27-羟基胆固醇激活LXR信号通路调节肺癌细胞的增殖

目的:探讨胆固醇代谢产物27-羟基胆固醇(27-OHC)对肺癌细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度(0、0.3125、0.625、1.25、2.5、5和10μmol/L)的27-OHC处理人肺癌A549细胞24～48 h,随后使用细胞计数试剂盒(CCK-8法)评估细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,Ed U实验检测细胞增殖状况,采用总胆固醇检测试剂盒检测细胞内胆固醇水平,real-time PCR及Western blot法分别检测胆固醇代谢相关分子的表达。结果:27-OHC以剂量和时间依赖性显著降低A549肺癌细胞的活力(P <0.01),抑制细胞增殖(P <0.05)。27-OHC通过上调肝X受体(LXR)信号通路下游靶蛋白ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达,促进细胞内胆固醇的外排,同时下调低密度脂蛋白受体(LDLR)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CR)的表达,减少胆固醇的摄入和从头合成,导致细胞内胆固醇水平降低,细胞活力下降(P <0.01)。此外,LXR通路被5μmol/L GSK2033部分阻断后,27-OHC对A549细胞活力的抑制作用显著减弱(P <0.05)。结论:27-OHC通过激活LXR通路抑制A549细胞增殖。

四生降脂疏肝汤诱导LXRα-ABCA1信号通路减少非酒精性脂肪性肝病大鼠的脂质沉积

目的通过非酒精性脂肪肝大鼠模型探究四生降脂疏肝汤改善肝脏脂质沉积的作用机制,为四生降脂疏肝汤治疗NAFLD提供实验依据。方法使用高脂饲料构建NAFLD大鼠模型,实验分为正常组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组,HE染色观察肝脏的油脂蓄积情况,并测定血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、TNF-α、IL-13含量。使用Western blotting检测四生降脂疏肝汤对LXRα和ABCA1蛋白影响。结果大体及HE染色观察肝脏显示四生降脂疏肝汤显著降低了大鼠肝脏的脂质蓄积,抑制TNF-α分泌(P<0.05)、促进IL-13分泌(P<0.01),并降低大鼠血清中LDL-C的含量(P<0.05)。四生降脂疏肝汤增加了LXRα和ABCA1蛋白表达水平(P<0.01)。结论四生降脂疏肝汤可显著改善大鼠肝脏脂质蓄积,激活LXRα-ABCA1信号通路促进脂质外排可能是四生降脂疏肝汤缓解NAFLD的重要机制。

氧化性低密度脂蛋白对肝细胞脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响

目的探讨氧化性低密度脂蛋白(oxLDL)对肝细胞内脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响。方法实验分为对照组、高脂(HF)组、oxLDL组、HF+oxLDL组和能量限制(CR)组。将HepG2细胞培养于DMEM培养基中,培养48h后用油红O染色法定性观察和测定各组OD值、细胞内脂肪积累,并用RT-PCR法检测各组SIRT1、肝X受体(LXR)及其靶基因ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达水平。结果与对照组比较,HF组、oxLDL组和HF+oxLDL组细胞内脂肪含量均增加(P<0.05),CR组脂肪含量下降(P<0.05)。oxLDL组与对照组比较,SIRT1、LXRα和ABCG1mRNA表达均增加,其中SIRT1和LXRα差异有统计学意义;HF组SIRT1和LXRα表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而ABCG1显著降低(P<0.05);HF+oxLDL组LXRα和ABCG1表达均显著降低(P<0.05),而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义;CR组LXRα和ABCG1表达均显著增加(P<0.05),然而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义。结论 oxLDL可能会促进脂肪肝的形成。

健脾祛痰方通过调节PPARγ/LXRα/ABCA1通路干预血脂异常的效应机制

目的探究健脾祛痰方通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferatoractivated receptor gamma,PPARγ)-肝X受体α(liver Xreceptor alpha,LXRα)-三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)信号通路干预血脂异常的作用机制。方法采用随机分组法将18只SPF级雄性SD大鼠分为造模组(n=12)和对照组(n=6)。造模组饲喂高脂饲料,对照组饲喂普通饲料。造模成功的大鼠随机分为模型组(n=6)和健脾祛痰方组(n=6)。健脾祛痰方组予中药健脾祛痰方颗粒剂灌胃,对照组、模型组予生理盐水灌胃,干预4周。4周后检测各组大鼠血清胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的水平;油红o染色观察各组大鼠肝脏脂质沉积变化;实时荧光定量PCR技术及免疫印迹实验检测各组大鼠肝脏组织中PPARγ、LXRɑ、ABCA1、B族Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-B1)、胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肝脏出现脂质沉积;血清TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.05)、HDL-C水平有改变,统计学统计显示变化不显著(P>0.05);肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、SR-B1、CYP7A1 mRNA及蛋白表达下降(P<0.05)。对比模型组,健脾祛痰方组大鼠肝脏脂质沉积面积减少;肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、SR-B1、CYP7A1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。干预前后比较,干预后健脾祛痰方组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平下降(P<0.05),HDL-C水平升高,差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药健脾祛痰方可能通过调控PPARγ-LXRα-ABCA1信号通路改善高脂饮食诱导的血脂异常。

大黄素诱导LXRα-ABCA1信号通路减少非酒精性脂肪性肝病细胞模型的脂质沉积

目的通过体外模型探究大黄素改善肝细胞脂质沉积的作用机制,为大黄素治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)提供实验依据。方法使用油酸和棕榈酸构建肝细胞脂肪变性模型,实验分为正常对照组、模型对照组、大黄素组和阿托伐他汀钙(阳性对照)组,油红O染色和尼罗红染色分析细胞的油脂蓄积情况,并测定细胞中三酰甘油(TG)和胆固醇(TC)含量。使用RT-qPCR和Western blotting检测大黄素对LXRα和ABCA1的mRNA和蛋白影响,使用荧光素酶报告基因考察大黄素对LXRα-ABCA1通路的作用,使用RNA干扰实验敲低LXRα考察大黄素通过LXRα-ABCA1通路减少细胞脂质的机制。结果大黄素显著降低了细胞的脂质蓄积,并降低细胞内TG和TC含量(P<0.05)。大黄素增加了LXRα和ABCA1基因以及蛋白表达水平,并提高了LXRα-ABCA1双荧光素酶系统的相对荧光值(P<0.05)。敲低LXRα后,大黄素减少细胞脂质蓄积的作用显著降低。结论大黄素可显著改善体外细胞脂质蓄积,激活LXRα-ABCA1信号通路促进脂质外排可能是大黄素缓解NAFLD的重要机制。

雷公藤红素通过激活LXRα/ABCA1通路和细胞自噬抑制巨噬细胞脂质蓄积

巨噬细胞源性泡沫细胞转化被认为是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成与发展的早期变化,其细胞内蓄积的过量脂质可通过促进血管内膜生长与坏死核形成,继而诱发斑块破裂及血栓形成等严重后果.近期研究发现,雷公藤红素可显著调节脂质代谢,对泡沫细胞转化进程具有潜在的治疗意义.本研究表明,雷公藤红素(Celasrol,CeT)呈浓度依赖性减少巨噬细胞Raw264.7内的脂滴积蓄,并上调胆固醇转运关键分子ABCA1、LXRA蛋白质表达.进一步研究显示,CeT可逆转ABCA1敲低介导的脂质蓄积与ABCA1表达下调.此外,CeT处理Raw264.7细胞24 h时观察到自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ增加、p62减少,且采用自噬抑制剂3MA可恢复细胞内脂质水平.综上,CeT可能通过上调LXRα/ABCA1信号及激活荷脂细胞自噬,抑制巨噬细胞内脂质蓄积.因此,深入探究CeT在巨噬细胞源性泡沫细胞转化及AS发生发展中的作用,是研究AS治疗新的着力点,并为药物干预提供新的靶点.

黄芩素调节PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路干预NAFLD大鼠肝功能和胰岛素抵抗研究

目的:探讨黄芩素调节过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)/肝X受体α(LXRα)/三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)信号通路对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝功能和胰岛素抵抗的影响。方法:通过高脂饲料喂养建立NAFLD大鼠模型,将造模后的大鼠随机分为模型组、双酚A-二甘氨酸醚(BADGE)组(PPARγ抑制剂,20 mg·kg^(-1)BADGE)、黄芩素组(50 mg·kg^(-1)黄芩素)、黄芩素+BADGE组(50 mg·kg^(-1)黄芩素+20 mg·kg^(-1)BADGE),10只/组,另取10只大鼠作为对照组。检测各组大鼠甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理状况;油红O染色检测肝脏脂质沉积情况;TUNEL染色测定肝细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(western blot)法检验肝组织中通路相关蛋白表达水平。结果:模型组与对照组相比,大鼠肝组织损伤严重,TC、TG、FINS、FPG、ALT、AST水平、NAS积分、脏器指数、HOMA-IR均显著增加(P<0.05),PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组相比,黄芩素组病理损伤得到改善,细胞凋亡明显减少,TC、TG、FINS、FPG、ALT、AST水平、NAS积分、脏器指数、HOMA-IR均显著下降(P<0.05),PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均增加(P<0.05);BADGE组大鼠细胞凋亡明显增多,TC、TG、FINS、FPG、ALT、AST水平、NAS积分、脏器指数、HOMA-IR均显著升高(P<0.05),PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均降低(P<0.05)。BADGE逆转了黄芩素对NAFLD大鼠的保护作用。结论:黄芩素可通过激活PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路,改善NAFLD大鼠肝功能受损和糖脂代谢异常,减轻胰岛素抵抗。

茯苓多糖改善HDL功能并通过PPARγ/LXRα/ABCA1抗AS机制研究

目的:探讨茯苓多糖改善HDL功能以及通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路防治AS的作用及机制研究。方法:将32只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、茯苓多糖组、辛伐他汀组,10只C57BL/6J作为正常组。模型组及药物干预组给予高脂饲料喂养,正常组给予普通饲料喂养。8周后,药物干预组每日灌胃相应药物,茯苓多糖组以0.2 g/(kg·d)灌胃,辛伐他汀组以2.275 mg/(kg·d)灌胃,正常组与模型组给予等量生理盐水。12周后,全自动生化仪检测血清三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE及油红O染色法观察肝脏脂质沉积情况;ELISA法检测血清SAA、S1P含量;Real-time RT-PCR法及Western blot法检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1、SR-B1 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低(P<0.05),肝脏可见脂质沉积,血清S1P含量、肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1、SR-B1 mRNA及蛋白表达显著降低,血清SAA含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,茯苓多糖组、辛伐他汀组血清中TC、TG、LDL-C显著降低,HDL-C显著升高(P<0.05),肝脏脂质沉积面积减少,血清S1P含量,肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1、SR-B1 mRNA及蛋白表达显著升高,血清SAA含量显著降低(P<0.05)。结论:茯苓多糖能够改善HDL功能,同时可通过胆固醇逆转运PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路防治AS。

基于LXRs/NF-κB信号通路对A型滑膜细胞的调控探讨壮骨健膝方的作用机制

目的观察壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的兔A型滑膜细胞肝X受体(LXRs)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨壮骨健膝方治疗膝骨关节炎(KOA)滑膜炎症的机制。方法制备壮骨健膝方含药血清并采用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-MS/MS)进行质量控制(龙胆苦苷885 ng/mL、阿魏酸185 ng/mL)。将兔A型滑膜细胞随机分为空白组和LPS组,LPS组经LPS诱导后建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后随机分为模型组、壮骨健膝方组、LXRα抑制剂组、核受体辅助抑制因子(N-CoR)抑制剂组,分别予以10%空白血清、10%含药血清、10%含药血清+LXRα抑制剂、10%含药血清+N-CoR抑制剂,空白组予10%空白血清干预。干预24 h后,收集各组细胞及上清液,Western Blot、RT-qPCR检测各组细胞中LXRα、N-CoR、P50、P65蛋白及m RNA的表达,ELISA检测各组上清液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及MMP-13含量。结果与空白组比较,模型组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均升高(P<0.01),LXRα、N-CoR蛋白与mRNA表达下降(P<0.01)。与模型组比较,壮骨健膝方组P50和P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P<0.01),LXRα、N-CoR蛋白与mRNA表达升高(P<0.01);LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P<0.01,P<0.05)。与壮骨健膝方组比较,LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组LXRα、N-CoR蛋白及mRNA表达下降(P<0.01),P50、P65蛋白及mRNA表达升高(P<0.01,P<0.05),两组IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13含量升高(P<0.01,P<0.05)。结论壮骨健膝方可通过上调LXRα和N-CoR蛋白及mRNA表达,下调P50、P65蛋白及mRNA表达,从而抑制LXRs/NF-κB信号通路的传导,减少下游炎症相关指标IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13的分泌,最终达到控制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。

淡豆豉异黄酮通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路改善动脉粥样硬化小鼠脂质代谢的作用

目的:通过卵巢切除结合高脂饲料喂养制备动脉粥样硬化小鼠模型,观察淡豆豉异黄酮(ISSP)对小鼠脂质代谢的影响,并从调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝X受体α/腺苷三磷酸结合盒转运体A1(PPARγ/LXRα/ABCA1)信号通路的角度进一步探讨其作用机制。方法:将50只载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、西药组(阿托伐他汀钙,3.03 mg·kg^(-1))、中药低、中、高剂量组(淡豆豉异黄酮,2.5、5、10 mg·kg^(-1)),每组10只,以手术切除双侧卵巢同时喂食高脂饲料的方法制备动脉粥样硬化模型小鼠,另取10只ApoE^(-/-)小鼠,以手术切除卵巢旁脂肪同时喂食高脂饲料的方法作为假手术组,其中部分小鼠因术后感染死亡,最终确定每组为6只小鼠,术后1周开始各组灌胃相应药物或等量生理盐水。12周后检测血清及肝脏组织中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)的含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量;苏木素-伊红(HE)及油红O染色观察主动脉斑块形成及肝脏脂质沉积情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α及IL-6含量显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);肝脏指数明显升高(P<0.05),肝脏脂肪空泡明显,脂质沉积显著,肝脏中TC、TG、NEFA含量显著增多(P<0.01);肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),ABCG1 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,服用阿托伐他汀钙和淡豆豉异黄酮中、高剂量组可使小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α和IL-6含量显著降低(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);肝脏指数显著降低(P<0.01),肝脏脂肪空泡及脂质沉积显著减少,肝脏中TC、TG、NEFA含量明显增多(P<0.05,P<0.01);肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:淡豆豉异黄酮可能通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路调节脂质代谢,减少血清炎症表达及肝脏脂质沉积从而改善动脉粥样斑块的形成。

补阳还五汤抗动脉粥样硬化的作用机制

目的 探讨补阳还五汤抗动脉粥样硬化作用机制。方法 将60只健康家兔随机分为正常对照组、模型组、立普妥组[5mg/(kg·d)]、补阳还五汤低、中、高剂量组[0.89g/(kg·d)、1.78g/(kg·d)、3.56g/(kg·d)],每组10只。造模成功后连续给药干预并观察8周。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组颈动脉血管的结构变化;采用酶联免疫吸附测定法检测各组相关炎症因子及抗炎因子的水平变化;采用蛋白免疫印迹法检测各组相关炎症信号通路的蛋白表达。结果 与正常对照组比较,模型组家兔血管壁组织结构明显紊乱,可见内皮细胞损伤及相关其它炎症反应;与模型对照组比较,各给药组动脉组织粥样硬化病理损伤均有不同程度改善;在炎症因子(IL-1β、TNF-α及MMP-9)表达方面,与正常对照组相比,模型对照组家兔的炎症因子表达量均有增加(P<0.05),而相关抗炎症因子IL-10、IL-4及TGF-β表达量呈下降水平(P<0.05);在与模型对照组相比较,阿托伐他汀组及补阳还五汤低剂量组、中剂量组和高剂量组中上述炎症因子的表达量都有降低(P<0.05),而相关抗炎因子的表达量显著增加(P<0.05);在炎症信号通路的检测中,与正常对照组相比较,NF-κB的蛋白表达量明显上升,而LXRα的蛋白表达量明显下降。与模型对照组相比较,阿托伐他汀组、补阳还五汤低剂量组、中剂量组和高剂量组中NF-κB的蛋白表达量明显降低,而LXRα的蛋白表达量都明显升高。结论 补阳还五汤对家兔动脉粥样硬化具有一定抑制作用,其作用机制可能通过降低炎症因子IL-1β、TNF-α及MMP-9的表达从而抑制炎症反应,上调IL-10、IL-4及TGF-β等抗炎因子水平,并多环节调控LXRα/NF-κB信号通路保护动脉血管免受炎症损伤有关。