒精性脂肪性肝病大鼠外周血Treg细胞及肝组织LXRα/FAS通路表达的影响

目的探讨余甘子提取物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠外周血Treg细胞及肝组织LXRα/FAS通路表达的影响。方法将48只SD大鼠随机分对照组、模型组、多烯磷脂酰胆碱及小剂量、中剂量和大剂量余甘子处理组,在造模成功后,给予对照组生理盐水灌胃,给予模型组多烯磷脂酰胆碱处理,另给予不同剂量的余甘子灌胃处理,连续给药6周。采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-17和IL-10水平,使用流式细胞术检测血CD4^+IL-17^+和CD4^+CD25^+Treg细胞百分比,采用WB法检测肝组织LXRα和FAS蛋白表达。结果与模型组比,大剂量余甘子提取物处理组肝组织病理学损伤显著改善,血清ALT、AST、TC、TG水平显著降低(P<0.05);血清TNF-α和IL-17水平显著降低,分别为(34.7±0.9)pg/ml和(3.2±0.2)pg/mL,而IL-10水平显著升高,为(4.8±0.2)pg/mL(P<0.05);大剂量余甘子处理组CD4^+IL-17^+百分比为(1.1±0.6)%,显著低于模型组[(1.9±0.4)%,P<0.05],CD4^+CD25^+Treg百分比为(1.5±0.6)%,显著高于模型组[(0.9±0.2)%,P<0.05];小、中、大剂量余甘子提取物处理组肝组织LXRα和FAS蛋白表达显著减弱[分别为(1.8±0.1)和(2.0±0.2),P<0.05]。结论余甘子提取物可改善NAFLD大鼠肝组织病理学损伤,可能与其对炎性细胞因子、Th17/Treg细胞和LXRα/FAS通路因子的表达产生了某种影响有关。

基于LXRα/FAS通路探讨茵杞调脂饮治疗大鼠非酒精性脂肪肝病的作用机制

目的:研究茵杞调脂饮改善非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠脂质代谢的作用及机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,茵杞调脂饮低、中、高剂量组及辛伐他汀对照组,各8只。正常组喂养普通饲料,其余组喂养高脂饲料,12周后模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,各药物组灌胃相应剂量药物,8周后检测血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG、LP、TNF-α含量,HE、油红O染色检测肝组织脂肪变性程度,RT-PCR检测肝组织LXRα、FAS mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG、LP、TNF-α,LXRα、FAS mRNA显著升高(P<0.01),肝组织出现显著的细胞脂肪变性及空泡样变;与模型组比较,各药物组大鼠血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG、LP、TNF-α,LXRα、FAS mRNA显著降低(P<0.05,P<0.01),肝细胞脂肪变性及空泡样变得到明显改善;与辛伐他汀组比较,茵杞调脂饮高剂量组血清ALT、AST,肝组织LP、TNF-α及LXRα、FAS mRNA显著降低(P<0.05)。结论:茵杞调脂饮可以调节NAFLD大鼠的脂代谢,减少脂质沉积,减轻氧化应激,其机制可能与抑制LXRα、FAS的表达有关。

化痰祛湿活血方调控LXRα/SREBP-1c/FAS通路对慢乙肝并脂肪肝细胞模型恩替卡韦抗病毒的影响

目的 观察化痰祛湿活血方对油酸诱导的脂肪变HepG2.2.15细胞LXRα/SREBP-1c/FAS信号通路的影响,及对恩替卡韦抗病毒作用的影响。方法 将脂肪变HepG2.2.15细胞分为6组:模型组、西药组、中药组、联合组、激动剂组、激动剂+联合组。模型组加入空白组大鼠血清,西药组、中药组、联合组分别加入各组含药血清,激动剂组加入LXRs激动剂,激动剂组+联合组加入LXRs激动剂及联合组大鼠含药血清。观察各组细胞脂肪变性程度,肝功能变化,HBV-DNA含量及LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白的表达情况。计量资料采用单因素方差分析,方差齐者两两比较采用LSD法,方差不齐者两两比较采用Dunnett’sT3法。结果 与未加油酸干预的HepG2.2.15细胞相比,其余各组均呈现不同程度的脂肪变,其中激动剂组细胞脂肪变最重;联合组细胞上清液及细胞内ALT、AST较模型组下降显著(P<0.05);联合组细胞上清液HBVDNA较西药组具有下降趋势;激动剂组细胞LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白表达均较模型组升高(P<0.05),中药组、联合组细胞LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白表达较模型组具有下降趋势。结论 化痰祛湿活血方可能通过下调LXRα/SREBP-1c/FAS信号通路,改善脂质代谢,进而提高恩替卡韦抗病毒作用。

基于Fas/FasL介导的凋亡信号通路研究通管方对输卵管炎性不孕模型大鼠的作用机制

目的:探讨通管方对输卵管炎性不孕(SI)模型大鼠输卵管组织中Fas/FasL通路的影响。方法:采用经阴道内接种混合菌液的方法,建立输卵管炎性不孕大鼠模型。造模后,77只SD雌性大鼠随机分成空白组、假手术组、模型组、妇可靖胶囊组(0.29 g·kg^(-1)·d^(-1))、通管方低剂量组(7.515 g·kg^(-1)·d^(-1))、通管方中剂量组(15.03 g·kg^(-1)·d^(-1))、通管方高剂量组(30.06 g·kg^(-1)·d^(-1)),各组大鼠分别灌胃给药28 d后处死并取材。采用蛋白免疫印迹法(WB)检测SI模型大鼠输卵管组织中Fas、FasL蛋白及Caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测SI模型大鼠血清IL-4、IL-10、Caspase-1的表达变化。结果:与空白组比较,模型组血清中IL-4和IL-10的水平均明显降低,血清和输卵管组织中的Caspase-1水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,通管方各剂量组和妇可靖胶囊组降低了血清和输卵管组织中的Caspase-1的表达(P<0.01),上调了血清中IL-4和IL-10水平、输卵管组织中Fas和FasL蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。其中,通管方高剂量组的作用均明显优于其他剂量组和妇可靖胶囊组(P<0.05,P<0.01)。结论:通管方可能通过调控Fas/FasL凋亡信号通路而消除SI模型大鼠输卵管炎症。

桥本甲状腺炎UGRP1与Fas介导的凋亡通路的相关性研究

目的探讨桥本甲状腺炎(HT)中子宫球蛋白相关蛋白1(UGRP1)与Fas介导的凋亡通路的相关性。方法免疫组化(IHC)法检测正常人、HT患者甲状腺细胞UGRP1的表达。在体外用质粒转染大鼠甲状腺细胞(FRTL-5细胞),分别为空载体质粒组、UGRP1质粒组、Fas质粒组,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)方法检测各组细胞Fas、UGRP1基因表达水平的变化。结果HT患者甲状腺细胞UGRP1表达呈阳性,正常人甲状腺细胞UGRP1表达呈阴性。转染UGRP1质粒组的Fas基因表达水平较空载体质粒组无明显变化(1.0850±0.1249 vs1.0210±0.1139),转染Fas质粒组的UGRP1基因表达水平较空载体质粒组显著升高(P<0.0001,5.8070±0.3232 vs0.7527±0.0760)。结论桥本甲状腺炎UGRP1高表达可能与Fas介导的凋亡通路相关。

水飞蓟宾抑制Fas/FasL信号通路对肺结核大鼠炎症损伤及巨噬细胞凋亡的影响

目的:探究水飞蓟宾对肺结核(TB)大鼠肺部炎症损伤、巨噬细胞凋亡的影响,及对死亡受体Fas及其配体FasL的调控作用。方法:采用尾静脉注射结核分枝杆菌(Mtb)法制备TB大鼠模型,并随机分为模型组、水飞蓟宾组、Fas过表达重组蛋白(pcDNA-Fas)组、pcDNA-Fas阴性对照(pcDNA-NC)组、水飞蓟宾+pcDNA-Fas组,每组15只,另取15只大鼠为正常对照组。抗酸染色检测肺组织感染情况;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6表达;Annexin VFITC/PI双染结合流式细胞术检测肺泡巨噬细胞凋亡率;Western blot检测Fas、FasL、caspase8、caspase3、巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠肺组织炎症因子表达、肺泡巨噬细胞凋亡率升高,肺组织Mtb感染及干酪样坏死严重,Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活化(P<0.05)。与模型组相比,水飞蓟宾组大鼠肺组织炎症因子表达、肺泡巨噬细胞凋亡率降低,肺组织Mtb感染及干酪样坏死缓解,Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活性降低(P<0.05)。pc-DNA-Fas可进一步激活Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活化,加重肺组织Mtb感染及干酪样坏死,促进肺组织炎症损伤及巨噬细胞凋亡,并减弱水飞蓟宾发挥的抗Fas/FasL活化、抗炎及抗巨噬细胞凋亡作用(P<0.05)。结论:水飞蓟宾可能通过抑制Fas/FasL信号通路发挥抗Mtb感染、抗肺组织巨噬细胞凋亡及抗肺部炎症损伤作用。

肿瘤细胞中FAS介导的非凋亡信号通路研究进展

FAS是一种在多种细胞中表达的膜蛋白受体,与其配体FASL结合后激活细胞内下游信号,可导致一种细胞程序性死亡——凋亡。在很多细胞类型中,FAS诱导的凋亡是抑制或杀灭肿瘤细胞的重要因素。近年来发现,在某些细胞微环境条件或肿瘤类型中,FAS可激活与凋亡相反的生物学功能,包括促进细胞的增生和迁移等。但目前对于FAS介导的非凋亡通路的作用和机理尚不完全清楚,与经典凋亡通路的关系也缺乏研究,其在什么条件下、在哪些细胞或肿瘤类型中起作用也有待深入调查。简述了FAS信号在肿瘤细胞中介导的促增生作用,重点总结了其介导非凋亡通路中的几个关键因子以及在临床肿瘤治疗上的应用,以期为肿瘤的临床新治疗方法和新药研究提供思路。

Fas/FasL传导通路研究电针对慢性萎缩性胃炎小鼠的作用机制

目的探讨电针合募配穴对慢性萎缩性胃炎小鼠Fas/FasL传导通路的影响,揭示电针治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制。方法制备慢性萎缩性胃炎小鼠模型。将已成模的慢性萎缩性胃炎小鼠分为模型组10只、普通针刺组、电针组各20只,并另设10只为对照组。对照组、模型组不进行操作;普通针刺组予合募配穴(中脘-足三里)普通针刺治疗;电针组予合募配穴(中脘-足三里)电针治疗,采用免疫组化法检测各组小鼠胃组织中Fas和FasL的表达水平。结果治疗前普通针刺组、电针组、模型组的体质量都显著低于对照组(P<0.05),治疗14 d后普通针刺组、电针组的体质量高于模型组(P<0.05),电针组治疗14 d后的体质量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前普通针刺组、电针组、模型组的血清IL-6、IL-1β含量都高于对照组(P<0.05),治疗14 d后普通针刺组、电针组的血清IL-6、IL-1β含量低于模型组(P<0.05),电针组治疗14 d后的血清IL-6、IL-1β含量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗14 d后普通针刺组、电针组、对照组的胃黏膜组织病理形态评分与黏膜组织Fas蛋白、FasL蛋白相对表达水平都低于模型组(P<0.05),电针组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针在慢性萎缩性胃炎小鼠的应用能介导Fas/FasL传导通路的表达,抑制血清IL-6、IL-1β的表达,促进恢复小鼠的体质量,能改善小鼠的胃黏膜病理状况。

六味降脂汤对NAFLD大鼠肝脏脂肪酸代谢及LXRα-SREBP-1c-FAS信号通路的影响

目的 探究六味降脂汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的干预作用及其机制。方法 42只大鼠随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组(0.9 mg/kg)及六味降脂汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g/kg),给予高脂饲料合并高脂乳剂喂养6周建立NAFLD大鼠模型,造模成功后予相应药物干预2周后,检测血清ALT、AST、SOD活性及MDA、NEFA水平,检测肝组织TC、TG水平并计算肝脏指数,HE和油红O染色观察肝组织病理学改变,RT-qPCR和免疫组化(IHC)法检测肝组织LXRα、SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠肝组织存在广泛较大的脂肪滴,脂肪变性明显,血清ALT、AST活性,MDA、NEFA水平及肝组织TC、TG水平,LXRα、SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达均升高(P<0.01),肝组织SOD活性降低(P<0.01);与模型组比较,六味降脂汤各剂量组大鼠肝脏脂质沉积得到改善,脂肪变性程度减轻,血清ALT、AST活性,MDA、NEFA水平及肝组织TC、TG水平,LXRα、SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),肝组织SOD活性升高(P<0.05,P<0.01)。结论 六味降脂汤具有调控肝脏脂肪酸代谢,减轻氧化应激反应,从而治疗NAFLD的作用,其潜在机制可能与抑制SREBP-1c-FAS信号通路有关。

基于LXRα/SREBP-1c/FAS通路探讨茵杞调脂饮对代谢相关脂肪性肝病模型大鼠的治疗机制

目的:探索茵杞调脂饮对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型大鼠的干预机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组和造模组,分别给予普通饲料、高脂饲料喂养12周。确认MAFLD造模成功后造模组大鼠随机分为模型组、阳性药物组(每日给予水飞蓟宾18.75 mg/kg)和茵杞调脂饮低、中、高剂量组(每日给药剂量分别为9.51 g/kg、19.02 g/kg、38.04 g/kg),每组8只,正常组也取8只,各组每日分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续8周。灌胃期间茵杞调脂饮低剂量组大鼠死亡1只。检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量及肝组织甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,分别采用苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察各组大鼠肝组织脂肪变性程度,采用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)法检测各组大鼠肝组织X受体α(LXRα)、胆固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)蛋白表达。结果:病理形态学结果显示,模型组大鼠肝小叶结构破坏,肝细胞肿胀,细胞间界限模糊,可见明显脂滴;各给药组大鼠肝细胞脂肪变性明显减轻,脂滴数量和面积减少,以茵杞调脂饮高剂量组改善最为明显。模型组大鼠血清ALT、AST含量和肝组织TG、FFA、TNF-α水平显著高于正常组(P<0.01),肝组织SOD、GSH水平显著低于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述指标均较模型组明显改善(P<0.05,P<0.01),其中茵杞调脂饮高剂量组上述指标改善程度明显优于阳性药物组,中药各剂量对上述指标的改善表现出一定的剂量依赖性。模型组大鼠肝组织LXRα、SREBP-1c、FAS蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),其中茵杞调脂饮高剂量组LXRα、FAS蛋白表达显著低于阳性药物组(P<0.05),中药各剂量对上述蛋白表达的调节作用表现出一定的剂量依赖性。结论:茵杞调脂饮能改善MAFLD模型大鼠肝组织病理形态学表现,减少脂质沉积,减轻肝细胞损害,其机制可能与调节LXRα/SREBP-1c/FAS通路有关。

基于PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路探讨芪黄疽愈方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/肝X受体(LXR)α/三磷酸腺甘结合盒转运体(ABC)A1信号通路探讨芪黄疽愈方影响对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成及其作用机制。方法 选取25只C57BL/6小鼠作为空白组给予普通饲料喂饲配合生理盐水灌胃,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只)给予高脂饲料喂饲配合对应药物灌胃,12 w后通过主动脉苏木素-伊红(HE)染色证实造模成功,通过小鼠状态了解小鼠一般状况;主动脉HE染色、油红O染色观察动脉硬化及脂质沉积情况;肝脏HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化、红染脂滴情况,并通过Western印迹、聚合酶链反应(PCR)检测PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达情况。结果 空白组皮毛水润光泽,精神状态良好,活跃,饮食饮水正常;模型组精神萎靡,皮毛晦暗,倦怠懒动,饮食差,饮水正常;与模型组相比,中药组及对照组给药后各症状均有不同程度改善。各组主动脉HE、油红O染色显示,空白组主动脉切片未见AS斑块,主动脉大体标本未见明显红染脂质;与空白组相比,模型组主动脉切片可见斑块,大体标本可见明显红染脂质;与模型组相比,中药组及对照组动脉切片中AS斑块面积较小,大体标本中红染脂质面积较小。小鼠肝脏HE、油红O染色显示,空白组肝细胞结构正常,细胞核位于细胞中央,细胞沿中央静脉为中心向四周放射排列,未见脂肪变性;油红O未见红染脂质;与空白组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞内可见形态不同、大小不等、数量不一的脂滴空泡,油红O切片可见大量红染脂质。与模型组比较,对照组、中药组肝脏病变程度减轻,肝细胞结构大部分清晰可见,脂滴数量减少,油红O红染脂质明显减少。Western印迹检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白的表达;与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组均显著升高(P<0.05)。PCR检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA的表达,与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组显著升高(P<0.05)。结论 芪黄疽愈方能够影响小鼠动脉硬化,升高肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达,调节肝脏脂质代谢,促进胆固醇逆转运,延缓AS进展。

二至天癸颗粒对肾气虚不孕患者颗粒细胞Fas通路的影响

目的:探讨补肾益天癸之二至天癸颗粒对肾气虚不孕患者颗粒细胞Fas通路的影响。方法:分析2013年12月—2015年9月就诊于山东中医药大学附属医院生殖与遗传中心,符合病例选择标准的肾气虚不孕症患者72例,随机分为治疗组(二至天癸颗粒+IVF标准长方案)和对照组(安慰剂+IVF标准长方案),取卵日收集卵泡GC,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测颗粒细胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,实时荧光定量PCR测定mRNA含量,观察组间差异。结果:两组患者GC中均有Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3的mRNA和蛋白表达,且在治疗组的表达均低于对照组(P<0.05);与未妊娠者相比,妊娠者GCFas L、Fas、Caspase8、Caspase3的mRNA和蛋白表达均较低(P<0.05)。结论:二至天癸颗粒可以下调Fas通路四个蛋白的表达。推测这可能是其抑制颗粒细胞凋亡,提高卵细胞质量和胚胎质量从而提高临床妊娠率的机制之一。

Fas/FasL通路对镉激活PC12细胞MAPK通路的影响

旨在研究Fas/FasL通路对镉激活PC12细胞MAPK通路的影响,用10μmol L^(-1)醋酸镉(CdAc2)分别处理插入非特异性序列PC12细胞与Fas基因沉默PC12细胞12 h;用10μmol·L^(-1)CdAc2与40μmol·L^(-1) Z-IETD-FMK(caspase-8特异性抑制剂)单独或联合处理PC12细胞12 h。通过Western blot检测Fas/FasL通路相关蛋白Fas、FasL、Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Cleaved caspase-8、死亡结构域相关蛋白(Daxx)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)的表达与MAPK通路相关蛋白ERK1/2、JNK1/2、p-ERK1/2、p-JNK1/2的表达;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,Fas shRNA慢病毒极显著抑制镉引起的PC12细胞Fas/FasL通路相关蛋白表达量和凋亡率的升高(P<0.01),缓解镉引起的PC12细胞凋亡形态学变化;Fas shRNA与Z-IETD-FMK均能够极显著抑制镉引起的PC12细胞MAPK通路相关蛋白ERK1/2与JNK1/2磷酸化水平升高(P<0.01)。综上表明,Fas/FasL通路调控MAPK通路参与镉致PC12细胞凋亡。

姜黄素通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的探讨姜黄素通过Fas/Fas L信号通路对胶质瘤细胞的增殖及凋亡产生影响。方法以人胶质细胞瘤U87细胞为研究对象,采用细胞毒性试验检测姜黄素对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验(colony formation assay)观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响;流式细胞术(FCM)及Caspase-3活性检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、Fas L m RNA和蛋白的表达水平。结果随着姜黄素浓度增加,胶质瘤细胞系的细胞毒性作用也增强(P<0.05),24 h的IC50为14.28μmol/L。流式细胞术检测姜黄素阻滞胶质瘤细胞周期于G2/M期。姜黄素作用胶质瘤后Fas和Fas L在m RNA和蛋白表达水平上升(P<0.05)。姜黄素对胶质瘤细胞的增殖及细胞集落形成有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论姜黄素可能通过上调Fas/Fas L通路抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡。

华蟾素联合多柔比星通过Fas/线粒体通路促进肺癌A549细胞凋亡

目的探究华蟾素联合多柔比星对肺癌A549细胞凋亡及Fas/线粒体通路的影响。方法用不同浓度华蟾素(0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L)、不同浓度多柔比星(0、0. 25、0. 5、1. 0、2. 0μg/m L)或联合用药(多柔比星0. 5μg/m L分别与华蟾素0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L联合使用)处理A549细胞。四甲基偶氮唑(MTT)法检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞凋亡的影响;蛋白质印迹(Western blot)技术检测A549细胞Fas/线粒体凋亡通路相关蛋白的表达变化。结果 MTT结果显示,华蟾素和多柔比星对A549细胞均具有增殖抑制作用(P <0. 05),且呈时间-剂量依赖关系。0. 5μg/m L多柔比星分别与0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L华蟾素联合处理下,A549细胞的增殖抑制率呈时间-剂量依赖性。(2)流式细胞仪结果显示,与空白对照组比较,单用0. 4μg/m L华蟾素或0. 5μg/m L多柔比星处理后A549细胞凋亡率显著上升(P <0. 05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞凋亡率显著上升(P <0. 05)。(3)Western blot结果显示,与空白对照组比较,单用0. 4μg/m L华蟾素或0. 5μg/m L多柔比星处理后A549细胞Fas、Fas L、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P <0. 05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞Fas、Fas L、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P <0. 05)。结论华蟾素联合多柔比星可显著促进肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与Fas/线粒体凋亡通路强化有关。

氧化应激通过Fas/FasL信号通路调控奶牛子宫内膜细胞凋亡

胚胎早期死亡及流产严重影响母牛的繁殖性能,造成极大的经济损失。本研究利用不同浓度双氧水(H_(2)O_(2))处理子宫内膜细胞6 h,通过流式细胞仪、酶标仪分别进行细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值检测,建立子宫内膜细胞氧化应激模型。在此基础上,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和生长周期,利用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Fas/FasL信号通路关键基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)抑制子宫内膜细胞中Fas基因表达,进一步验证Fas/FasL凋亡通路是否参与氧化应激诱导的子宫内膜细胞凋亡。所有试验都重复3次以上。结果发现,利用200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理子宫内膜细胞6 h,细胞内ROS阳性水平急剧增加(P<0.05),SOD和CAT活性以及GSH与GSSG比值都显著降低(P<0.05),说明H_(2)O_(2)处理对子宫内膜细胞造成氧化应激损伤。在此处理条件下,生长周期中S期比例显著降低(P<0.05),凋亡比例显著提高(P<0.05);Fas/FasL凋亡通路中关键基因Fas、Caspase 8和Caspase 3的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);培养液中FasL浓度以及Fas、Caspase 8和Caspase 3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。进一步研究发现,抑制Fas基因表达在一定程度上降低了氧化应激诱导的细胞凋亡比例以及Fas/FasL凋亡通路中关键基因的表达水平。总之,本研究结果表明,氧化应激通过激活Fas/FasL信号通路促进奶牛子宫内膜细胞凋亡,这为解释氧化应激对子宫内膜细胞的不利影响提供了新的见解。

Fas通路通过激活ERK1/2通路在结肠癌细胞中诱导上皮-间质转化＊

目的:探索Fas通路在结肠癌细胞中诱导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:分别对结肠癌细胞SW480及DLD1予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理。作用3d后分别提取实验组和对照组细胞的总蛋白、总RNA,并进行Western blot、RT-PCR检测,分析FasL作用下结肠癌细胞的上皮标记物、间质标记物以及EMT相关的转录因子的表达状况。在低剂量FasL作用3d后行免疫荧光检测,观察EMT相关转录因子在细胞内的分布情况。建立稳定敲除Snail及Twist的结肠癌细胞系,再予以低剂量FasL刺激,采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程。对结肠癌细胞SW480予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理后,通过Western blot检测实验组和对照组细胞ERK1/2通路及p38通路的激活状况。对SW480细胞进行信号通路抑制剂的预处理,再予以低剂量FasL刺激,采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程,从而探索Fas通路诱导EMT的可能机制。结果:低剂量FasL可使结肠癌SW480和DLD1细胞的上皮标记物表达下调,间质标记物表达上调,EMT相关转录因子在细胞核周聚集,细胞发生梭形改变,提示发生EMT。而将结肠癌细胞的Snail或Twist基因敲除后,FasL的上述诱导作用明显减弱。低剂量FasL可激活结肠癌细胞的ERK1/2通路激活,而ERK抑制剂可减弱FasL诱导的EMT过程。结论:Fas通路可能通过激活ERK1/2通路诱导结肠癌细胞发生EMT。

β-榄香烯通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的探讨β-榄香烯通过Fas/Fas L信号通路对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以人胶质母细胞瘤U87细胞系为研究对象,分为空白对照组和β-榄香烯实验组。采用细胞毒性试验分析β-榄香烯对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测β-榄香烯对胶质瘤的增殖能力的影响;流式细胞仪(FCM)及Caspase活性试剂盒检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、Fas L的表达水平。结果胶质瘤细胞系的细胞毒性作用随着β-榄香烯浓度增加而增强,IC50为45.73μg/m L;流式细胞仪分析β-榄香烯作用于U87细胞,阻滞周期于G1/S期;β-榄香烯作用于U87胶质瘤后Fas和Fas L的mRNA和蛋白表达水平上升;β-榄香烯作用于胶质瘤细胞有抑制增殖作用,并呈浓度和时间依赖性。结论β-榄香烯可能通过上调Fas/Fas L通路的表达水平,抑制胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡。

Fas通路的激活促进结肠癌细胞迁移侵袭

目的探讨Fas通路激活对结肠癌细胞SW480和DLD1产生的非凋亡效应。方法流式细胞学检测结肠癌SW480及DLD1细胞系的Fas、FasL、抗凋亡蛋白c-FLIP、Bcl-2、Bcl-xl、XIAP等在细胞膜上的表达水平;对结肠癌SW480及DLD1细胞系予以梯度浓度(0ng/ml、12.5ng/ml、25ng/ml、50ng/ml)的FasL刺激,计数并比较各组细胞的增殖速率变化;对结肠癌SW480及DLD1细胞系予以低剂量FasL处理,分别对实验组和对照组进行细胞增殖速率及迁移侵袭能力测试,探讨低剂量FasL刺激对结肠癌细胞活力的影响;稳定敲除SW480和DLD1细胞的Fas基因表达,重复上述实验,以明确低剂量FasL刺激对结肠癌细胞活力的影响是否依赖于Fas通路的激活。结果 SW480及DLD1细胞系中均可检测到中等程度的Fas表达及抗凋亡蛋白FLIP、Bcl-2的表达,未检测到FasL表达,在SW480中可测到Bcl-xl表达;低剂量FasL不影响结肠癌SW480和DLD1细胞的增殖速率,但可促进两种细胞的迁移侵袭能力;稳定敲除Fas基因后,低剂量FasL对结肠癌细胞迁移侵袭能力的促进作用受到抑制。结论低剂量FasL可激活Fas通路的非凋亡途径从而增强结肠癌SW480和DLD1细胞的迁移侵袭能力。

Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

本研究旨在探讨二烯丙基二硫化合物(diallyl disulfide,DADS)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导白血病K562细胞凋亡作用中机制。以K562细胞为研究外培养的细胞分为空白组(2组)及药物处理组(4组),共6小组。空白组包括细胞对照组及溶媒对照组,药物处理组加入不同浓度DADS,DADS终浓度为10、20、40、80mg/L。取对数生长期细胞进行实验。采用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度、不同时间DADS对K562细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测Fas、FasLmRNA表达变化。结果表明,DADS在浓度为10、20、40mg/L时,K562细胞以凋亡效应为主。K562细胞出现细胞核缩小,染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征;同一时间组(作用细胞24小时),DADS浓度从10mg/L增至40mg/L,K562细胞的凋亡率由(2.10±0.25)%增至(37.94±0.87)%;同一浓度组(40mg/L),DADS作用时间从24小时增至72小时,K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)%增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增高(p<0.01),呈现K562细胞的凋亡效用与药物浓度、时间明显依赖关系;作用48小时后,FasmRNA表达水平较对照组上调;FasLmRNA较对照组下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。当DADS浓度为80mg/L时,K562细胞以坏死效应为主。结论 :DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,下调FasL,激活Fas/FasL死亡受体通路有关。