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人LXR-LBD原核表达载体的构建及其在E.coli中的表达
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作者 巩艳 叶治家 +2 位作者 曹廷兵 彭家和 江渝 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第1期33-37,共5页
从正常中国人的肝脏组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的LXR-LBDcDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中国人的LXR-LBDcDNA序列与GeneBank报道的序列一致.把构建的pET28a-LXR-LBD质粒... 从正常中国人的肝脏组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的LXR-LBDcDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中国人的LXR-LBDcDNA序列与GeneBank报道的序列一致.把构建的pET28a-LXR-LBD质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达,Westernblot检测表达产物,在相对分子质量35kD处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在.在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90%以上. 展开更多
关键词 LXR LXR—LBD 克隆 表达
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